Оценка популяционного и субпопуляционного спектра лимфоцитов у пациентов с острым коронарным синдромом

Полный текст

Введение

На данный момент среди неинфекционных заболеваний лидирующие позиции занимает ишемическая болезнь сердца (ИБС). Одной из частых инвалидизирующих состояний у больных с ИБС являются перенесенные острые инфаркты миокарда (ОИМ), высокие функциональные классы стенокардии. Среди лиц трудоспособного возраста большую роль в структуре смертности занимают ОИМ и инсульты. В основе ИБС в подавляющем большинстве случаев лежит стенозирующий коронарный атеросклероз. В работах Rao V.H. и соавт. [9] показано, что в состав атеросклеротических бляшек входят гладко-мышечные клетки, Т-лимфоциты, макрофаги. При этом в интиме клеток сосудов откладывается кальций, холестерин, липиды. В исследовании Karadimou G. и соавт. [6] представлено, что при инфильтрации зоны атеросклеротического поражения Т-лимфоцитами, макрофагами может быть ОИМ или ишемический инсульт. С.Г. Щербак и соавт. [4] показали, что в генезе атеросклероза может играть значимую роль как врожденный, так и приобретенный иммунитет. В исследованиях Grufman H. и соавт. [5] было продемонстрировано, что при атеросклерозе существует неинфекционный воспалительный процесс, который приводит к отеку, инфильтрации иммунными клетками бляшек сосудов. При увеличении толщины интимо-медиального слоя наблюдается увеличение CD3⁺, CD4⁺, CD45RA^-CD45RO⁺CCR7^- и уменьшение числа нативных Т-лимфоцитов, что позиционируется как ранний признак атеросклероза, что послужило одним из выводов мультиэтнического исследования атеросклероза – проиллюстрированого в работе Olson N.S. и соавт. [8].

Частота и профиль субпопуляций лимфоцитов в коронарной артерии были исследованы Luberas N. и соавт. у 33 пациентов с инфарктом миокарда и сравнивались с их системными циркулирующими аналогами [7]. В образцах внутрикоронарной и артериальной периферической крови изучали субпопуляции Т-клеток, включающие CD4⁺CD28^null, активированные и регуляторные Т-клетки, фенотипы TH1/TH2/TH17, NK- и B-клетки. По представленным данным, количество CD4⁺CD28^null Т-лимфоцитов было значительно увеличено в интракоронарной крови по сравнению с периферической кровью (3,7 против 2,9 %, p < 0,0001). Кроме того, у пациентов с более чем 6-часовой длительностью ОИМ с подъемом сегмента ST (ОИМ пST) наблюдались более высокие уровни CD4⁺CD28^nullТ-клеток, что позволяет предположить, что данная субпопуляция может быть связана с более интенсивным повреждением миокарда. Редкая субпопуляция NK CD3^-CD16⁺CD56^- клеток также была увеличена в образцах внутрикоронарной крови (5,6% против 3,9%, р = 0,006). Выявленные данные показали, что конкретные субпопуляции иммунных клеток с провоспалительным профилем в коронарном русле были увеличены по сравнению с их циркулирующими аналогами, что свидетельствует о патофизиологической роли этих клеток в нестабильности бляшек, тромбах и повреждении миокарда.

В работе Афанасьевой О.И. и соавт. [1] было показано, что независимым фактором риска развития быстропрогрессирующего атеросклероза является повышение липопротеина А в сочетании с увеличением Th17 и одновременным снижением CD4.

В исследовании Пылаевой Е.А. и соавт. [3] было продемонстрировано, что у пациентов с трехсосудистым поражением коронарных артерий в сравнении с пациентами без ангиографически значимых поражений артерий наблюдалось снижение регуляторных Т-лимфоцитов и повышение Th17-клеток. Индекс отношение регуляторных Т-лимфоцитов к Th был выше у пациентов с ОИМ в анамнезе.

Целью настоящего исследования явилось определение изменений в соотношении субпопуляций лимфоцитов у пациентов с острым коронарным синдромом (ОКС), подвергшихся стентированию коронарных артерий (КА).

Материалы и методы

Обследованы 23 пациента в возрасте от 40 до 65 лет (средний возраст 54,52±6,72) с диагнозом «ОКС» при поступлении, которым в экстренном или отсроченном порядке выполнено стентирование КА в течение ближайших суток. Все пациенты в качестве сопутствующего заболевания имели гипертоническую болезнь. С учетом основного заболевания (острый коронарный синдром), гипертоническая болезнь была 3-й стадии, 4-й степени риска. В процессе дообследования – определялся тропонин крови, выполнялось ЭКГ в динамике. Диагноз «ОИМ с подъемом ST» (пST) выставлен 7 пациентам, ОИМ без подъема ST (ОИМ бпST) – 6 больным, у остальных была нестабильная стенокардия (риск по Грейс от 75 до 150 баллов, в среднем, 107,7±27,16 балла). 2 пациентам с ОИМ бпST установлено по 3 стента с лекарственным покрытием (ЛП), 3 больным ОИМ бпST и 3 с ОИМ пST имплантировано по 1 стенту с ЛП, всем остальным с ОИМ – по 2 стента с ЛП. Из лиц с нестабильной стенокардией установлено по 2 стента 2 пациентам, остальным – по 1 стенту с ЛП.

Для оценки иммунного статуса, в частности популяционного и субпопуляционного звена лимфоцитов стандартизированной технологией [2] использовали метод проточной цитометрии на цитофлюориметре Navios (Beckman Coulter, США). Определяли: CD45⁺ (панлейкоцитарный маркер для гейтирования лимфоцитов), CD45⁺, CD3⁺ (Т-лимфоциты), CD45⁺, CD3⁺, CD4⁺ (хелперы индукторы), CD45⁺, CD3⁺, CD8⁺ (цитотоксические Т-лимфоциты,), CD45⁺, CD3⁺CD16⁺, CD56⁺ (TNK-клетки) CD45⁺, CD3^-, CD16⁺, CD56⁺ (натуральные киллеры), CD45⁺, CD3^-, CD19⁺CD5⁺ (В-лимфоциты), CD45⁺, CD3⁺, CD4⁺, CD25⁺ (активированные хелперы, ранняя активация лимфоцитов), CD45⁺, CD3⁺, HLA-DR (активированные Т-лимфоциты – поздняя активация лимфоцитов) .

Результаты и обсуждение

Полученные данные, отраженные в таблице 1, свидетельствуют о том, что у пациентом ОКС по сравнению с контрольной группой [2], повышены относительные показатели субпопуляций Т-хелперов, Т-лимфоцитов ранней и поздней активации, а также В-лимфоцитов. Одновременно имеется тенденция к повышению абсолютных значений данных показателей. Субпопуляция TNK-лимфоцитов оказалась статистически значимо повышена как в относительных, так и абсолютных величинах, в то время как СD45⁺CD3⁺CD19^- (р < 0,01) и Т-цитотоксические лимфоциты (p < 0,001) в % отношении снизились и имели ту же тенденцию в абсолютных величинах. За счет повышения Т-хелперов и снижения цитотоксических Т-лимфоцитов выросло соотношение CD4/CD8-лимфоцитов почти в два раза (p < 0,001).

Кроме того, нужно отметить, что при рассмотрении показателей общего анализа крови у пациентов с ОКС имеется тенденция к лейкоцитозу (10,15±5,22) с палочкоядерным сдвигом влево. Один из обследованных пациентов с ОИМ, имевший наибольший показатель общего количества лейкоцитов (26,9 × 10⁹/л), умер через 2 недели после поступления в стационар, что можно расценить как неблагоприятный прогностический фактор.

В нашем исследовании было показано, что почти все звенья Т- и В-клеточного иммунитета принимают участие в неинфекционном воспалении, наблюдаемом у пациентов с ОКС. В частности, повысились показатели Т-хелперов, снизились уровни цитотоксических Т-лимфоцитов, что связано скорее всего с процессом острого воспаления.

Выявленное снижение уровня CD3⁺ лимфоцитов у больных с ОКС отличалось от данных, полученных в работе Olson N.S. и соавт., показавших повышение уровня CD3⁺ лимфоцитов у пациентов с атеросклерозом. Но в то же время обнаружено однонаправленное изменение показателей CD4-лимфоцитов (увеличение) в нашем исследовании и обзоре Olson N.S. и соавт. В то же время в обзоре Афанасьевой О.И. представлены данные по уменьшению уровня CD4-лимфоцитов у больных с быстропрогрессирующим атеросклерозом. Отсутствие достоверности в абсолютных показателях субпопуляций лимфоцитов скорее всего связано с несколькими причинами, а именно: пока еще незначительной выборкой, наличием очень больших различий в лейкоцитозе пациентов (остроты воспалительного процесса), что сказывается на значительном разбросе показателей (см. табл. 1). При дальнейшем исследование эти данные будут уточнены.

 

ТАБЛИЦА 1. ПОПУЛЯЦИИ И СУБПОПУЛЯЦИИ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМ КОРОНАРНЫМ СИНДРОМОМ (n = 23) В СРАВНЕНИИ С КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППОЙ (n = 18)

TABLE 1. POPULATIONS AND SUBPOPULATIONS OF LYMPHOCYTES IN PATIENTS WITH ACUTE CORONARY SYNDROME (n = 23) IN COMPARISON WITH THE CONTROL GROUP (n = 18)

Показатель Indicator	Диапазон значений (min-max) контрольной группы Range of values (min-max) of the control group n = 18	Средние значения контрольной группы Mean values of the control group n = 18	Диапазон значений (min-max) пациентов с ОКС Range of values (min-max) of patients with ACS n = 23	Средние значения пациентов с ОКС Average values of patients with ACS n = 23	Уровень различий Level of difference t p
T-лимфоциты (CD45+CD3+CD19-), отн. (%) T lymphocytes (CD45+CD3+CD19-), rel. (%)	61-85	76,25±1,71	47,9-82,0	68,33±1,73**	t = 3,26 p = 0,0024
T-лимфоциты (CD45+CD3+CD19-) абс. 106 кл/мл T lymphocytes (CD45+CD3+CD19-) abs. 106 cells/mL	946-2079	1447,56±96,10	273-2356	1303,26±147,93	t = 0,82 p = 0,418
T-хелперы (CD45+CD3+CD4+), отн. (%) T helpers (CD45+CD3+CD4+), rel. (%)	35-55	41,79±1,20	32,5-68,0	51,02±1,82***	t = 4,23 p = 0,00014
T-хелперы (CD45+CD3+CD4+), абс. 106 кл/мл T helpers (CD45+CD3+CD4+), abs. 106 cells/mL	576-1336	737,50±45,17	226-1670	949,04±102,36	t = 1,89 p = 0,066
T-цитотоксические (CD45+CD3+CD8+), отн. (%) T cytotoxic (CD45+CD3+CD8+), rel. (%)	19-35	28,99±1,80	7,2-34,4	19,77±1,53***	t = 3,90 p = 0,00038
T-цитотоксические (CD45+CD3+CD8+), абс. 106 кл/мл T cytotoxic (CD45+CD3+CD8+), abs. 106 cells/mL	372-974	534,22±39,08	48-1166	399,91±65,94	t = 1,75 p = 0,087
Соотношение CD/CD8-лимфоцитов, усл.ед. Ratio of CD/CD8 lymphocytes, c. u.	1,5-2,6	1,62±0,13	1,2-7,7	3,13±0,37***	t = 3,85 p = 0,00044
TNK-лимфоциты (CD45+CD3+CD16+CD56+), отн. (%) T-NK lymphocytes (CD45+CD3+CD16+CD56+), rel. (%)	1-6	1,80±0,31	0,3-14,0	5,57±0,93***	t = 3,85 p = 0,00045
TNK-лимфоциты (CD45+CD3+CD16+CD56+), абс. 106 кл/мл T-NK lymphocytes (CD45+CD3+CD16+CD56+), abs. 106 cells/mL	7-165	31,44±4,89	1-265	112,87±28,82**	t = 2,79 p = 0,00829
NK-лимфоциты (CD45+CD3-CD16+CD56+), отн. (%) NK lymphocytes (CD45+CD3-CD16+CD56+), rel. (%)	8-18	9,40±1,23	1,3-30,4	9,96±1,44	t = 0,30 p = 0,769
NK-лимфоциты (CD45+CD3-CD16+CD56+), абс. 106 кл/мл NK lymphocytes (CD45+CD3-CD16+CD56+), abs. 106 cells/mL	123-369	189,11±35,59	17-489	197,35±42,62	t = 0,15 p = 0,883
B-лимфоциты (CD45+CD3-CD19+), отн. (%) B lymphocytes (CD45+CD3-CD19+), rel. (%)	7-17	10,46±0,94	4,5-11,5	14,38±1,24*	t = 2,52 p = 0,016
B-лимфоциты (CD45+CD3-CD19+), абс. 106 кл/мл B lymphocytes (CD45+CD3-CD19+), abs. 106 cells/mL	111-376	205,17±27,09	61-570	261,74±35,85	t = 1,26 p = 0,215
T-лимфоциты CD45+CD3+CD4+CD25+ (ранняя активация), отн. (%) T lymphocytes CD45+CD3+CD4+CD25+ (early activation), rel. (%)	7-18	3,12±0,86	3,0-12,1	7,80±0,49***	t = 4,73 p = 0,00003
T-лимфоциты CD45+CD3+CD4+CD25+ (ранняя активация), абс. 106 кл/мл T lymphocytes CD45+CD3+CD4+CD25+ (early activation), abs. 106 cells/mL	60-400	63,94±23,04	11-137	73,22±9,59	t = 0,37 p = 0,712
T-лимфоциты CD45+CD3+CD4+HLA-DR+ (поздняя активация), отн. (%) T lymphocytes CD45+CD3+CD4+HLA-DR+ (late activation), rel. (%)	1-6	2,24±0,50	2,3-12,4	6,24±0,64***	t = 4,93 p = 0,000017
T-лимфоциты CD45+CD3+CD4+HLA-DR+ (поздняя активация), абс. 106кл/мл T lymphocytes CD45+CD3+CD4+HLA-DR+ (late activation), abs. 106 cells/mL	7-163	43,50±9,58	6-115	58,39±8,13	t = 1,19 p = 0,243

Примечание. * – p < 0,05, ** – p < 0,01, *** – p < 0,001.

Note. *, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001.

 

Учитывая значимые полученные данные, которые в будущем могут быть рассмотрены как прогностические при данной патологии, необходимо продолжить исследование.

Выводы

1. По данным исследования выявлены значимые изменения в соотношении субпопуляций лимфоцитов у пациентов с острым коронарным синдромом, подвергшихся стентированию коронарных артерий.
2. У пациентов с острым коронарным синдромом наблюдалось относительное повышение числа Т-лимфоцитов хелперов при одновременном снижении Т-цитотоксических лимфоцитов, что привело к увеличению иммунорегуляторного индекса почти в два раза. Также определено относительное снижение CD3-лимфоцитов и рост TNK-лимфоцитов (как относительного, так и абсолютного соотношения).
3. Полученные измененные данные на фоне лейкоцитоза со сдвигом влево определяют реакцию иммунной системы на воспаление, возникающее при остром инфаркте миокарда и нестабильной стенокардии. Все это показывает на необходимость продолжения исследования в данном направлении.

Об авторах

Э. А. Сафронова

ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ

Автор, ответственный за переписку.
Email: safronovaeleonora68@gmail.com

к.м.н., доцент кафедры поликлинической терапии и клинической фармакологии

Россия, Челябинск

Л. В. Рябова

ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ

Email: safronovaeleonora68@gmail.com

д.м.н., профессор кафедры безопасности жизнедеятельности, медицины катастроф, скорой и неотложной медицинской помощи

Россия, Челябинск

Список литературы

Дополнительные файлы