Иммуно-гормональная регуляция пролиферации опухоли у больных раком молочной железы

Полный текст

Введение

Иммуногистохимический анализ маркера клеточной пролиферации протеина Ki-67, рецепторов эстрадиола и прогестерона (ER и PR) и рецептора эпидермального фактора роста (HER- 2) широко применяется в диагностике молекулярно-биологического подтипа рака молочной железы (РМЖ) для выбора наиболее оптимальных схем комбинированной терапии. Поэтому исследование внеклеточных факторов организма, регулирующих экспрессию указанных молекул в опухоли, представляет не только теоретический, но и сугубо практический интерес.

Общеизвестно участие половых стероидов в возникновении и росте РМЖ. В частности, показана стимуляция прогрессии РМЖ под действием эстрадиола (E2) и угнетение пролиферации ER-экспрессирующих опухолевых клеток под действием прогестерона (Pg) [8, 11]. Наряду с хорошо изученными геномными эффектами известно и внегеномное действие стероидных гормонов, опосредованное мембранными ER и PR [5, 7].

Антитела против стероидных рецепторов также способны к внегеномному действию на клетки-мишени, как это было показано в ранее проведенных многочисленных экспериментах in vitro [9, 12]. Аутоантитела против ER обнаружены в сыворотке крови больных РМЖ [10]: они связывались с поверхностными ER и стимулировали пролиферацию опухолевых клеток мыши MCF-7 in vitro; их уровень превышал таковой у здоровых женщин и прямо коррелировал с количеством Ki-67 экспрессирующих клеток в опухоли. Однако функции аутоантител против PR, теоретически способных участвовать в регуляции пролиферативной активности опухоли, оставались неизвестными.

Роль антител против стероидных рецепторов могут выполнять антиидиотипические антитела к стероидным гормонам, как это было продемонстрированно в модельных экспериментальных in vitro [13]: антиидиотипические антитела к E2 действовали как агонисты E2 в культуре остеобластов. В нашей предыдущей статье были описаны особенности образования антиидиотипических антител, специфичных к моноклональным антителам против E2 и Pg (IgG₂-E2 и IgG₂-Pg), у здоровых женщин и больных РМЖ с ER⁺/PR⁺ опухолями на I стадии [3]. Настоящая работа является продолжением начатых исследований с учетом предполагаемого взаимного влияния стероидных гормонов и соответствующих антиидиотипических антител на пролиферативную активность опухоли у больных РМЖ в начале заболевания и при распространенных опухолях.

Цель – исследовать ассоциации экспрессии Ki-67 в опухоли и содержания в сыворотке крови антиидиотипических аутоантител IgG₂-E2 и IgG₂-Pg, а также стероидных гормонов E2 и Pg у больных РМЖ.

Материалы и методы

В настоящем исследовании приняли участие 898 женщин в постменопаузе. Все женщины впервые обратились в ГБУЗ «Кузбасский клинический онкологический диспансер имени М.С. Раппопорта» г. Кемерово. У всех женщин был первично установлен диагноз «инвазивная карцинома молочной железы неспецифического типа». Согласно TNM классификации у большинства женщин была выявлена I и II стадии заболевания (45,9% и 38,8% соответственно), III и IV стадии были выявлены у 14,2% и 1,1% женщин соответственно. Наличие ER, PR и Ki-67 в опухолевых клетках определили с помощью стандартных иммуногистохимических методов в патологоанатомическом отделении онкодиспансера. Медиана возраста всех женщин составила 65 лет (интерквартильный размах 59-71).

Объектом для исследования послужила периферическая кровь, которую забирали в соответствии с этическими принципами Хельсинкской декларации (2013) и согласно «Правилами клинической практики в Российской Федерации» (Приказ Минздрава РФ № 266 от 19.06.2003 г.). Все женщины, принявшие участие в настоящем исследовании, дали письменное информированное согласие на участие в нем.

Иммуноанализ антиидиотипических антител, специфичных к E2 и Pg (IgG₂-E2, IgG₂-Pg), проводили с помощью неконкурентного полуколичественного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих наборов «ИммуноФА-Эстрадиол» и «ИммуноФА-ПГ» (ЗАО «НВО Иммунотех», Россия) с иммобилизованными на пластике моноклональными антителами против E2 в Pg согласно методике [2]. IgG₂-E2 и IgG₂-Pg, связавшиея с моноклональными антителами против Е2 и Pg, выявляли с помощью козьих антител против IgG человека, меченных пероксидазой хрена (Invitrogen, США), с разведением 1/30000. Оптическую плотность ферментативной реакции измеряли на фотометре Multiscan FC (Thermo Scientific, Финляндия) при длине волны 450 нм. Уровни IgG₂-E2 и IgG₂-Pg выражали в условных единицах (у. е.) и рассчитывали по формуле:

IgG₂-X = (OD_X-мАТ – OD_фон)/OD_{фон ,}

где X = E2 или Pg; OD_X-мАТ – оптическая плотность связывания сывороточных антиидиотипических антител с моноклональными антителами (мАТ) против E2 или Pg, OD_фон – оптическая плотность фонового связывания меченных пероксидазой хрена козьих антител против IgG человека с моноклональными антителами против E2 или Pg без добавления сыворотки крови.

Концентрацию стероидных гормонов (E2, Pg) определяли с помощью коммерческих наборов «ИммуноФА-Эстрадиол», «ИммуноФА-ПГ» (ЗАО «НВО Иммунотех», Россия) согласно инструкции по применению.

Обработку полученных данных осуществляли с помощью программы Statistica 8.0 (StatSoft Inc., США). Тип распределения исследуемых показателей оценивали с помощью W-критерия Шапиро–Уилка. Так как распределение показателей имело ненормальный характер, в дальнейшем использовали непараметрический критерий χ² с поправкой Йейтса на непрерывность вариации. Критический уровень значимости принимался p < 0,05. Пороги отсечения антител (cut-off value), по которым сравниваемые группы имели оптимальные различия, были рассчитаны с помощью ROC-анализа [6].

Результаты

Сначала исследовали взаимосвязи уровней экспрессии маркера клеточной пролиферации, протеина Ki-67, со статусом стероидных рецепторов в опухоли у больных РМЖ. Полученные результаты представлены в таблице 1. Искомые взаимосвязи выявлены как при I стадии заболевания, так и при II-IV стадиях. У больных с ER⁺/ PR⁺ и ER⁺/PR^- опухолями на I стадии низкие уровни Ki-67 (содержание Ki-67 положительных клеток ≤ 14%) обнаружены в 41,6% и в 41,5% случаев, средние (15-30%) в 29,0% и 26,4%, высокие (> 30%) – в 29,4% и в 32,1%. То есть больные с ER⁺/PR⁺ и ER⁺/PR^- опухолями практически не имели различий по экспрессии Ki-67 (р = 0,89).

 

Таблица 1. Число (n) и частота (%) обнаружения опухолей с различными уровнями Ki-67 положительных клеток у больных раком молочной железы (РМЖ) I и II-IV стадий в зависимости от ER/PR статуса опухоли

Table 1. Cases numbers (n) and frequencies (%) of tumors with different levels of Ki-67 expressing cells in the breast cancer patients (BCP) I and II-IV stages depending on tumor ER/PR status

ER/PR	РМЖ I стадия BCP I stage (n = 412)			РМЖ II-IV стадии BCP II-IV stages (n = 486)			χ2 (p), df = 2
	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30
	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%
1. ER+/PR+	133/41,6	93/29,0	94/29,4	83/26,2	79/24,9	155/48,9	27,6 (< 0,001)
2. ER+/PR-	22/41,5	14/26,4	17/32,1	16/25,8	9/14,5	37/59,7	8,8 (0,01)
3. ER-/PR-	6/15,4	28/71,8	5/12,8	11/10,3	17/15,9	79/73,82	48,1 (< 0,001)
χ2 (р), df = 4 1-2-3	30,0 (< 0,001)			23,0 (< 0,001)			–
χ2 (р), df = 2 1-2	0,2 (0,89)			3,6 (0,17)			–
χ2 (р), df = 2 1-3	28,4 (< 0,001)			21,0 (< 0,001)			–
χ2 (р), df = 2 2-3	18,7 (< 0,001)			7,1 (0,03)			–

 

В то же время каждая из этих подгрупп значимо различалась с больными с ER^-/PR^- опухолями, соответствующие значения Ki-67 в которой составили 15,4%, 71,8% и 12,8% (р = 0,001).

Аналогичное отсутствие различий между больными ER⁺/PR⁺ и ER⁺/PR^- опухолями по уровням Ki-67 имело место при II-IV стадиях (р = 0,17), в то время как каждая из этих подгрупп значимо отличалась от больных с ER^-/PR^- опухолями (р < 0,001 и р = 0,03 соответственно).

У женщин на II-IV стадиях заболевания, по сравнению с I стадией, удельный вес опухолей с низким уровнем Ki-67 ≤ 14 значительно снижался, а с высоким Ki-67 > 30 повышался. Эти различия были характерными для больных с ER⁺/ PR⁺ опухолями (р < 0,001), с ER⁺/PR^- опухолями (р = 0,01) и с ER^-/PR^- опухолями (р < 0,001).

Отсутствие различий между больными с ER⁺/ PR⁺ и ER⁺/PR^- опухолями по распределению уровней Ki-67 как при I стадии, так и II-IV стадиях процесса послужило основанием объединить их в отдельную когорту (ER⁺), в которой и были проведены запланированные исследования антиидиотипических антител и гормонов.

С помощью ROC-анализа рассчитали пороговые значения (cut-off) уровней исследуемых антител и концентраций гормонов в сыворотке крови, по которым больные ER⁺ РМЖ с I стадией и низким уровнем Ki-67 ≤ 14 имели наибольшие различия с таковыми при высоком уровне Ki-67 > 30 в опухоли. Исследование взаимосвязей между ними показало следующее (табл. 2). У больных РМЖ I стадии искомые взаимосвязи обнаружены только между уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (р < 0,001). Взаимосвязи между высокими и низкими уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg с высоким и низким содержанием E2 и Pg отсутствовали. Также не выявляли статистически достоверных связей между высоким и низким содержанием E2 и Pg.

 

Таблица 2. Число (n) и частота (%) обнаружения индивидуальных комбинаций низких (≤) и высоких (>) уровней исследуемых антиидиотипических антител (IgG₂-E2 и IgG₂-Pg, у. е.) и гормонов (E2 и Pg, пмоль/л) в сыворотке крови больных ER⁺ раком молочной железы (РМЖ) I и II-IV стадий

Table 2. Cases numbers (n) and frequencies (%) of personal combinations of low (≤) and high (>) levels of studied antiidiotypic antibodies (IgG₂-E2 and IgG₂-Pg, c. u.) and hormones (E2 and Pg, pmol/L) in the blood serum of ER⁺ breast cancer patients (BCP) I and II-IV stages

Антитела, гормоны Antibodies, hormones	РМЖ ER+ I стадия BCP ER+ I stage (n = 373)
	IgG2-Pg		E2		Pg
	≤ 2,5	> 2,5	≤ 200	> 200	≤ 600	> 600
	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%
1.1. IgG2-E2 ≤ 3,5	88/61,1	56/38,9	88/61,1	56/38,9	60/41,7	84/58,3
1.2. IgG2-E2 > 3,5	92/40,2	137/59,8	136/58,4	93/40,6	109/47,6	120/52,4
χ2 (р), df = 1	14,7 (< 0,001)		0,1 (0,82)		1,0 (0,31)
2.1. IgG2-Pg ≤ 2,5	–	–	101/56,1	79/43,9	80/44,4	100/55,6
2.2. IgG2-Pg > 2,5	–	–	123/63,7	70/36,3	89/46,1	104/53,9
χ2 (р), df = 1			1,9 (0,16)		0,1 (0,83)
3.1. E2 ≤ 200	–	–	–	–	111/49,6	113/50,4
3.2. E2 > 200	–	–	–	–	58/38,9	91/61,1
χ2 (р), df = 1					3,7 (0,06)
Антитела, гормоны Antibodies, hormones	РМЖ ER+ II-IV стадии BCP ER+ II-IV stages (n = 379)
1.1. IgG2-E2 ≤ 3,5	86/54,1	73/45,9	92/57,9	67/42,1	66/41,5	93/58,5
1.2. IgG2-E2 > 3,5	91/41,4	129/58,6	103/46,8	117/53,2	84/38,2	136/61,8
χ2 (р), df = 1	5,5 (0,02)		4,1 (0,04)		0,3 (0,58)
2.1. IgG2-Pg ≤ 2,5	–	–	93/52,5	84/47,5	67/37,9	110/62,1
2.2. IgG2-Pg > 2,5	–	–	102/50,5	100/49,5	83/41,1	119/58,9
χ2 (р), df = 1			0,1 (0,77)		0,3 (0,59)
3.1. E2 ≤ 200	–	–	–	–	90/46,2	105/53,8
3.2. E2 > 200	–	–	–	–	60/32,6	124/67,4
χ2 (р), df = 1					6,7 (0,009)

 

У больных РМЖ на II-IV стадиях процесса также обнаружили искомые взаимосвязи между уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (р = 0,02) и, кроме того (в отличие от больных I стадией РМЖ) – между E2 и Pg (р = 0,009).

Удельный вес больных с высокой концентрацией в сыворотке E2 > 200 пмоль/л при II-IV стадиях составлял 53,2%, а при I стадии – 40,6%, если уровень IgG₂-E2 был высоким (p < 0,01). Соответствующие показатели с E2 > 200 пмоль/л проявились и у больных с высоким уровнем IgG₂- Pg (49,5% против 36,3%, p < 0,01). При низких уровнях антител различия по E2 между стадиями отсутствовали.

В основном разделе настоящей работы исследовали взаимосвязи экспрессии Ki-67 в опухоли с одной стороны и уровней E2, Pg, IgG₂-E2 и IgG₂-Pg – с другой. При этом учитывали особенности экспрессии Ki-67 у больных с II-IV стадиями РМЖ по сравнению с I стадией.

В таблице 3 показаны удельные веса больных с низкими, средними и высокими уровнями экспрессии Ki-67 в опухоли при низких и высоких концентрациях E2 и Pg, а также при их четырех возможных индивидуальных комбинациях. Искомых взаимосвязей между Ki-67 и E2 не обнаружили ни у больных с I стадией РМЖ (р = 0,14), ни у больных с II-IV стадиями (р = 0,09). Низкий удельный вес больных с низким уровнем Ki-67 ≤ 14 и, соответственно, высокий удельный вес больных с высоким уровнем Ki-67 > 30 при II-IV стадиях по сравнению с I стадией имели место как при низком, так и при высоком содержании E2 в сыворотке крови (р < 0,001 и р = 0,003 соответственно).

 

Таблица 3. Число (n) и частота (%) обнаружения низких (≤) и высоких (>) уровней исследуемых гормонов (E2 и Pg, pmol/L) и их комбинаций в сыворотке крови больных ER⁺ раком молочной железы (РМЖ) I и II-IV стадий в соответствии с уровнями Ki-67 в опухоли

Table 3. Cases numbers (n) and frequencies (%) of low (≤) and high (>) studied hormones serum levels (E2 and Pg, pmol/L) and their combinations in I and II-IV stages ER⁺ breast cancer patients (BCP) according to tumor Ki-67 levels

Гормоны и их комбинации Hormones and their combinations	РМЖ ER+ I стадия BCP ER+ I stage (n = 373)			РМЖ ER+ II-IV стадии BCP ER+ II-IV stages (n = 379)			χ2 (p), df = 2
	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30
	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%
1.1. E2 ≤ 200 1.2. E2 > 200	102/45,5 53/35,6	62/27,7 45/30,2	60/26,8 51/34,2	46/23,6 53/28,8	54/27,7 34/18,5	95/48,7 97/52,7	27,8 (< 0,001) 12,3 (0,003)
χ2 (р), df = 2	4,0 (0,14)			4,7 (0,09)
2.1. Pg ≤ 600 2.2. Pg > 600	84/49,7 71/34,8	46/27,2 61/29,9	39/23,1 72/35,3	40/26,7 59/25,8	44/29,3 44/19,2	66/44,0 126/55,0	21,5 (< 0,001) 17,2 (< 0,001)
χ2 (р), df = 2	9,8 (0,008)			6,2 (0,046)
3.1. E2 ≤ 200 + Pg ≤ 600	57/51,4	31/27,9	23/20,7	25/27,8	27/30,0	38/42,2	14,4 (< 0,001)
3.2. E2 > 200 + Pg ≤ 600	27/46,6	15/25,9	16/27,6	15/25,0	17/28,3	28/46,7	6,8 (0,03)
3.3. E2 ≤ 200 + Pg > 600	45/39,8	31/27,4	37/32,7	21/20,0	27/25,7	57/54,3	12,9 (0,002)
3.4. E2 > 200 + Pg > 600	26/28,6	30/33,0	35/38,5	38/30,6	17/13,7	69/55,6	12,2 (0,003)
χ2 (р), df = 6 3.1-3.2-3.3-3.4	13,3 (< 0,05)			12,5 (> 0,05)
χ2 (р), df = 2 3.1-3.4	12,2 (0,003)			8,8 (0,01)

 

У больных с I стадией РМЖ и низким уровнем Ki-67 ≤ 14 высокие концентрации Pg встречались реже, чем низкие (34,8% и 49,7%) и, наоборот, при высоких уровнях Ki-67 > 30 эти показатели составили, соответственно, 35,3% и 23,1% (р = 0,008). Аналогичная ситуация, но менее статистически значимая (р = 0,046) обнаружена и у больных с II-IV стадиями РМЖ. Снижение удельного веса больных низким уровнем Ki-67 ≤ 14 и соответствующее повышение удельного веса больных с высоким уровнем Ki-67 у больных с II-IV стадиями РМЖ по сравнению с I стадией имели место как при низких, так и при высоких концентрациях Pg в сыворотке крови (p < 0,001).

Анализ распределения больных РМЖ I стадией по уровням Ki-67 в опухоли и четырем возможным индивидуальным комбинациям низких и высоких концентраций E2 и Pg в сыворотке крови показал следующее. У больных с низким содержанием Pg и разными концентрациями E2 (позиции 3.1 и 3.2) опухоли с низким уровнем Ki-67 ≤ 14 встречались в 51,4% и 46,6% случаев, а опухоли с высоким уровнем Ki-67 > 30 – в 20,7% и в 27,6% соответственно. У больных с высоким содержанием Pg и разными концентрациями E2 (позиции 3.3 и 3.4) соответствующие показатели составили: 39,8% и 28,6% для Ki-67 ≤ 14; 32,7% и 38,5% для Ki-67 > 30 (p < 0,05). Наиболее выраженные различия были выявлены при сравнении позиций 3.1 и 3.4 (р = 0,003).

У больных РМЖ II-IV стадией с низким содержанием Pg (позиции 3.1 и 3.2) удельный вес опухолей с высоким уровнем Ki-67 > 30 также был ниже (42,2% и 46,7%), чем при высоком содержании Pg (позиции 3.3 и 3.4: 54,3% и 55,6%). Статистически значимые различия проявились при сопоставлении позиций 3.1 и 3.4, как и при подобном анализе больных I стадией РМЖ.

Снижение удельного веса опухолей с низкими уровнями Ki-67 ≤ 14 и соответствующее повышение удельного веса опухолей с высокими уровнями Ki-67 > 30 у больных с II-IV стадиями по сравнению с I стадией имело место с разной степенью статистической значимости (от р = 0,03 до p < 0,001) при любой из четырех индивидуальной комбинации высоких и низких концентраций E2 и Pg.

Анализ распределения низких и высоких уровней исследуемых антиидиотипических антител и их комбинаций у больных ER⁺ РМЖ I и II-IV стадий в соответствии с уровнями Ki-67 показал следующее (табл. 4). Искомые взаимосвязи не были обнаружены у больных РМЖ в начале процесса (I стадия).

 

Таблица 4. Число (n) и частота (%) обнаружения низких (≤) и высоких (>) уровней исследуемых антиидиотипических антител (IgG₂-E2 и IgG₂-Pg, у. е.) и их комбинаций в сыворотке крови больных ER⁺ раком молочной железы (РМЖ) I и II-IV стадий в соответствии с уровнями Ki-67 в опухоли

Table 4. Cases numbers (n) and frequencies (%) of low (≤) and high (>) levels of studied serum antiidiotypic antibodies (IgG₂-E2 and IgG₂-Pg, c. u.) and their combinations in I and II-IV stages ER⁺ breast cancer patients (BCP) according to tumor Ki-67 levels

Антитела и их комбинации Antibodies and their combinations	РМЖ ER+ I стадия BCP ER+ I stage (n = 373)				РМЖ ER+ II-IV стадии BCP ER+ II-IV stages (n = 379)			χ2 (p), df = 2
	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30	Ki-67 ≤ 14		Ki-67 15-30	Ki-67 > 30
	n/%	n/%	n/%	n/%		n/%	n/%
1.1. IgG2-E2 ≤ 3,5 1.2. IgG2-E2 > 3,5	67/46,5 88/38,4	37/25,7 70/30,6	40/27,8 71/31,0	31/19,5 68/30,9		37/23,3 51/23,2	91/57,2 101/45,9	32,4 (< 0,001) 10,6 (0,005)
χ2 (р), df = 2	2,4 (0,29)			6,9 (0,03)
2.1. IgG2-Pg ≤ 2,5 2.2. IgG2-Pg > 2,5	79/43,9 76/39,4	43/23,9 64/33,1	58/32,2 53/27,5	40/22,6 59/29,2		40/22,6 48/23,8	97/54,8 95/47,0	22,7 (< 0,001) 16,1 (< 0,001)
χ2 (р), df = 2	3,9 (0,14)			2,8 (0,25)
3.1. IgG2-E2 ≤ 3,5 + IgG2-Pg ≤ 2,5	43/48,9	21/23,8	24/27,3	16/18,6		19/22,1	51/59,3	22,2 (< 0,001)
3.2. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg ≤ 3,5	36/39,1	22/23,9	34/37,0	24/26,4		21/23,1	46/50,5	4,2 (0,12)
3.3. IgG2-E2 ≤ 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	24/42,8	16/28,6	16/28,6	15/20,5		18/24,7	40/54,8	10,4 (0,006)
3.4. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	52/38,0	48/35,0	37/27,0	44/34,1		30/23,3	55/42,6	8,1 (0,02)
χ2 (р), df = 2 3.1-3.4	3,7 (0,16)			7,4 (0,03)
χ2 (р), df = 2 (3.1+3.2-3.3)-3.4	4,1 (0,13)			7,3 (0,03)

 

На II-IV стадиях заболевания с низким содержанием Ki-67 ≤ 14 в опухоли низкие уровни IgG₂-E2 встречались реже (19,5%), а высокие – чаще (30,9%), и наоборот, при высоком содержании Ki-67 > 30 низкие уровни IgG₂-E2 обнаруживали чаще, а высокие реже (57,2% против 45,9%, р = 0,03). Не выявили взаимосвязей с Ki-67 при анализе отдельно IgG₂-Pg (позиции 2.1 и 2.2).

Вместе с тем при низком содержании Ki- 67 ≤ 14 высокие уровни IgG₂-E2 встречались чаще только в комбинации с высокими уровнями IgG₂-Pg (34,1%) и реже при высоком содержании Ki-67 > 30 (42,6%). Статистически значимые различия обнаружены при сравнении одновременно высоких и одновременно низких уровней исследуемых антител (позиции 3.4 и 3.1, р = 0,03). Такие же различия (р = 0,03) проявились при сравнении больных с одновременно высокими уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg с подгруппой, объединяющей позиции 3.1+3.2+3.3, т. е. при одновременно низких уровнях исследуемых антител или одного из них при высоком уровне другого.

У больных с II-IV стадией процесса опухоли с низким содержанием Ki-67 ≤ 14 обнаруживали реже, а с высоким Ki-67 > 30 чаще, чем у больных с I стадией независимо от уровней IgG₂-E2 и IgG₂-Pg и от их комбинаций. Исключение наблюдалось только при комбинации высоких уровней IgG₂-E2 с низкими уровнями IgG₂-Pg (позиция 3.2, р = 0,12). Однако при отсутствии статистической значимости тенденция к снижению удельного веса Ki-67 ≤ 14 опухолей и к повышению Ki-67 > 30 сохранялась.

Далее исследовали ассоциации Ki-67 в опухоли с антиидиотипическими антителами у больных РМЖ с различными концентрациями стероидных гормонов в сыворотке крови.

По данным, представленным в таблице 5, видно, что при низких концентрациях E2 ≤ 200 пмоль/л таковые отсутствуют у больных I стадией РМЖ как при анализе IgG₂-E2 и IgG₂-Pg по отдельности, так и в комбинациях. У больных с II-IV стадиями также не обнаружили взаимосвязей содержания Ki-67 в опухоли с уровнями антител по-отдельности (позиции 1 и 2). В то же время у больных с низким содержанием в опухоли Ki- 67 ≤ 14 одновременно высокие уровни IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (позиция 3.4) встречались чаще (33,8%), а у больных с высоким Ki-67 > 30 – реже (36,9%), чем в случаях с одновременно низкими уровнями антител (позиция 3.1) или низким уровнем одного из них при высоком другого (позиции 3.2 и 3.3): меньше 19,0% и больше 50,0% соответственно). Статистически значимые различия (р = 0,03) обнаружены при сравнении позиции 3.4 с объединенной подгруппой 3.1+3.2+3.3.

 

Таблица 5. Число (n) и частота (%) обнаружения низких (≤) и высоких (>) уровней исследуемых антиидиотипических антител (IgG₂-E2 и IgG₂-Pg, у. е.) и их комбинаций в сыворотке крови больных ER⁺ раком молочной железы (РМЖ) I и II-IV стадий с низким содержанием в сыворотке Е2 (пмоль/л) в соответствии с уровнями Ki-67 в опухоли

Table 5. Cases numbers (n) and frequencies (%) of low (≤) and high (>) levels of studied antiidiotypic antibodies (IgG₂-E2 and IgG₂-Pg, c. u.) and their combinations in I and II-IV stages ER⁺ breast cancer patients (BCP) with low E2 serum concentrations (pmol/L) according to tumor Ki-67 levels

Антитела и их комбинации Antibodies and their combinations	РМЖ ER+ I стадия BCP ER+ I stage (n = 373)			РМЖ ER+ II-IV стадии BCP ER+ II-IV stages (n = 379)			χ2 (p), df = 2
	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30
	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%
Е2 ≤ 200
1.1. IgG2-E2 ≤ 3,5 1.2. IgG2-E2 > 3,5	45/51,1 57/41,9	20/22,7 42/30,9	23/26,1 37/27,2	17/18,5 29/28,2	25/27,2 29/28,2	50/54,3 45/43,7	23,1 (< 0,001) 7,9 (0,02)
χ2 (р), df = 2	2,3 (0,32)			3,1 (0,22)
2.1. IgG2-Pg ≤ 2,5 2.2. IgG2-Pg > 2,5	49/48,5 53/43,1	23/22,8 39/31,7	29/28,7 31/25,2	17/18,3 29/28,4	27/29,0 27/26,5	49/52,7 46/45,1	20,7 (< 0,001) 10,3 (0,006)
χ2 (р), df = 2	2,2 (0,33)			2,8 (0,25)
3.1. IgG2-E2 ≤ 3,5 + IgG2-Pg ≤ 2,5	27/57,4	10/21,3	10/21,3	10/18,2	17/30,9	28/50,9	17,6 (< 0,001)
3.2. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg ≤ 3,5	22/40,7	13/24,1	19/35,2	7/18,4	10/26,3	21/55,3	5,6 (0,06)
3.3. IgG2-E2 ≤ 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	18/43,9	10/24,4	13/31,7	7/18,9	8/21,6	22/59,5	7,2 (0,03)
3.4. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	35/42,7	29/35,4	18/22,0	22/33,8	19/29,2	24/36,9	3,9 (0,14)
χ2 (р), df = 2 (3.2+3.3)-3.4	4,0 (0,14)			6,5 (0,04)
χ2 (р), df = 2 (3.1+3.2+3.3)-3.4	4,1 (0,13)			7,2 (0,03)

 

Снижение удельного веса больных с низким содержанием Ki-67 ≤ 14 и соответствующее повышение удельного веса с Ki-67 > 30 при II-IV стадиях по сравнению с I стадией имело место как при низких, так и при высоких уровнях антител (позиции 1 и 2), в том числе при их комбинациях 3.1, 3.2, и 3.3. При одновременно высоких уровнях IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (позиция 3.4) сохранялась такая же тенденция, хотя различия между больными с I и II-IV стадиями по этим показателям были статистически недостоверными (р = 0,14).

У больных с высокими концентрациями E2 > 200 пмоль/л (табл. 6) на I стадии РМЖ искомые ассоциации не были обнаружены как при анализе IgG₂-E2 и IgG₂-Pg по-отдельности, так и в комбинациях их высоких и низких уровней. У больных с II-IV РМЖ не было ассоциаций каждого из них с содержанием в опухоли Ki-67 (позиции 1 и 2). В то же время опухоли с низким содержанием Ki-67 ≤ 14 встречались реже (19,4%), а высоким Ki-67 > 30 – чаще (74,2%) при одновременно низких уровнях IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (позиция 3.1), чем при трех других комбинациях (более 20,0% и менее 50% соответственно). Различия между показателями по позиции 3.1 и объединенной подгруппой (3.1+3.2+3.3) были статистически значимыми (р = 0,03).

 

Таблица 6. Число (n) и частота (%) обнаружения низких (≤) и высоких (>) уровней исследуемых антиидиотипических антител (IgG₂-E2 и IgG₂-Pg, у. е.) и их комбинаций в сыворотке крови больных ER⁺ раком молочной железы (РМЖ) I и II-IV стадий с высоким содержанием в сыворотке Е2 (пмоль/л) в соответствии с уровнями Ki-67 в опухоли

Table 6. Cases numbers (n) and frequencies (%) of low (≤) and high (>) levels of studied antiidiotypic antibodies (IgG₂-E2 and IgG₂-Pg, c. u.) and their combinations in I and I II-IV stages ER⁺ breast cancer patients (BCP) with high E2 serum concentrations (pmol/L) according to tumor Ki-67 levels

Антитела и их комбинации Antibodies and their combinations	РМЖ ER+ I стадия BCP ER+ I stage (n = 373)			РМЖ ER+ II-IV стадии BCP ER+ II-IV stages (n = 379)			χ2 (p), df = 2
	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30
	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%
Е2 > 200
1.1. IgG2-E2 ≤ 3,5 1.2. IgG2-E2 > 3,5	22/39,2 31/33,3	17/30,4 28/30,1	17/30,4 34/36,6	14/20,9 39/33,3	12/17,9 22/18,8	41/61,2 56/47,9	11,7 (0,003) 4,3 (0,12)
χ2 (р), df = 2	0,7 (0,69)			3,7 (0,15)
2.1. IgG2-Pg ≤ 2,5 2.2. IgG2-Pg > 2,5	30/38,0 23/32,9	20/25,3 25/35,7	29/36,7 22/31,4	23/27,4 30/30,0	13/15,5 21/21,0	48/57,1 49/49,0	6,9 (0,03) 6,4 (0,04)
χ2 (р), df = 2	1,9 (0,39)			1,4 (0,49)
3.1. IgG2-E2 ≤ 3,5 + IgG2-Pg ≤ 2,5	16/39,0	11/26,8	14/34,1	6/19,4	2/6,5	23/74,2	11,8 (0,003)
3.2. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg ≤ 3,5	14/36,8	9/23,7	15/39,5	17/32,1	11/20,8	25/47,1	0,5 (0,77)
3.3. IgG2-E2 ≤ 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	6/40,0	6/40,0	3/20,0	8/22,2	10/27,8	18/50,0	4,0 (0,13)
3.4. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	17/31,0	19/34,5	19/34,5	22/34,4	11/17,2	31/48,4	5,0 (0,08)
χ2 (р), df = 2 3.1-3.2	0,3 (0,88)			6,2 (0,045)
χ2 (р), df = 2 (3.2+3.3+3.4)-3.1	0,4 (0,88)			7,3 (0,03)

 

Между больными с II-IV и с I стадиями имела место тенденция к снижению удельного веса опухолей с Ki-67 ≤ 14 и к соответствующему повышению такового с Ki-67 > 30 при любом уровне исследуемых антител, в том числе и при их комбинациях. Наибольшей значимости эти различия достигали при низких уровнях IgG₂-E2, в том числе в комбинации с низкими уровнями IgG₂- Pg (р = 0,003, позиции 1.1 и 3.1 соответственно).

Анализ распределения больных по содержанию в опухоли Ki-67 с учетом разных уровней каждого из указанных антиидиотипических антител по-отдельности, в зависимости от концентрации E2 в сыворотке крови (позиции 1 и 2 в табл. 5 и 6), показал незначительное увеличение Ki-67 положительных клеток при высоких концентрациях E2 по сравнению с низким (р > 0,05). Это было характерно как для I, так и для II-IV стадий РМЖ. В то же время у больных с II-IV стадиями РМЖ и одновременно низкими уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg с высоким содержанием в сыворотке E2 удельный вес опухолей с большим количеством Ki-67 положительных клеток был больше, чем у таковых с низким содержанием E2 (позиция 3.1 в таблицах 6 и 5: 74,2% против 50,9%; р = 0,03).

У больных с низкой концентрацией в сыворотке Pg ≤ 600 пмоль/л на I стадии РМЖ, как и в предыдущих случаях не обнаружили ассоциаций содержании в опухоли Ki-67 и исследуемых антител, в том числе и при их комбинациях (табл. 7). На II-IV стадиях высокие уровни IgG₂-E2 встречались чаще, чем низкие, при низком содержании в опухоли Ki-67 ≤ 14 (35,7% против 15,2%) и, наоборот, реже при высоком Ki-67 > 30 (34,5% против 56,0%, р = 0,008). Такая закономерность проявлялась в комбинации низкими уровнями IgG₂-Pg (позиции 3.1-3.2, р = 0,04) и сохранялась как тенденция в комбинации с высокими уровнями IgG₂-Pg (позиции 3.3-3,4, р > 0,05). Наиболее значимые различия обнаружены между больными с одновременно низкими и одновременно высокими уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (позиции 3.1-3.4, р = 0,009).

 

Таблица 7. Число (n) и частота (%) обнаружения низких (≤) и высоких (>) уровней исследуемых антиидиотипических антител (IgG₂-E2 и IgG₂-Pg, у. е.) и их комбинаций в сыворотке крови больных ER⁺ раком молочной железы (РМЖ) I и II-IV стадий с низким содержанием в сыворотке Pg (пмоль/л) в соответствии с уровнями Ki-67 в опухоли

Table 7. Cases numbers (n) and frequencies (%) of low (≤) and high (>) levels of studied antiidiotypic antibodies (IgG₂-E2 and IgG₂-Pg, c. u.) and their combinations in I and II-IV stages ER⁺ breast cancer patients (BCP) with low Pg serum concentrations (pmol/L) according to tumor Ki-67 levels

Антитела и их комбинации Antibodies and their combinations	РМЖ ER+ I стадия BCP ER+ I stage (n = 373)			РМЖ ER+ II-IV стадии BCP ER+ II-IV stages (n = 379)			χ2 (p), df = 2
	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30
	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%
Pg ≤ 600
1.1. IgG2-E2 ≤ 3,5 1.2. IgG2-E2 > 3,5	35/58,2 49/45,0	15/25,0 31/28,4	10/16,8 29/26,6	10/15,2 30/35,7	19/28,8 25/29,8	37/56,0 29/34,5	29,7 (< 0,001) 2,0 (0,37)
χ2 (р), df = 2	3,2 (0,20)			9,8 (0,008)
2.1. IgG2-Pg ≤ 2,5 2.2. IgG2-Pg > 2,5	45/56,2 39/43,8	16/20,0 30/33,7	19/23,8 20/22,5	14/20,9 26/31,3	21/31,3 23/27,7	32/47,8 34/41,0	19,3 (< 0,001) 6,9 (0,03)
χ2 (р), df = 2	4,2 (0,12)			2,1 (0,36)
3.1.IgG2-E2 ≤ 3,5 + IgG2-Pg ≤ 2,5	22/61,1	6/16,7	8/22,2	3/9,1	10/30,3	20/60,6	20,5 (< 0,001)
3.2. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg ≤ 3,5	23/52,3	10/22,7	11/25,0	11/32,4	11/32,4	12/35,3	3,1 (0,24)
3.3. IgG2-E2 ≤ 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	13/54,2	9/37,5	2/8,3	7/21,2	9/27,3	17/51,5	12,5 (0,002)
3.4. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	26/40,0	21/32,3	18/27,7	19/38,0	14/28,0	17/34,0	0,6 (0,75)
χ2 (р), df = 2 3.1-3.2	0,7 (0,70)			6,6 (0,04)
χ2 (р), df = 2 3.1-3.4	4,6 (0,10)			9,5 (0,009)

 

Снижение удельного веса опухолей с низким содержанием Ki-67 ≤ 14 и соответствующее повышение с Ki-67 > 30 у больных с II-IV стадиями РМЖ по сравнению с I стадией было выраженным при низких уровнях IgG₂-E2 и IgG₂-Pg, в том числе в их комбинации (позиции 1.1, 2.1, 3.1; р < 0,001), а также в комбинации низких уровней IgG₂-E2 с высоким IgG₂-Pg (позиции 3.3, р = 0,002). Во всех остальных случаях наблюдалась такая же тенденция, но статистически недостоверная.

В таблице 8 представлены результаты исследования искомых ассоциаций у больных РМЖ с высокими концентрациями Pg в сыворотке. В отличие от предыдущих случаев таковых не обнаружили у больных с II-IV стадиями РМЖ. В то же время у больных с I стадией и низким содержанием в опухоли Ki-67 ≤ 14 комбинации одновременно низких и одновременно высоких уровней IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (позиции 3.1 и 3.4) встречались чаще (40,4% и 36,1%), чем комбинации высокого уровня одного из них с низким другого (позиции 3.2 и 3.3: 27,1% и 34,4%). Соответственно, при высоком содержании в опухоли Ki-67 > 30 эти показатели составили 30,8% и 26,4% против 47,9% и 43,8%. Различия между объединенными подгруппами (3.2+3.3) и (3.1+3.4) оказались статистически значимыми (р = 0,03).

 

Таблица 8. Число (n) и частота (%) обнаружения низких (≤) и высоких (>) уровней исследуемых антиидиотипических антител (IgG₂-E2 и IgG₂-Pg, у. е.) и их комбинаций в сыворотке крови больных ER⁺ раком молочной железы (РМЖ) I и II-IV стадий с высоким содержанием в сыворотке Pg (пмоль/л) в соответствии с уровнями Ki-67 в опухоли

Table 8. Cases numbers (n) and frequencies (%) of low (≤) and high (>) levels of studied antiidiotypic antibodies (IgG₂-E2 and IgG₂-Pg, c. u.) and their combinations in I and II-IV stages ER⁺ breast cancer patients (BCP) with high Pg serum concentrations (pmol/L) according to tumor Ki-67 levels

Антитела и их комбинации Antibodies and their combinations	РМЖ ER+ I стадия BCP ER+ I stage (n = 373)			РМЖ ER+ II-IV стадии BCP ER+ II-IV stages (n = 379)			χ2 (p), df = 2
	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30	Ki-67 ≤ 14	Ki-67 15-30	Ki-67 > 30
	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%	n/%
Pg > 600
1.1. IgG2-E2 ≤ 3,5 1.2. IgG2-E2 > 3,5	32/38,1 39/32,5	22/26,2 39/32,5	30/35,7 42/35,0	21/22,6 38/27,9	18/19,4 26/19,1	54/58,1 72/52,9	9,1 (0,01) 9,5 (0,009)
χ2 (р), df = 2	1,1 (0,58)			0,9 (0,64)
2.1. IgG2-Pg ≤ 2,5 2.2. IgG2-Pg > 2,5	34/34,0 37/35,6	27/27,0 34/32,7	39/39,0 33/31,7	26/23,6 33/27,7	19/17,3 25/21,0	65/59,1 61/51,3	8,5 (0,02) 8,9 (0,01)
χ2 (р), df = 2	1,4 (0,51)			1,4 (0,49)
3.1. IgG2-E2 ≤ 3,5 +IgG2-Pg ≤ 2,5	21/40,4	15/28,8	16/30,8	13/24,5	9/17,0	31/58,5	8,2 (0,02)
3.2. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg ≤ 3,5	13/27,1	12/25,0	23/47,9	13/22,8	10/17,5	34/59,6	1,5 (0,46)
3.3. IgG2-E2 ≤ 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	11/34,4	7/21,9	14/43,8	8/20,0	9/22,5	23/57,5	2,0 (0,36)
3.4. IgG2-E2 > 3,5 + IgG2-Pg > 2,5	26/36,1	27/37,5	19/26,4	25/31,6	16/20,3	38/48,1	8,9 (0,01)
χ2 (р), df = 2 (3.2+3.3)-3.4	6,9 (0,03)			2,6 (0,27)
χ2 (р), df = 2 (3.2+3.3)-(3.1+3.4)	7,0 (0,03)			4,2 (0,12)

 

Сравнение больных на II-IV стадиях с I стадией РМЖ по удельным весам опухолей с низким и высоким содержанием Ki-67 показало, что снижение первых и соответствующее повышение вторых имело место как при низких, так и при высоких уровнях IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (позиции 1 и 2), в том числе при их одновременно низких и одновременно высоких уровнях (позиции 3.1 и 3.4). Такая же тенденция наблюдалась и в комбинациях высокого уровня одного из них при низком уровне другого (позиции 3.2 и 3.3), хотя была статистически недостоверной.

Анализ распределения больных с I стадией РМЖ по содержанию в опухоли Ki-67 с учетом разных уровней каждого из указанных антиидиотипических антител по-отдельности, в зависимости от концентрации Pg в сыворотке крови (позиции 1.1 и 2.1 в табл. 7 и 8), показал значимое увеличение количества случаев с высоким уровнем Ki-67 положительных клеток при высоких концентрациях Pg по сравнению с низкими: при низких уровнях IgG₂-E2 с 16,7% до 35,7% (р = 0,02) и при низких уровнях IgG₂-Pg с 23,8% до 39,0% (р = 0,01). Такая же закономерность проявлялась при высоких уровнях IgG₂-E2 в комбинации с низкими уровнями IgG₂-Pg (позиции 3,2: с 25,0% до 47,9%, р = 0,03) и при низких уровнях IgG₂-E2 в комбинации с высокими уровнями IgG₂-Pg (позиции 3.3: с 8,3% до 43,8%, р = 0,02).

У больных с II-IV стадиями РМЖ значимое возрастание доли опухолей с высоким содержанием Ki-67 положительных клеток при высоких концентрациях Pg обнаружили только при высоких уровнях IgG₂-E2 (позиции 1.2 в табл. 7 и 8: 34,5% до 52,9%, р = 0,03).

Обсуждение

Иммуногистохимический анализ ER, PR, Ki- 67 и HER-2 является общепринятой диагностической процедурой в определении молекулярно-биологического подтипа РМЖ для последующего выбора оптимальной схемы комбинированного лечения. Утрата опухолью стероидных рецепторов и возрастание количества клеток, экспрессирующих Ki-67 – очевидные признаки прогрессии РМЖ и других гормоно-зависимых злокачественных новообразований. Исследование внеклеточных факторов организма, модулирующих пролиферативную активность опухоли, представляется перспективным в поиске дополнительных маркеров прогрессии и, возможно, новых средств таргетной терапии рака.

Роль половых гормонов и гормон-связывающего глобулина в канцерогенезе молочной железы не вызывает сомнений. Гораздо менее изученным остается участие аутоантител, специфичных к стероидным гормонам и их рецепторам. A. Maselli и соавт. [10] в сыворотке крови 22 из 46 больных РМЖ обнаружили антитела, специфичные к ERα, уровень которых прямо корректировал с количеством Ki-67 экспрессирующих клеток опухоли. В наших предыдущих статьях показано снижение удельного веса ER⁺ и PR⁺ опухолей при II-IV стадиях по сравнению с I у больных РМЖ с высокими уровнями идиотипических аутоантител IgA₁-E2 и низкими уровнями IgA₁-Pg [1]. Одновременное повышение уровней антиидиотипических аутоантител IgG₂-E2 и IgG₂-Pg было ассоциировано с трансформацией ER⁺/PR⁺ в ER^-/PR^- опухоли при росте РМЖ [2].

Эти предварительные данные послужили основанием для исследования взаимосвязей между содержанием в опухоли Ki-67 с одной стороны и с уровнями E2 и Pg, а также соответствующих антиидиотипических аутоантител в сыворотке крови больных РМЖ с другой стороны. При этом учитывали следующие обстоятельства: 1) очевидную взаимосвязь экспрессии Ki-67 с ER/PR статусом опухоли; 2) способность антиидиотипических анти-антител к связыванию с мембранными ER и PR и предполагаемое их действие на пролиферативную активность опухоли; 3) вероятное совместное участие E2 и Pg, IgG₂-E2 и IgG₂-Pg в регуляции пролиферации опухоли; 4) вероятные различия иммуно-гормональной модуляции пролиферации опухоли в начале заболевания и при последующей прогрессии.

В исследованной нами когорте больных РМЖ (n = 896) действительно имело место возрастание удельного веса опухолей, интенсивно экспрессирующих Ki-67 на II-IV стадиях по сравнению с I: при ER⁺/PR⁺ опухолях – на 20%; при ER⁺/ PR^- опухолях – на 27%; при ER^-/PR^- опухолях – на 61%. Относительное количество опухолей с низким содержанием Ki-67 положительных клеток у больных с ER^-/PR^- РМЖ было значительно меньше, чем у больных с ER⁺/PR⁺ и ER⁺/ PR^- РМЖ как на I, так и на II-IV стадиях. При этом распределение больных по уровням Ki- 67 с ER⁺/ PR⁺ и ER⁺/ PR^- опухолями было практически одинаковым. Это свидетельствовало о том, что только утрата опухолью обоих ER и PR (но не одного PR при сохранении ER) взаимосвязано с повышенной пролиферативной активностью, и послужило основанием для объединения больных с ER⁺/ PR⁺ и ER⁺/PR^- в отдельную подгруппу (n = 752), в которой и были выполнены дальнейшие исследования.

Между уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg были выявлены прямые взаимосвязи, более значимые у больных с I стадией РМЖ (р < 0,001) и менее – с II-IV стадиями (р = 0,02). Не обнаружили никаких ассоциаций между содержанием в сыворотке E2 и Pg с одной стороны и уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg – с другой, на любой стадии РМЖ. То есть образование IgG₂-E2 и IgG₂-Pg оказалось взаимозависимым, а уровни E2 и Pg – независимыми от антиидиотипических антител, на каждой отдельной стадии. Вместе с тем, удельный вес больных с высокой концентрацией E2 (но не Pg) при II- IV стадиях превышал таковой при I стадии, если уровни IgG₂-E2 или IgG₂-Pg были высокими (p < 0,01). Это частично подтверждало стимулирующую роль E2 в прогрессии РМЖ.

Удельный вес больных с высокой концентрацией в сыворотке E2 (без учета Ki-67) при II-IV стадиях РМЖ был выше, чем при I стадии (48,5% против 39,9%, р = 0,02). Таких различий не обнаружили при анализе Pg (р = 0,11). Это также подтверждало проканцерогенное действие E2.

Исследование взаимосвязей экспрессии Ki-67 с содержанием стероидных гормонов показало, что у больных с высокими концентрациями Pg в сыворотке крови удельный вес опухолей с высокими уровнями Ki-67 больше, а с низким – меньше, чем у больных с низкими концентрациями Pg, как при I (р = 0,008), так и при II-IV стадиях (р = 0,046) РМЖ. Подобных ассоциаций не выявлено при анализе E2. Минимальное количество опухолей с интенсивной экспрессией Ki-67 обнаружено при одновременно низких уровнях E2 и Pg, а максимальное – при одновременно высоких (20,7% и 38,5% при I стадии, р = 0,003; 42,2% и 55,6% при II-IV, р = 0,01 соответственно). Определяющую роль при этом играл Pg. Возрастание удельного веса больных с большим количеством Ki-67 положительных клеток у больных с II-IV стадиями РМЖ по сравнению с I стадией было статистически значимым как при низких, так и при высоких концентрациях E2 и Pg, и при любой их комбинации.

Полученные результаты отчасти противоречат данным Li Q. и соавт. [8] о E2-стимуляции прогрессии ER⁺ РМЖ и H. Mohammed и соавт. [11] о Pg-ингибиции E2-индуцированной пролиферации ER⁺ клеток РМЖ. Одним из возможных объяснений этих противоречий может быть влияние на пролиферацию опухоли других внеклеточных факторов наряду со стероидными гормонами, в частности антиидиотипических антител, способных связываться с мембранными ER и PR.

Исследование взаимосвязей Ki-67 с IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (без учета содержания в сыворотке E2 и Pg) показало отсутствие таковых у больных с I стадией РМЖ как при их анализе по-отдельности, так и при индивидуальных комбинациях высоких и низких уровней. У больных с II-IV стадией и высоком уровне IgG₂-E2 удельный вес опухолей с низким содержанием Ki-67 положительных клеток был выше, а с высоким – ниже, чем у больных с низким уровнем IgG₂-E2 (р = 0,03). Подобных ассоциаций не обнаружили при исследовании IgG₂-Pg. Одновременно высоким уровням IgG₂-E2 и IgG₂-Pg соответствовали низкие значения удельного веса опухолей с высоким содержанием Ki-67 положительных клеток по сравнению с больными, у которых уровни этих антител были одновременно низкими или низким был уровень одного из них при высоком другого (р = 0,03). То есть у больных РМЖ на II-IV стадиях с одновременным образованием IgG₂-E2 и IgG₂-Pg зафиксировано торможение пролиферации опухоли по сравнению с больными, у которых имело место их недостаточное образование.

Возрастание количества опухолей с высоким содержанием Ki-67 от I до II-IV стадий РМЖ наблюдалось одинаково значимо у больных как с низкими, так и с высокими уровнями антител, исследованных по отдельности (р = 0,005 и менее). Однако это было характерно только при низких уровнях IgG₂-E2 в комбинации с низкими уровнями IgG₂-Pg (р < 0,001) или с высокими (р = 0,006). При высоких уровнях IgG₂-E2 это возрастание было статистически недостоверным или менее значимым (р = 0,12 и р = 0,02 соответственно). Таким образом, указанные антиидиотипические антитела оказались действительно способными модулировать пролиферативную активность РМЖ, и ведущую роль в этом играли IgG₂-E2.

Особый интерес в настоящей работе представляет исследование комплексного влияния стероидных гормонов и соответствующих антиидиотипических антител на пролиферацию опухоли у больных РМЖ. Наиболее демонстративно это влияние проявлялось при сопоставлении больных с высокими и низкими концентрациями гормонов в сыворотке.

У больных с I стадией РМЖ и высокой концентрацией Pg по сравнению с таковыми с низкой концентрацией Pg возрастание количества активно пролиферирующих опухолей было только при низких уровнях IgG₂-E2 (35,7% против 16,7%, р = 0,021) или при низких уровнях IgG₂-Pg (39,0% против 23,8%, р = 0,01), или при низких уровнях IgG₂-E2 в комбинации с высокими IgG₂-Pg (43,8 % против 8,3%, р = 0,02), или при низких IgG₂-Pg в комбинации с высокими IgG₂-E2 (47,9% против 25,0%, р = 0,03). Такового возрастания не обнаружили при одновременно высоких уровнях IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (26,4% против 27,7%, р > 0,05).

Распределение больных с I стадией РМЖ с низкими и высокими концентрациями E2 не зависело от уровней исследуемых антител ни по отдельности, ни в комбинациях.

У больных с II-IV стадиями РМЖ и высокой концентрацией Pg по сравнению с таковыми с низкой концентрацией Pg возрастание количества активно пролиферирующих опухолей выявлено только при высоких уровнях IgG₂-E2 (52,9% против 34,5%, р = 0,03). При аналогичном сопоставлении больных с II-IV стадиями и разными концентрациями E2 соответствующие показатели составили 74,2% против 50,9% (р = 0,03) в случае одновременно низких уровней IgG₂-E2 и IgG₂-Pg.

Таким образом, стимулирующее пролиферацию опухоли действие избытка E2 проявлялось у больных с II-IV стадиями РМЖ при одновременно низких уровнях исследуемых антиидиотипических антител, а Pg – у больных с I стадией РМЖ при низком уровне любого из них в комбинации с высоким другого. Наиболее значимое возрастание удельного веса опухолей с высоким содержанием Ki-67 экспрессирующих клеток у больных с II-IV стадиями РМЖ по сравнению с I стадией имело место при одновременно низких уровнях IgG₂-E2 и IgG₂-Pg в комбинации с низкими и высокими концентрациями E2 (р < 0,001), с низкими (р < 0,001) и высокими (р = 0,02) концентрациями Pg.

При II-IV стадиях РМЖ у больных с одновременно высокими уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg удельный вес опухолей с высоким содержанием Ki-67 положительных клеток был ниже, чем у больных с одновременно низкими их уровнями или (в некоторых случаях) с низкими уровнями одного из них. Кроме того, количество опухолей с высоким содержанием Ki-67 у больных с II-IV стадией РМЖ по сравнению с I возрастало незначительно при одновременно высоких уровнях IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (р > 0,06). Такое тормозящее пролиферацию опухоли действие антител проявлялось независимо от концентрации в сыворотке E2 и у больных с низкой концентрацией Pg. У больных с высокой концентрацией Pg это действие было менее выражено.

Полученные результаты противоречат данным A. Maselli и соавт. [10] о прямой корреляции уровней анти-ERα антител в сыворотке крови с удельным весом Ki-67 положительных клеток в опухоли у больных РМЖ. Возможным объяснением этого представляются различия в исследуемых когортах больных и деталях иммуноанализа антител. В работе [10] среди 46 больных были женщины в пре- и постменопаузе; не учитывались содержание в сыворотке стероидных гормонов и стадия РМЖ; медиана возраста составляла 53 года; в качестве адсорбированного антитела в ELISA использовали очищенный ERα; аутоантитела против PR вообще не изучались. В нашей работе выборка состояла из 752 женщин только в постменопаузе с медианой возраста 65 лет; учитывалось участие E2 и Pg в сыворотке крови в анализе искомых ассоциаций антиидиотипических антител с Ki-67; в качестве адсорбированных антигенов использовали моноклональные антитела против E2 и Pg, что позволило исследовать совместное участие IgG₂-E2 и IgG₂-Pg в модуляции пролиферативной активности опухоли. Не исключено и различие в связывании различных эпитопов мембранных ER с анти-ER антителами и с антиидиотипическими антителами к E2 и Pg. Очевидно, что объяснение проявившихся противоречий требует дальнейших, более детальных исследований, тем болеед что в некоторых экспериментах in vitro антитела против ER блокировали эффект E2 на опухолевые клетки молочной железы линии MCF-7 [4].

Если одновременное отсутствие в сыворотке обоих антиидиотипических антител действительно ассоциировано со стимуляцией пролиферативной активности опухоли, возникает вопрос, возможно ли их использование (или использование антител против ER и PR) в качестве антипролиферативных средств для лечения РМЖ? Выделение больных с высокой пролиферативной активностью опухоли и с низкими уровнями аутологичных IgG₂-E2 и/ или IgG₂-Pg могло бы послужить основанием для применения соответствующих экзогенных антиидиотипических антител или антител, блокирующих ER и/или PR, в качестве дополнительных средств таргетной терапии РМЖ по аналогии с антителами против HER-2, которые с успехом используются в лечении РМЖ.

Например, у больных РМЖ II-IV стадий с высоким содержанием в сыворотке E2 и одновременно низкими уровнями IgG₂-E2 и IgG₂-Pg (табл. 6, позиция 3.1) удельный вес опухолей с высоким содержанием Ki-67 положительных клеток составлял 74,2%. Теоретически этот показатель может снизиться до 47,1% при назначении им IgG₂-E2 (позиция 3.2), до 50,0% – при назначении IgG₂-Pg (позиция 3.3) и до 48,4% при назначении IgG₂-E2 совместно с IgG₂-Pg (позиция 3.4).

Заключение

Впервые описаны ассоциации пролиферативной активности опухоли с одной стороны и содержания в сыворотке крови антиидиотипических антител к E2 и Pg в совокупности с этими гормонами с другой стороны у больных РМЖ. Выявлены особенности указанных ассоциаций в начале заболевания (при I стадии РМЖ) и при его развитии (при II-IV стадиях). Определены комбинации уровней исследуемых антител в совокупности с концентрацией гормонов, стимулирующие и тормозящие пролиферацию опухоли. Предложено рассмотреть возможность использования антиидиотипических антител или антител против мембранных рецепторов стероидных гормонов в качестве дополнительных средств таргетной терапии РМЖ у больных со стимулирующим пролиферацию иммуно-гормональным статусом.

Об авторах

А. Н. Глушков

ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр угля и углехимии Сибирского отделения Российской академии наук»

Email: glushkovan@ihe.sbras.ru
ORCID iD: 0000-0002-8560-6719
SPIN-код: 9536-8530
Scopus Author ID: 7006323832
ResearcherId: Q-5985-2016

д.м.н., профессор, главный научный сотрудник лаборатории иммуногенетики Института экологии человека

Россия, г. Кемерово

Е. Г. Поленок

ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр угля и углехимии Сибирского отделения Российской академии наук»

Email: egpolenok@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9368-2340
SPIN-код: 3925-0185
Scopus Author ID: 6506567994
ResearcherId: Q-5381-2016

к.фарм.н., ведущий научный сотрудник лаборатории иммунохимии Института экологии человека

Россия, г. Кемерово

Л. А. Гордеева

ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр угля и углехимии Сибирского отделения Российской академии наук»

Email: gorsib@rambler.ru
ORCID iD: 0000-0001-5870-7584
SPIN-код: 6662-4616
Scopus Author ID: 14052058500
ResearcherId: R-2781-2016

к.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории иммуногенетики Института экологии человека

Россия, г. Кемерово

А. В. Антонов

ГБУЗ «Кузбасский клинический онкологический диспансер имени М.С. Раппопорта»

Email: al0412@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-0802-9759

заведующий отделением опухолей молочной железы

Россия, г. Кемерово

П. В. Байрамов

ГБУЗ «Кузбасский клинический онкологический диспансер имени М.С. Раппопорта»

Email: bayramov_pavel82@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-4649-5892

заведующий патологоанатомическим отделением

Россия, г. Кемерово

Н. Е. Вержбицкая

ГБУЗ «Кузбасский клинический онкологический диспансер имени М.С. Раппопорта»

Email: verzhbitskaia@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-3860-825X

к.м.н., врач-патологоанатом

Россия, г. Кемерово

Г. И. Колпинский

ФГБОУ ВО «Кемеровский государственный медицинский университет»; ГАУЗ «Клинический консультативно-диагностический центр имени И.А. Колпинского»

Автор, ответственный за переписку.
Email: Glebss@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-5526-2687
SPIN-код: 6894-6419
Scopus Author ID: 56677706300

д.м.н., профессор кафедры лучевой диагностики, лучевой терапии и онкологии ФГБОУ ВО «Кемеровский государственный медицинский университет»; главный врач ГАУЗ «Клинический консультативно-диагностический центр имени И.А. Колпинского»

Россия, г. Кемерово; г. Кемерово

Список литературы

Дополнительные файлы