Specific antinuclear antibodies in different fluorescence patterns of antinuclear factor on the HEp-2 cell line in children with autoimmune diseases

A. A. Zhuzhula; Жужула А. А.; O. V. Kurbatova; Курбатова О. В.; M. A. Snovskaya; Сновская М. А.; A. P. Fisenko; Фисенко А. П.; S. V. Petrichuk; Петричук С. В.; T. N. Konopleva; Коноплева Т. Н.; E. L. Semikina; Семикина Е. Л.

doi:10.46235/1028-7221-17038-SAA

Специфические антинуклеарные антитела при разных типах свечения антинуклеарного фактора на клеточной линии HEp-2 у детей с аутоиммунными заболеваниями

Авторы: Жужула А.А.¹, Курбатова О.В.¹, Сновская М.А.¹, Фисенко А.П.¹, Петричук С.В.¹, Коноплева Т.Н.¹, Семикина Е.Л.¹^,2
Учреждения:
1. Национальный медицинский исследовательский центр здоровья детей
2. Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова
Выпуск: Том 28, № 2 (2025)
Страницы: 247-254
Раздел: КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
Дата подачи: 31.07.2024
Дата принятия к публикации: 06.08.2024
Дата публикации: 16.02.2025
URL: https://rusimmun.ru/jour/article/view/17038
DOI: https://doi.org/10.46235/1028-7221-17038-SAA
ID: 17038

Цитировать

Полный текст

Аннотация
Полный текст
Об авторах
Список литературы
Дополнительные файлы
Статистика

Аннотация

Цель нашего исследования – сопоставить наличие специфических антинуклеарных антител с различными типами свечения антинуклеарного фактора на клеточной линии HEp-2 у детей с аутоиммунными заболеваниями.

В исследование было включено 40 детей (34 девочки и 6 мальчиков) с АИЗ, находившиеся на лечении в ФГАУ «НМИЦ здоровья детей» Минздрава России. Возраст пациентов от 6,28 до 17,99 года.

Всем детям определяли антинуклеарный фактор (АНФ) на клеточной линии HEp-2 (эпителиальные клетки рака гортани человека) в реакции непрямой иммунофлюоресценции (AESKUSLIDES^® ANA-HEp-2, Германия) с помощью анализатора HELIOS^® (AESKU.GROUP, Германия). Определение АНА проводили на анализаторе Q-Processor с использованием панелей Protia ANA Profile 18 (ProteomeTech Inc., Корея), в работе которого используется метод иммуноблот-анализа для качественного обнаружения аутоантиген-специфических IgG-антител.

Позитивный титр АНФ был выявлен на анализаторе HELIOS^® у всех детей с АИЗ (100%). C помощью панели Protia ANA Profile 18 были выявлены специфические АНА у 75% больных (30 детей). В нашей выборке детей с АИЗ наиболее часто выявлялись гомогенный (АС-1) и ядерный крупногранулярный (АС-5) типы свечения АНФ, а также их комбинации. При гомогенном типе (АС-1) свечения АНФ чаще выявлялись аутоантитела к dsDNA, Nucleosome и Histone. При ядерном крупногранулярном (АС-5) определялись антитела к RNP 70, RNP A и RNP/Sm, при комбинации АС-1 + АС-5 – к SSA 60, SSA 52, Nucleosome и Histone, RNP 70, RNP A. Нами выявлены единичные точки в ядре (АС-7) у 10% (4 детей), данный тип свечения АНФ характеризуется низкой положительной прогностической ценностью.

Исследование АНФ и специфических АНА с помощью панели Protia ANA Profile 18 выявило совпадение в 75% случаев, причем определенные АНА согласуются с типами свечения АНФ. Для детей целесообразно определение широкого спектра АНА при выявлении позитивного АНФ на клеточной линии Hep-2.

Ключевые слова

дети, аутоиммунные заболевания, антинуклеарные антитела, антинуклеарный фактор, клеточная линия HEp-2, панель Protia ANA Profile 18, анализатор HELIOS

Полный текст

Введение

Антинуклеарные антитела (АНА) представляют собой семейство аутоагрессивных антител, направленных против различных компонентов ядра и цитоплазмы клеток. Выявление АНА имеет основное значение для лабораторной диагностики аутоиммунных заболеваний (АИЗ) [3, 11, 12]. Одним из критериев постановки диагноза «АИЗ» является наличие таких иммунологических маркеров, как повышение титров антинуклеарного фактора (АНФ), антитела к двуспиральной ДНК, антитела к Sm-антигену и другим белкам [5, 6]. Положительный АНФ выявляется у 95% больных с аутоиммунными заболеваниями, однако при этом невозможно точно определить, какая именно нозология у того или иного пациента. Положительный АНФ может диагностироваться при таких АИЗ, как: аутоиммунный гепатит 1-го типа, склеродермия, системные заболевания соединительной ткани и другие [5, 6, 8, 10].

Каждый тип флюоресцентного свечения АНФ обуславливается появлением органоспецифических АНА [7, 9]. При гомогенном типе свечения АНФ (АС-1) часто определяются антитела к двуспиральной ДНК, которые выявляются у 40-70% пациентов с СКВ, и их наличие связывают с активностью волчаночного нефрита [5, 9]. Антитела к белкам центромер, Scl-70 отмечаются при склеродермии [9]. При ядерном крупногранулярном типе (АС-5) свечения АНФ характерно наличие антител к U1RNP, Sm-антигену [7]. Среди взрослых больных с аутоиммунными заболеваниями существует достаточно информации о связи типов свечения АНФ с аутоантителами [3, 4, 5, 9]. У детей, больных АИЗ, информация ограничивается единичными публикациями, в которых описаны титры и типы свечения АНФ на клеточной линии HEp-2 [3, 8, 10].

Цель нашего исследования – сопоставить наличие специфических антинуклеарных антител с различными типами свечения антинуклеарного фактора на клеточной линии HEp-2 у детей с аутоиммунными заболеваниями.

Материалы и методы

В исследование было включено 40 детей (34 девочки и 6 мальчиков) с АИЗ, находившиеся на лечении в ФГАУ «НМИЦ здоровья детей» Минздрава России. Возраст пациентов – от 6,28 до 17,99 года.

Всем детям определяли АНФ на клеточной линии HEp-2 (эпителиальные клетки рака гортани человека) в реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) (AESKUSLIDES^® ANA-HEp-2, Германия) с помощью анализатора HELIOS^® (AESKU.GROUP, Германия). Полностью автоматизированный иммунофлюоресцентный анализатор HELIOS^® предназначен для определения АНФ на клеточной линии HEp-2 РНИФ в сыворотке крови человека. Данная методика является «золотым стандартом» для исследования АНФ, которое назначается как скрининг-тест при подозрении на наличие аутоиммунных заболеваний [3].

Определение АНА проводили на анализаторе Q-Processor с использованием панелей Protia ANA Profile 18 (ProteomeTech Inc., Корея), в работе которого используется метод иммуноблот-анализа для обнаружения аутоантиген-специфических IgG-антител. Панель Protia ANA Profile 18 предназначена для одновременного определения 18 основных разновидностей АНА: Jo-1 (гистидил-тРНК-синтетаза), PM-Scl (PM-Scl 100), CENP-B (центромерный белок В), Scl-70, SSA 60 (Ro 60 kDa), SSA 52 (Ro 52 kDa), SSB (La), M2, dsDNA (антитела к двуспиральной ДНК), Nucleosome (нуклеосома), Histone (гистоны), PCNA (ядерный антиген пролиферирующей клетки), RPP (рибосомальный фосфопротеин Р0), Sm, RNP70 (U1-snRNP 68/70 kDa), RNP A (U1-snRNP A), RNP C (U1-snRNP C), RNP/Sm. Панель Protia ANA Profile 18 использовалась в 2024 году в рамках выполнения исследований по теме государственного задания «Маркеры тканевого повреждения при соматической и хирургической патологии у детей» 122040800163-9.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием программ Statistica 10.0 (StatSoft, США), Excel (Microsoft, США).

Результаты и обсуждение

Позитивный титр АНФ был выявлен на анализаторе HELIOS^® у всех детей с АИЗ (100%), из них: умеренно-позитивный титр 1/640 – 2,5% (1 пациент), высоко-позитивные титры: 1/1280 – 2,5% (1 пациент), 1/2560 – 50% (20 пациентов), 1/5120 – 45% (18 пациентов). C помощью панели Protia ANA Profile 18 были выявлены специфические АНА у 75% больных (30 детей). С нашей точки зрения, это может быть обусловлено наличием у пациентов других специфических АНА, не входящих в данную панель.

При анализе типов свечения АНФ у детей в нашей выборке чаще встречались: ядерный гомогенный (АС-1) у 25% (10 детей), ядерный крупногранулярный (АС-5) в 22% (9 случаях). Также встречались комбинации нескольких типов свечения: АС-1 + ядерный мелкогранулярный (АС-4) – в 8% (3 случаях), АС-1 + АС-5 – в 22% (9 случаях), АС-1 + АС-5 + цитоплазматический плотный мелкогранулярный (АС-19) – в 5% (2 случаях). У 18% (7 детей) встречались разные комбинации типов свечения по 1 случаю: ядерный мелкогранулярный (АС-4), АС-5 + АС-19, АС-1 + единичные точки в ядре (АС-7) + АС-19, АС-1 + АС-5 + АС-7 + АС-19, АС-7 + АС19, АС-5 + АС-7, АС-4 + АС-7 (табл. 1).

Таблица 1. Типы свечения АНФ у детей с АИЗ

Table 1. Patterns of ANF in children with autoimmune diseases

Типы свечения АНФ Patterns of ANF	Частота встречаемости, % Ratio of the number, %
АС-1	25%
АС-5	22%
АС-1 + АС-5	22%
АС-1 + АС-4	8%
АС-1 + АС-5 + АС-19	5%
Другие сочетания / Other combinations АС-4; АС-5 + АС-19; АС-1 + АС-7 + АС-19; АС-1 + АС-5 + АС-7 + АС-19; АС-7 + АС-19; АС-5 + АС-7; АС-4 + АС-7	18%

Частота выявления АНА у детей с АИЗ была следующая: RNP A -10,8% (13 случаев), Histone и dsDNA по 9,2% каждый (по 11 случаев каждый), SSA 52 и Nucleosome по 8,3% каждый (по 10 случаев каждый), SSA 60, RNP 70 и RNP/Sm по 7,5% каждый (по 9 случаев каждый), RPP – 6,7% (8 случаев), RNP C – 5,8% (7 случаев), SSB и Sm по 5% каждый (по 6 случаев каждый), M2 – 4,2% (5 случаев), Jo-1 и CENP-B по 1,7% каждый (по 2 случая), PM-Scl и PCNA по 0,8% каждый (по 1 случаю каждый). Антитела к Scl-70 антигену выявлены не были (табл. 2).

Таблица 2. Соотнесение типов свечения АНФ с наличием специфических АНА, выявленных с помощью панели Protia ANA Profile 18

Table 2. Correlation of the patterns of ANF luminescence with the presence of specific ANA detected by Protia ANA Profile 18

АНА АNA	Типы свечения АНФ Patterns of ANF
АНА АNA	АС1 (n = 10)	АС5 (n = 9)	АС-1 + АС-4 (n = 3)	АС-1 + АС-5 (n = 9)	АС-1 + АС-5 + АС-19 (n = 2)	АС-1 + АС-7 + АС-5 + АС-19 (n = 1)	АС-1 + АС-7 + АС-19 (n = 1)	АС-5 + АС-19 (n = 1)	АС-5 + АС-7 (n = 1)	АС-4 + АС-7 (n = 1)	АС-7 + АС-19 (n = 1)	АС-4 (n = 1)	Итого Total number
Jo-1	1	0	0	1	0	0	0	0	0	0	0	0	2
PM-Scl	0	0	1	0	0	0	0	0	0	0	0	0	1
CENP-B	1	0	0	0	0	0	1	0	0	0	0	0	2
Scl-70	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
SSA 60	2	2	0	3	0	0	0	1	0	0	0	1	9
SSA 52	3	2	0	3	0	0	0	1	0	0	0	1	10
SSB	1	2	0	1	0	0	0	0	0	0	1	1	6
M2	3	0	1	0	1	0	0	0	0	0	0	0	5
dsDNA	6	1	1	1	1	0	1	0	0	0	0	0	11
Nucleosome	4	0	1	3	0	1	1	0	0	0	0	0	10
Histone	4	0	1	3	1	1	1	0	0	0	0	0	11
PCNA	0	0	0	1	0	0	0	0	0	0	0	0	1
RPP	2	1	1	2	0	1	1	0	0	0	0	0	8
Sm	1	1	1	1	0	1	1	0	0	0	0	0	6
RNP 70	0	5	1	2	1	0	0	0	0	0	0	0	9
RNP A	3	6	1	2	0	1	0	0	0	0	0	0	13
RNP C	1	3	1	1	0	1	0	0	0	0	0	0	7
RNP/Sm	0	6	1	0	0	1	1	0	0	0	0	0	9
% выявленных специфических АНА % of identified specific ANA	17,5%	22,5%	2,5%	15%	5%	2,5%	2,5%	2,5%	0%	0%	2,5%	2,5%	75%

Сопоставление типов свечения АНФ и органоспецифических АНА у детей с АИЗ показало, что при моноварианте АС-1 (n = 10) определялись: Jo-1 в 1 случае, CENP-B – 1, SSA 60 – 2, SSA 52 – 3, SSB – 1, M2 – 3, dsDNA – 6, Nucleosome – 4, Histone – 4, RPP – 2, Sm – 1, RNP A – 3, RNP C – 1 (табл. 2). При моноварианте АС-5 (n = 9) были выявлены SSA 60 – в 2 случаях, SSA 52 – 2, SSB – 2, dsDNA – 1, RPP – 1, Sm – 1, RNP 70 – 5, RNP A – 6, RNP C – 3, RNP/Sm – 6. При сочетании АС-1 + АС-5 (n = 9) выявлялись Jo-1 – в 1 случае, SSA 60 – 3, SSA 52 – 3, SSB – 1, dsDNA – 1, Nucleosome – 3, Histone – 3, PCNA – 1, RPP – 2, Sm – 1, RNP 70 – 2, RNP A – 2, RNP C -1. При комбинации АС-1 + АС-5 выявлялись специфические АНА как для АС-1, так и для АС-5. При моноварианте АС-4 (n = 1) определялись SSA 60, SSA 52, SSB. Данные о специфических АНА при комбинациях разных типов свечения представлена в таблице 2. При сочетании АС-5 + АС-7 (n = 1) и АС-4 + АС-7 (n = 1) не были диагностированы специфические АНА.

В нашей выборке детей с АИЗ наиболее часто выявлялись гомогенный (АС-1) и ядерный крупногранулярный (АС-5) типы свечения АНФ, а также их комбинации. При гомогенном типе (АС- 1) свечения АНФ чаще выявлялись аутоантитела к dsDNA, Nucleosome и Histone, что согласуется с данными литературы о наличии этих специфических АНА и типов свечения АНФ у взрослых [9, 11]. При ядерном крупногранулярном (АС-5) определялись антитела к RNP 70, RNP A и RNP/Sm, при комбинации АС-1 + АС-5 – к SSA 60, SSA 52, Nucleosome и Histone, RNP 70, RNP A [9, 11]. Полученный результат отличается от данных литературы о наличии антител к SSA, которые ассоциированы с АС-4 типом свечения [7]. Нами выявлены единичные точки в ядре (АС-7) у 10% (4 детей), данный тип свечения АНФ характеризуется низкой положительной прогностической ценностью [7].

Входящие в панель Protia ANA Profile 18 клеточные антигены представляют собой набор наиболее частых мишеней для аутоагрессивных антител. В то же время нами обнаружено, что у 25% (10 пациентов) с установленным аутоиммунным заболеванием и высоким титром АНФ, уровни антител к исследуемым антигенам не достигли порогового уровня, установленного производителем, и таким образом классифицировались как отрицательные. Анализируя полученные данные, мы обратили внимание, что у 4 из 10 пациентов концентрация антител находится в 30% интервале ниже границы cut-off. Помимо этого, если анализировать все исследуемые образцы, концентрация ниже 30% уровня cut-off была выявлена в 8 образцах – для M2, в 7 – PCNA, в 6 – RNP C, в 5 – CENP-B и RNP A, в 4 – SSA 52 и RNP/Sm, в 3 – dsDNA, Histone и RPP, в 2 – Nucleosome, в 1 – PM-Scl и SSB.

Заключение

Исследование АНФ и специфических АНА с помощью панели Protia ANA Profile 18 выявило совпадение в 75% случаев. Для наиболее часто встречающихся типов свечения в нашей выборке детей удалось определить спектр преимущественно выявляемых АНА: при гомогенном типе (АС- 1) свечения АНФ чаще выявлялись аутоантитела к двуспиральной ДНК (dsDNA), нуклеосомам и гистонам; при ядерном крупногранулярном (АС-5) определялись антитела к экстрагируемым ядерным антигенам (антитела к рибонуклеопротеину (RNP 70, RNP A) и RNP/ Sm (антитела к белку Смита)); при комбинации АС-1 + АС-5 – к экстрагируемым ядерным антигенам (антитела к цитоплазматическому антигену (SSA 60, SSA 52), антитела к рибонуклеопротеину (RNP 70, RNP A)), нуклеосомам и гистонам. Возможно, для детей целесообразен пересмотр пороговых значений по ряду АНА, определенных на панели Protia ANA Profile 18. При выявлении позитивного АНФ на клеточной линии Hep-2 у детей целесообразно определение максимально широкого спектра АНА. Мы предполагаем, что с увеличением объема наблюдений удастся выявить более четкие взаимосвязи результатов этих диагностических методов.