Gein Sergei V. - PhD, MD (Medicine), Professor, Department of Microbiology and Immunology; Deputy Director
614081, Perm, Golev str., 13
Phone: 7 (902) 831-77-05
Гейн Сергей Владимирович - д.м.н., профессор кафедры микробиологии и иммунологии; заместитель директора
614081, г. Пермь, ул. Голева, 13
Teл.: 8 (902) 831-77-05
Undergraduate Student, Faculty of Biology; Laboratory of Biochemistry of Development of Microorganisms
Perm
студент магистратуры биологического факультета; сотрудник лаборатории биохимии развития микроорганизмов
г. Пермь
Opioid peptides belong to one of most studied groups of regulatory peptides due to exerting extremely wide range of biological activities and play an important role in regulating homeostasis. The endogenous opioid system is involved in the functioning of diverse organs and systems, including the immune system. Currently, an immunomodulatory effect of the three major families of opioid peptides such as endorphins, enkephalins, dinorphins has been thoroughly described. Much less data are available about the endomorphin-related immunomodulatory effects. The aim of this work was to assess effects of endomorphin-1 on phagocytosis, production of reactive oxygen species and IL-1β by various subsets of peripheral blood innate immune cells in vitro. The leukocytes of obtained from peripheral venous blood of healthy volunteer donors aged 22 to 40 years were used in the study. Endomorphin-1 was used at concentrations of 10-6, 10-8, 10-10, 10-12 М. Blood leukocyte fraction was isolated from heparinized venous blood settled for 2 hours in a thermostat at 37 °С. The neutrophil fraction was isolated by centrifuging in of Ficoll-Urographin (ρ = 1.077) density gradient placing the upper layer of blood plasma with leukocytes. Assessment of leukocyte oxygen-dependent microbicidal activity was carried out by using the reaction of luminol-dependent chemiluminescence (LZHL) by using opsonized zymosan at concentration of 150 μg/ml; 10-5 M luminol was used to probe reaction magnitude. The separation of the mononuclear cell fraction was carried out by centrifuging in of Ficoll-Urographin (ρ = 1.077) density gradient. The monocyte fraction was isolated mechanically. To assess IL-1β production, mononuclear cells and monocytes were cultured for 24 hours followed by measuring its level with enzyme-linked immunosorbent assay. To evaluate monocytes and neutrophil phagocyte activity, FITC-labeled St.aureus uptake method was used. Statistical processing was performed with one-way ANOVA test and paired LSD criterion for post-hoc comparison, with significance set at p < 0.05. It was found that endomorphin-1 reduced leukocyte spontaneous, but not induced production of reactive oxygen species. In the neutrophil fraction, endomorphin-1 did not affect spontaneous oxygen dependent microbicidity and reduced intensity of the respiratory burst in stimulated neutrophils. In addition, it increased the percentage of monocyte phagocytosis and enhanced spontaneous IL-1β production by mononuclear cells. Thus, endomorphin-1 exhibited multidirectional effects on various parameters of innate immunity. Being typical to other groups of regulatory peptides, modality of endomorphin-1 related effects depended on cell fraction and presence of a stimulating cues.
Опиоидные пептиды являются одной из наиболее изучаемых групп регуляторных пептидов, поскольку проявляют чрезвычайно широкий спектр биологической активности и играют важную роль в регуляции гомеостаза. Эндогенная опиоидная система участвует в функционировании целого ряда органов и систем, в том числе и иммунной системы. В настоящее время наиболее подробно описано иммуномодулирующее действие трех основных семейств опиоидных пептидов: эндорфинов, энкефалинов, динорфинов. Гораздо меньше информации об иммуномодулирующих эффектах эндоморфинов. Цель настоящей работы – оценка влияния эндоморфина-1 на фагоцитоз, продукцию активных форм кислорода и IL-1β различными фракциями клеток врожденного иммунитета периферической крови in vitro. В качестве объекта исследования использовались лейкоциты периферической венозной крови здоровых доноров-добровольцев в возрасте от 22 до 40 лет. Эндоморфин-1 использовали в концентрациях 10-6, 10-8, 10-10, 10-12 М. Для получения фракции лейкоцитов гепаринизированную венозную кровь отстаивали в течение 2 ч в термостате при 37 °С. Выделение фракции нейтрофилов проводили на градиенте плотности фиколл-урографин (ρ = 1,077) путем наслаивания верхнего слоя плазмы крови с лейкоцитами. Оценку кислородзависимой микробицидной активности лейкоцитов осуществляли с использованием реакции люминолзависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ). В качестве индуктора использовали опсонизированный зимозан 150 мкг/мл, в качестве маркера выраженности реакции – люминол 10-5 М. Выделение фракции мононуклеарных клеток проводили на градиенте плотности фиколл-урографин (ρ = 1,077). Фракцию моноцитов выделяли механическим способом. Для оценки продукции IL-1β мононуклеары и моноциты культивировали в течение 24 ч, концентрацию цитокинов определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа. Для оценки поглотительной активности моноцитов и нейтрофилов использовали метод, основанный на поглощении FITCмеченого St.aureus. Для статистической обработки использовали однофакторный дисперсионный анализ и парный LSD-критерий для post-hoc сравнения, различия считались значимыми при p < 0,05. Установлено, что эндоморфин-1 снижал спонтанную продукцию активных форм кислорода и не влиял на стимулированную продукцию кислородных радикалов лейкоцитами. Во фракции нейтрофилов эндоморфин-1 не влиял на спонтанную кислородзависимую микробицидность и снижал интенсивность респираторного взрыва в стимулированных нейтрофилах. Пептид повышал процент фагоцитоза моноцитов и усиливал спонтанную продукцию IL-1β мононуклеарами. Таким образом, эндоморфин-1 оказывает разнонаправленное действие на различные показатели врожденного иммунитета. Как это свойственно и другим группам регуляторных пептидов, направленность эффектов эндоморфина зависела от состава клеточной фракции и присутствия стимулирующего сигнала.