Уровень экспрессии CD44 на различных клеточных линиях гематопоэтического происхождения

Полный текст

Введение

Во многих опухолевых клетках отмечается увеличение синтеза гиалуроновой кислоты, сопровождаемое увеличением уровня ферментов гиалуронидаз, что связано с ростом опухоли. В случае гемобластозов гиалуроновая кислота и гиалуронидазы также могут играть роль в развитии опухоли. Экспрессия CD44, который является рецептором для гиалуроновой кислоты, обнаружена при ряде гемобластозов [2, 3]. Например, экспрессия CD44 на опухолевых клетках при остром B-клеточном лимфобластном лейкозе является прогностическим показателем, указывающим на повышенный риск рецидива заболевания [4]. При остром Т-клеточном лимфобластном лейкозе также наблюдается высокий уровень CD44 на клетках и отмечается положительная связь с развитием инфильтрации внутренних органов у пациентов [6]. Следовательно, представляет интерес оценка экспрессии CD44 при гемобластозах вообще и на клеточных линиях гематопоэтического происхождения в частности, что позволит определить возможную роль CD44 в качестве мишени для терапии данных заболеваний и провести анализ возможной эффективности таргетной терапии в условиях in vitro.

Цель – проведение оценки уровня экспрессии CD44 на клетках Т-клеточной лимфомы 1301 и эритромиелоидного лейкоза К562.

Материалы и методы

Клеточная линия хронического миелогенного лейкоза К562 была получена из НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина (Москва, Российская Федерация). Линия клеток 1301 Т-клеточного лейкоза человека была приобретена из Европейской коллекции аутентифицированных клеточных культур, Sigma-Aldrich, Merck KGaA, Германия. Клетки в количестве 100 тыс. на пробу отмывались фосфатно-солевым буфером, далее окрашивались моноклональными антителами к CD44, меченными флуоресцентным маркером APC (Elabscience Biotechnology, Китай) в темноте в течение 20 минут при комнатной температуре, после чего отмывались однократно фосфатно-солевым буфером. Данные анализировали на проточном цитофлуориметре FACS Canto II (BD Biosciences, США) и программного обеспечения FACSDiva (Becton Dickinson). Всего для каждого образца было собрано не менее 10 000 событий.

Результаты и обсуждение

Данное исследование было проведено на клеточных линиях эритромиелоидного лейкоза (К562) и Т-клеточной лимфомы (1301). Выбор данных линий обусловлен происхождением из различных ростков кроветворения, миелоидного и лимфоидного соответственно. Для оценки экспрессии мы оценили долю клеток в культуре клеток с CD44, рецептором гиалуроновой кислоты (рис. 1).

 

Рисунок 1. Доля клеток, несущих на своей поверхности CD44 маркер, n = 4

Примечание. Данные представлены в виде медианы и интерквартильного размаха.

Figure 1. Proportion of cells carrying the CD44 marker on their surface, n = 4

Note. Data are presented as median and interquartile range.

 

Было показано, что большая часть клеток клеточной линии 1301 имели CD44 на поверхности, тогда как количество CD44⁺ клеток в линии К562 составляло около 6%.

Анализ среднего уровня флуоресценции поверхностного маркера (рис. 2) на CD44⁺ клетках также выявил, что плотность экспрессии данного маркера также была очень высокой в случае клеток линии 1301, тогда как на линии K562 наблюдаемый нами уровень экспрессии был приблизительно в три раза ниже.

 

Рисунок 2. Средний уровень флуоресценции поверхностного маркера CD44, n = 4

Примечание. Данные представлены в виде медианы и интерквартильного размаха.

Figure 2. Mean fluorescence intensity (MFI) of the surface marker CD44, n = 4

Note. Data are presented as median and interquartile range.

 

Заключение

Полученные результаты соответствуют литературным данным, было показано, что К562 слабо экспрессирует маркер CD44 [5]. Вероятно, различия по экспрессии ряда поверхностных маркеров внутри данной клеточной линии, проявляющиеся в относительном количестве клеток, экспрессирующих определенную молекулу, связано с гетерогенностью клеточной линии [1, 5, 7]. В то же время клетки линии 1301 гетерогенности по экспрессии CD44 не проявляли.

Следовательно, уровень экспрессии данного рецептора на опухолевых клетках в случае онкогематологии может варьировать в широких пределах и различаться у различных клеточных линий, несмотря на общее гемопоэтическое происхождение. Использование CD44 в качестве мишени для таргетной терапии может быть перспективным в случае высокого уровня экспрессии данного маркера на опухолевых клетках. В случае разработки систем для адресной доставки на основе данной мишени и проведении доклинических испытаний, требуется учитывать наличие данного маркера для моделей in vitro и in vivo.

Об авторах

Е. А. Пашкина

Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии; Новосибирский государственный медицинский университет

Автор, ответственный за переписку.
Email: eapashkina@niikim.ru

к.б.н., заведующая внебюджетной лабораторией регуляции иммунного ответа; доцент кафедры клинической иммунологии

Россия, Новосибирск; Новосибирск

М. В. Быкова

Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии

Email: eapashkina@niikim.ru

аспирант, младший научный сотрудник лаборатории регуляции иммунного ответа

Россия, Новосибирск

М. Т. Беришвили

Новосибирский государственный медицинский университет

Email: eapashkina@niikim.ru

студентка

Россия, Новосибирск

О. Л. Круглеева

Новосибирский государственный медицинский университет

Email: eapashkina@niikim.ru

к.м.н., заведующая кафедрой клинической иммунологии

Россия, Новосибирск

Список литературы

Дополнительные файлы