The article presents an experimental study of immunotropic activity of a new compound, a metabiotic, based on metabolites (biologically active substances) produced by a of saprophytic Bacillus subtilis B-9909 strain, being safe for health and standardized at Russian National Collection of Industrial Microorganisms (RNCIM). The aim of our study was to experimentally evaluate the immunotropic effects of metabolites produced by the probiotic Bacillus subtilis B-9909 upon the parameters of cellular immunity tested in the animal model of induced toxic liver damage. The metabolites were isolated from the cultural liquid of Bacillus subtilis culture (RNCIM strain B-9909) during its deep cultivation in a medium containing hydrochloric acid hydrolyzate of soy flour, or pancreatic hydrolyzate of casein. At 16-18 hours of cultivation, the cells were in the exponential growth phase. The indices of cellular status were studied in experimental groups of animals, when assessing therapeutic efficacy of an experimental metabiotic sample, as compared to a group of laboratory animals treated with the reference drug (ursosan). We assessed the quantitative indicators of blood as follows: determination of phagocytic activity (FA) of peripheral blood neutrophils; measurement of metabolic activity in peripheral blood neutrophils by means of NBT-test; quantitative determination of T and B lymphocytes; the number of antibody-forming cells (AFC). Liver damage was studied in a model of acute toxic hepatitis in albino rats. Experimental toxic hepatitis was induced by 40% solution of CCl4 in vaseline oil injected intragastrically for 2 weeks at the dose of 0.2 g/kg. The results of experimental studies showed activation of phagocytic activity by peripheral blood neutrophils at the early terms of experiment, being also confirmed by the results of NBT-testing. Moreover, at the early observation terms, a significantly increased representation of T and B lymphocyte populations as well as AFC numbers, were revealed thus suggesting activation of all components of cellular immunity in response to the carbon tetrachloride toxicity. Thus, the reported studies on the cellular status of laboratory animals treated with metabolites produced by probiotic microorganisms of the genus Bacillus subtilis (B-9909) on laboratory animals with toxic liver damage allow us to conclude that the test sample of this metabiotic preparation exerts a significant immunomodulatory effect, when compared with ursosan. This evidence allows us to consider this compound a promising candidate drug for a new hepatoprotector with immunotropic effect.
Настоящая публикация посвящена вопросам экспериментального изучения иммуннотропной активности нового соединения – метабиотика, на основе метаболитов (биологически активных веществ, БАВ), продуцируемых сапрофитным и безопасным стандартизированным штаммом ВКПМ Bacillus subtilis B-9909. Цель исследования – экспериментальная оценка иммунотропного действия метаболитов, продуцируемых пробиотическими микроорганизмами штамма ВКПМ Bacillus subtilis В-9909 на показатели клеточного иммунитета у лабораторных животных при моделировании у них токсического поражения печени. Метаболиты выделяли из культуральной жидкости бактериальной культуры Bacillus subtilis, штамм ВКПМ В-9909, при его глубинном культивировании в среде, состоящей из соляно-кислотного гидролизата соевой муки или панкреатического гидролизата казеина. Культура в это время находилась в конце экспоненциальной фазы роста (16-18 часов культивирования). Исследование показателей клеточного статуса у экспериментальных групп животных при оценке терапевтической эффективности экспериментального образца метабиотика, по отношению к группе лабораторных животных, получавших препарат сравнения урсосан, проводили путем определения таких количественных показателей сыворотки крови, как: количественное определение фагоцитарной активности (ФА) нейтрофилов периферической крови; определение метаболической активности нейтрофилов периферической крови в НСТ-тесте; количественное определение Т- и В-лимфоцитов; количество антителообразующих клеток (АОК). Поражение печени изучали путем моделирования острого токсического гепатита у белых крыс. Экспериментальный токсический гепатит моделировали на лабораторных животных – белых крысах. Внутрижелудочно вводили 40%-ный раствор CCl4 в вазелиновом масле в течение 2 недель из расчета 0,2 г/кг. Полученные результаты экспериментальных исследований свидетельствуют, что об активации фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в ранние сроки эксперимента, что подтверждается данными, полученными в НСТ-тесте. Одновременно, в ранние сроки эксперимента значительно выросло количественное представление популяций Т- и В-лимфоцитов, а также количество АОК, что говорит об активации всех звеньев клеточного иммунитета, в ответ на токсическое воздействие четыреххлористого углерода. Таким образом, проведенные исследования по изучению клеточного статуса лабораторных животных, получавших метаболиты, продуцируемых пробиотическими микроорганизмами рода Bacillus subtilis В-9909 на лабораторных животных при моделировании у них токсического поражения, дают основания выполнить заключение о наличии у испытуемого образца метабиотика существенного иммуномодулирующего эффекта, в сравнении с урсосаном. Все вышеизложенное позволяет рекомендовать данное соединение, как перспективный лекарственный кандидат нового гепатопротектора с иммунотропным эффектом.