PhD (Biology), Junior Research Associate, Laboratory of Cell Immunology and Biotechnology
кандидат биологических наук , младший научный сотрудник лаборатории клеточной иммунологии и биотехнологии
PhD (Biology), Senior Research Associate, Laboratory of Cell Immunology and Biotechnology
кандидат биологических наук , старший научный сотрудник лаборатории клеточной иммунологии и биотехнологии, Институт экологии и генетики микроорганизмов
PhD (Biology), Research Associate, Laboratory of Cell Immunology and Biotechnology
кандидат биологических наук , научный сотрудник лаборатории клеточной иммунологии и биотехнологии
PhD, MD (Biology), Head, Laboratory of Cell Immunology and Biotechnology
доктор биологических наук , заведующий лабораторией клеточной иммунологии и биотехнологии
The aim of the study was to optimize the conditions for a model immunoassay in the immunofiltration format using diagnostic reagents based on horseradish peroxidase. Residual blood serum samples from patients in the “red” zone with a verified diagnosis of a new coronavirus infection were used as positive sera, and blood sera obtained before 2019 were used as negative samples. The procedure of immunofiltration analysis was carried out using a pool of negative and positive blood sera. Studies were carried out to optimize the analysis procedure and increase the significant characteristics of the test. Results. It has been shown that the addition of sodium dodecyl sulfate to a final concentration of 50 μM in the substrate buffer makes it possible to achieve a higher analytical signal and a stable result 10 minutes after the end of the analysis procedure. Such conditions of immunofiltration analysis as dilutions of the diagnostic reagent, the volume of the introduced sample and the amount of the S-protein of the coronavirus applied to the nitrocellulose membrane were optimized. It has been determined that using immunofiltration analysis it is possible to detect antibodies against the coronavirus S-protein in a dilution of a serum sample of more than 1/1000. The results of immunofiltration analysis reproduce the results of ELISA.
Целью исследования явилась оптимизация условий для модельного иммуноанализа в формате иммунофильтрации с использованием диагностических реагентов на основе пероксидазы хрена. В качестве положительных сывороток в работе использовали остаточные образцы сыворотки крови пациентов «красной» зоны, с верифицированным диагнозом новой коронавирусной инфекции, в качестве отрицательных образцов были использованы сыворотки крови, полученные до 2019 года. Процедуру иммунофильтрационного анализа осуществляли с применением пула отрицательных и положительных сывороток крови.Были проведены исследования, опитимизирующие процедуру анализа и повышающие значимые характеристики теста. Результаты. Показано, что добавление додецилсульфата натрия до конечной концентрации 50 мкМ в субстратный буфер позволяет достичь более высокого аналитического сигнала и стабильного результата спустя 10 минут после окончания процедуры анализа. Оптимизированы такие условия иммунофильтрационного анализа как разведения диагностического реагента, объем вносимого образца и количество S-белка коронавируса, наносимого на нитроцеллюлозную мембрану. Определено, что с помощью иммунофильтрационного анализа возможно определение антител против S-белка коронавируса в разведении образца сыворотки более чем 1/1000. Результаты иммунофильтрационного анализа воспроизводят результаты ИФА.