СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ МРНК И ПЛАЗМИДНЫХ ВЕКТОРОВ ПРИ ТРАНСФЕКЦИИ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ

Резюме

Адаптивная CAR-T-клеточная терапия — инновационный подход в онкологии, который использует полученные от пациента генетически модифицированные Т-клетки в качестве терапевтического инструмента для борьбы с раком. Использование ДНК-плазмид и транскрибируемой in vitro (IVT) мРНК в качестве векторов для получения CAR-T-лимфоцитов имеет ряд преимуществ по сравнению с вирусными векторами такими как: отсутствие модификации генома клеток, высокую эффективность трансфекции, быстроту и потенциально более низкую стоимость получения конечного продукта. В работе исследована эффективность трансфекции (в терминах жизнеспособности клеток и экспрессии целевого белка) мононуклеарных клеток периферической крови и клеток перевиваемой культуры (эмбриональные клетки почки человека, HEK293) методом электропорации, используя модельные ДНК-плазмиду (pmaxGFP) и IVT-мРНК (мРНК-GFP), кодирующих зелёный флуоресцентный белок (green fluorescent protein, GFP). Проведен подбор оптимального режима трансфекции. Показано, что, хотя мРНК-GFP даёт сравнимое количество клеток, экспрессирующих GFP, жизнеспособность клеток, и соответственно эффективность трансфекции в целом, при использовании мРНК-GFP как вектора значительно выше. При этом, сравнение уровня экспрессии клеток трансфецированных двумя методами показывает, что использование мРНК дает более однородные показатели, тогда как при использование плазмидного вектора уровень экспрессии отличается на несколько порядков. Было проведено сравнение изменение уровня экспрессии в течении 7 дней после трансфекции. Показано, что доля GFP позитивных клеток убывает со временем и не зависит от способа трансфекции, при этом оценка доли жизнеспособных клеток показала, что трансфекция плазмидой приводит к снижению доли жизнеспособных клеток через 7 суток до 30%, в то время как использование мРНК практически не влияет на жизнеспособность (количество живиых клеток через 7 суток практически не отличается от контроля). Полученные результаты указывают, что использование IVT-мРНК может оказаться более предпочтительным средством при производстве CAR-T продуктов методом электропорации.