Анализ регуляторных Т-лимфоцитов у пациентов с черепно-мозговой травмой

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

В последние годы черепно-мозговая травма является одной из наиболее актуальных медицинских и социальных проблем, что обусловлено его распространенностью, поражением преимущественно лиц молодого, трудоспособного возраста, высокой летальностью, инвалидизацией и экономическими затратами на лечение и последующую реабилитацию пациентов. В настоящее время доказано участие иммунной системы организма в развитии нейровоспалительного процесса в ответ на травматическое повреждение головного мозга. Важными факторами, определяющими исход заболевания, являются популяции Treg, участвующие в индукции иммунологической толерантности, в качестве значимого компонент иммунорегуляции. В результате нашего исследования было обнаружено снижение относительного содержания Тreg в рамках общего лимфоцитарного пула, имеющего фенотип CD3+CD4+CD25bright в периферической крови пациентов 3-й (УСТ) и 4-й (УТС) групп в сравнении с данными группы контроля, а также снижение уровня относительного содержания Тreg (CD4+CD25+T-клетки), что обусловлено степенью повреждения нервной ткани и, как результат, их миграцией для подавления воспаления за счет продукции противовоспалительных цитокинов (TGF-â, IL-10). Популяция Тreg неоднородна, поэтому в рамках исследования был проведен анализ распределения Тreg по субпопуляциям, выявленным на основании экспрессии CD45RO и CD62L. При оценке субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов в рамках CD45RO и CD62L были установлены значимые изменения только у пациентов с ушибом головного мозга. Выявлены изменения в рамках пула «наивных» Т-регуляторных лимфоцитов с фенотипом CD3+CD4+CD25brightCD39+ Treg, способных к продукции широкого спектра цитокинов, специфичных для Th1, Th2, Th17, у пациентов с ушибом легкой, средней и тяжелой степени тяжести, в то время как уровень высокоактивных CD3+CD4+CD25brightCD73+ Treg был достоверно снижен у пациентов с ушибом средней и тяжелой степени тяжести. Данные изменения указывают на нарушение равновесия в иммунорегуляторных процессах как результат обширности повреждения тканей головного мозга.

Полный текст

Введение

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) является одной из наиболее актуальных медицинских и социальных проблем и относится к числу наиболее часто встречаемых форм патологии неврологического профиля. Частота ее возникновения достигает 100-749 человек в расчете на 100 тысяч населения [4, 9]. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), среди всех травматических повреждений ЧМТ характеризуется высоким уровнем летального исхода и инвалидизации (30-77%) [4], а гетерогенность вариантов предопределяет возникновение трудностей в оценке степени тяжести и прогнозировании раннего исхода заболевания.

При этом в последние годы доказано участие иммунной системы организма в развитии нейровоспалительного процесса в ответ на травматическое и другое повреждение мозга [5, 6]. Воспаление играет ключевую роль в патогенезе травматической болезни. Клетки иммунной системы вовлечены на всех стадиях нейровоспалительного каскада, начиная от процессов повреждения и репарации. При этом ключевой популяцией, обладающей супрессивной активностью, тем самым защищая нервную ткань от травматического повреждения, обладает популяция Treg [8].

Treg секретируют цитокины с противовоспалительной активностью (IL-10, TGF-β), ингибируют активность субпопуляций Т-хелперов и цитотоксических Т-клеток локально и на периферии. Так, усиление активности Treg приводит к уменьшению размеров поражения нервной ткани [7]. Протективный эффект Treg обусловлен как подавлением нейровоспалительного процесса, так и усиление нейрогенеза путем стимуляции процессов посттравматической неоваскуляризации.

Таким образом, одним из ключевых механизмов сдерживания гиперактивных иммунологических ответов после травматического повреждения головного мозга является активация FoxP3+Treg. Однако в настоящее время, несмотря на накопленный объем знаний, не существует oкoнчательной парадигмы o вовлечении субпoпуляций FoxP3+Treg в иммунопатогенезе травматической болезни в остром периоде.

Целью исследования является изучение роли регуляторных Т-лимфоцитов в пaтогенезе черепно-мозговой травмы различной степени тяжести.

Материалы и методы

Объектом исследования служила венозная кровь больных с ЧМТ различной степени тяжести (n = 110) в возрасте от 20 до 55 лет. Согласно международной классификации, все пациенты были разделены на 4 группы [3]: 1-я группа – больные с сотрясением головного мозга (СТГ); 2-я группа – с ушибом головного мозга легкой степени тяжести (УЛС); 3-я группа – с ушибом головного мозга средней степени тяжести (УСС); 4-я группа – с ушибом тяжелой степени тяжести (УТС). В контрольную группу вошли 48 практически здоровых лиц (женщины – 26 человек, мужчины – 22 человека) в возрасте от 18 до 55 лет (средний возраст 42,3±11,3 года), которые были донорами отделения переливания крови Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени акад. И.П. Павлова.

С целью оценки субпопуляционного состава регуляторных Т-лимфоцитов собирались образцы венозной крови в вaкуумные пробирки с содержанием K3ЭДТА. Все исследования проводились в день взятия крови. Подготовку образцов периферической крови и нaстройку проточного цитофлуориметра проводили в соответствии с рекомендациями, изложенными Байдун и соавторами [1]. Для выявления основных cубпопуляций Т-лимфоцитов и оценки уровня экспрессии ими CD39 и CD73 применялась панель моноклональных антител. К образцам периферической крови пациентов (100 мкл) вносили АТ в соответствии с рекомендациями производителя, после чего инкубировали 15 мин при комнатной температуре в защищенном от света месте [2]. Удаление эритроцитов из образцов проводили по безотмывочной технологии с использованием лизирующего раствора VersaLyse, к 975 мкл которого ex tempora добавляли 25 мкл фиксирующего раствора IOTest 3 Fixative Solution, методом проточной цитофлуориметрии с использованием диагностического прибора Navios (Beckman Coulter, США), оснащенного тремя лазерам с длинами волн излучения 405, 488 и 638 нм. Обработка данных проводилась с использованием программ: Navios Software v.1.2, KaluzaTM v. 2.0 (Beckman Coulter, США). Результаты содержания лимфоцитов представлены в виде: % – процента содержания от общего числа лимфоцитов или исследуемой популяции лимфоцитов; абсолютного (кл/ мкл, количество клеток в 1 мкл периферической крови) числа лимфоцитов. Статистическую обработку проводили при помощи программного обеспечения GraphPad Prism 6.00 (GraphPad Prism for Mac, США). Результаты были выражены в виде медианы (Ме) и интерквартильного диапазона (Q0,25-Q0,75). Для сравнения парных количественных значений полученных выборок использовали непараметрический критерий Манна–Уитни.

Результаты и обсуждение

По результатам исследования относительного содержания Тreg в рамках общего лимфоцитарного пула, имеющих фенотип CD3+CD4+CD25bright, в периферической крови выявлен пониженный уровень: c 3,3% (2,8-3,8) до 2,8% (2,5-3,3) у пациентов в 3-й (УСС) и до 2,6% (2,0-3,3) в 4-й группе (УТС), что логично согласуется с концепцией о перераспределении и последующей миграции клеток эффекторов в очаг воспаления.

Необходимо отметить, что популяция Тreg неоднородна, поэтому в рамках исследования был проведен анализ распределения Тreg по субпопуляциям, выявленным на основании экспрессии CD45RO и CD62L.

При оценке субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов в рамках CD45RO и CD62L были установлены значимые изменения только у пациентов с ушибом головного мозга. Это свидетельствует о том, что, возможно, степень тяжести травмы обуславливает степень активации Тreg. Проведенный анализ показал достоверно пониженный уровень относительного количества «наивных» Тreg: 19,8% (13,0-32,4) при р = 0,008 во 2-й группе (УЛС), 21,1% (14,0-29,0) при р = 0,002 в 3-й группе (УСС) и 14,9% (12,4-30,0) при р = 0,0004 в 4-й группе (УТС) против 32,4% (26,6-37,8). Схожие изменения были выявлены в рамках абсолютных значений в виде пониженного уровня у всех пацентов с ушибом головного мозга (p < 0,05). При этом Тreg «эффекторной памяти» имели достоверно повышенный относительный уровень в 3-й (УСС) (р = 0,003) и 4-й группах (УТС): 63,3% (63,0-81,6) при р = 0,003 и 61,7% (53,5-73,4) при р = 0,016, соответственно, против 55,5% (47,7-59,6). Абсолютное содержание также было повышено в 3-й (УСС) (р = 0,013) и 4-й группах (УТС) (р = 0,033): 5,4 кл/мкл (2,4-6,4) при р = 0,013 и 4,2 кл/мкл (2,42,8-7,4) при р = 0,033, соответственно, против 8,8 кл/мкл (4,4-9,2). Достоверных изменений абсолютного и относительного количества Тreg «центральной памяти» обнаружено не было (р > 0,05) ни в одной из обследованных групп. Результаты приведены в таблице 1.

 

ТАБЛИЦА 1. ОТНОСИТЕЛЬНОЕ И АБСОЛЮТНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ С ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМОЙ, НАХОДЯЩИХСЯ НА РАЗЛИЧНЫХ СТАДИЯХ СОЗРЕВАНИЯ, Me (Q0,25-Q0,75)

TABLE 1. RELATIVE AND THE ABSOLUTE NUMBER OF REGULATORY T CELL SUBSETS IN PERIPHERAL BLOOD FROM PATIENTS WITH TRAUMATIC BRAIN INJURY, Me (Q0.25-Q0.75)

Популяция

Тreg

Treg population

Фенотип

Phenotype

Группа 1

Group 1

Группа 2

Group 2

Группа 3

Group 3

Группа 4

Group 4

Группа 5

Group 5

р

«Наивные»

Тreg

"Naive" Treg

CD45RO-CD62L+

%

26,7

(20,7-

37,8)

19,8

(13,0-

32,4)

21,1

(14,0-

29,0)

14,9

(12,4-

30,0)

32,4

(26,6-

37,8)

р1-4 = 0,005

р2-5 = 0,008 р3-5 = 0,002

р4-5 = 0,0004

кл/мл

cell/mL

13,6

(3,6-

22,4)

4,8

(2,8-

16,5)

8,6

(3,8-

15,4)

7,9

(3,8-

13,6)

19,0

(12,8-

25,5)

р1-2 = 0,024

р2-5 = 0,001

р3-5 = 0,007

р4-5 = 0,001

Тreg

центральной

памяти

Central memory Treg

CD45RO+CD62L+

%

57,9

(53,8-

65,0)

61,1

(49,0-

76,0)

63,3

(37,0-

74,0)

61,7

(53,0-

73,4)

55,5

(48,0-

59,6)

 

кл/мл

cell/mL

29,0

(21,5-

33,2)

23,1

(15,3-

38,1)

17,2

(12,8-

36,7)

21,3

(11,5-

42,1)

29,0

(24,8-

45,0)

 

Тreg

эффекторной

памяти

Effector memory Treg

CD45RO+CD62L-

%

57,9

(53,8-

65,0)

61,1

(49,0-

76,0)

63,3

(63,0-

81,6)

61,7

(53,5-

73,4)

55,5

(47,7-

59,6)

р1-3 = 0,015

р3-5 = 0,03

р4-5 = 0,016

кл/мл

cell/mL

4,8

(2,5-

15,5)

3,8

(2,8-

11,9)

5,4

(2,4-

6,4)

4,2

(2,8-

7,4)

8,8

(4,4-

9,2)

р3-5 = 0,013

р4-5 = 0,033

Примечание. % – процент содержания от общей популяции регуляторных Т-лимфоцитов; группа 1 – сотрясение головного мозга; группа 2 – ушиб легкой степени тяжести; группа 3 – ушиб средней степени тяжести; группа 4 – ушиб тяжёлой степени тяжести; группа 5 – контрольная группа; p1-2, p1-3, p1-4, p1-5, p2-3, p2-4, p2-5, p3-4, p3-5, p4-5 – различия между соответствующими группами.

Note. % Tregs out of total lymphocyte count; group 1 – concussion; group 2 – mild brain contusion; group 3 – moderate brain contusion; group 4 – severe brain contusion; group 5 – control group; p1-2, p1-3, p1-4, p1-5, p2-3, p2-4, p2-5, p3-4, p3-5, p4-5 – differences between the respective groups.

 

Не менее важным является анализ, основанный на уровне экспрессии CD39 и CD73 (2 основные нуклеотидазы, осуществляющие расщепление АТФ до АДФ, пирофосвата и АМФ, а также аденозина и фосфата соответственно). Так, были проанализированы субпопуляции Тreg, ко-экспрессирующие CD39 или CD73 на мембранах. Среди «наивных» Тreg был выявлен повышенный уровень CD39-позитивных лимфоцитов: 0,2% (0,02-0,4) при р = 0,015 во 2-й (УЛС), 0,2% (0,01-0,7) при р = 0,027 в 3-й (УСС) и 0,09% (0,01-0,3) при р = 0,006 в 4-й группах (УТС) против 0,7% (0,2-1,2). Относительное содержание «наивных» Тreg, экспрессирующих CD73, было установлено повышенное содержание в 3-й (УСС) и 4-й группах (УТС): 1,3% (0,2-3,7) при р = 0,022 и 1,5% (0,002-5,1) при р = 0,048, соответственно, против 4,2% (2,6-5,5). Результаты приведены в таблице 2.

 

ТАБЛИЦА 2. СОДЕРЖАНИЕ CD39- И CD73- ПОЗИТИВНЫХ РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ У ПАЦИЕНТОВ С ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМОЙ, Me (Q0,25-Q0,75)

TABLE 2. RELATIVE NUMBER OF REGULATORY T CELL SUBSETS IN PERIPHERAL BLOOD FROM PATIENTS WITH TRAUMATIC BRAIN INJURY, Me (Q0.25-Q0.75)

Популяция

Тreg

Treg population

Фенотип

Phenotype

Группа 1

Group 1

Группа 2

Group 2

Группа 3

Group 3

Группа 4

Group 4

Группа 5

Group 5

р

CD39-позитивные регуляторные Т-лимфоциты

CD39-positive regulatory T cells

«Наивные» Тreg

"Naive" Treg

CD45RO-CD62L+

%

0,6

(0,2-

1,3)

0,2

(0,02-

0,40)

0,2

(0,01-

0,70)

0,09

(0,01-

0,30)

0,7

(0,2-

1,2)

р1-3 = 0,027 р1-4 = 0,0433

р2-5 = 0,015

р3-5 = 0,027

р4-5 = 0,0006

Тreg центральной памяти

Central memory Treg

CD45RO+CD62L+

%

1,7

(0,3-

1,7)

1,6

(0,8-

1,6)

1,0

(0,3-

1,9)

0,7

(0,5-

2,3)

1,9

(0,5-

2,7)

 

Тreg эффекторной памяти

Effector memory Treg

CD45RO+CD62L-

%

57,9

(53,8-

65,0)

61,1

(49,0-

76,0)

63,3

(63,0-

81,6)

61,7

(53,5-

73,4)

55,5

(47,7-

59,6)

 

CD73-позитивные регуляторные Т-лимфоциты

CD73-positive regulatory T cells

«Наивные» Тreg

"Naive" Treg

CD45RO-CD62L+

%

2,6

(1,3-

6,2)

2,4

(0,9-

6,1)

1,3

(0,2-

3,7)

1,5

(0,002-

5,100)

4,2

(2,6-

5,5)

р3-5 = 0,002

р4-5 = 0,048

Тreg центральной памяти

Central memory Treg

CD45RO+CD62L+

%

1,7

(0,8-

3,6)

2,2

(0,9-

3,0)

2,0

(0,7-

4,7)

3,4

(1,1-

5,6)

2,3

(1,4-

3,9)

 

Тreg эффекторной памяти

Effector memory Treg

CD45RO+CD62L-

%

3,9

(1,6-

6,8)

3,4

(1,3-

4,7)

2,3

(0,6-

5,3)

1,8

(0,9-

5,4)

2,5

(1,6-

4,2)

 

Примечание. % – процент содержания среди субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов: «наивные» Treg (CD45RO-CD62L+), Treg центральной памяти (CD45RO+CD62L+) и Treg эффекторной памяти (CD45RO+CD62L-); группа 1 – сотрясение головного мозга; группа 2 – ушиб легкой степени тяжести; группа 3 – ушиб средней степени тяжести; группа 4 – ушиб тяжёлой степени тяжести; группа 5 – контрольная группа.

Note. % Tregs out of total lymphocyte count: naive Tregs (CD45R0-CD62L+), central memory Tregs (CD45R0+CD62L+), effector memory Tregs (CD45RO+CD62L–); group 1 – concussion; group 2 – mild brain contusion; group 3 – moderate brain contusion; group 4 – severe brain contusion; group 5 – control group.

 

Заключение

Повышенный уровень CD39-позитивных лимфоцитов у пациентов с ушибом головного различной степени тяжести связан с механизмами иммуносупрессии за счет их способности к миграции в воспаленную ткань и последующим синтезом противовоспалительного аденозина, оказывающего супрессивное действие на клетки врожденного (в т. ч. активированной микроглии) и адаптивного иммунитета, что важно для ограничения процессов, направленных на вторичное повреждение ткани.

×

Об авторах

Анна Олеговна Норка

ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»; ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»

Email: norka-anna@mail.ru

старший лаборант кафедры иммунологии ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»; врач-невролог медицинского центра ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»

Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

С. В. Воробьев

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр имени В.А. Алмазова» Министерства здравоохранения РФ

Email: norka-anna@mail.ru

д.м.н., главный научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории неврологии и нейрореабилитации ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр имени В.А. Алмазова» Министерства здравоохранения РФ

Россия, Санкт-Петербург

Р. Н. Кузнецова

ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»; ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»

Email: norka-anna@mail.ru

к.м.н., доцент кафедры иммунологии ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»; врач – аллерголог-иммунолог медицинского центра ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»

Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

М. К. Серебрякова

ФГБОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова»

Email: norka-anna@mail.ru

аспирант, научный сотрудник отдела иммунологии ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»

Россия, Санкт-Петербург

И. В. Кудрявцев

ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»; ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»

Автор, ответственный за переписку.
Email: norka-anna@mail.ru

к.б.н., старший научный сотрудник отдела иммунологии ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»; доцент кафедры иммунологии ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ

Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

С. Н. Коваленко

ФГБОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова»

Email: norka-anna@mail.ru

преподаватель кафедры нейрохиругии ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова»

Россия, Санкт-Петербург

Д. Н. Монашенко

СПб ГБУЗ «Городская больница № 26», Санкт-Петербург

Email: norka-anna@mail.ru

к.м.н., врач-нейрохирург, заведующий 1 НХО СПб ГБУЗ «Городская больница № 26»

Россия, Санкт-Петербург

Список литературы

  1. Байдун Л.А., Зурочка А.В., Хайдуков С.В., Тотолян Арег А. Стандартизованная технология «Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов» (проект) // Медицинская иммунология, 2012. Т. 14, № 3. С. 255-268. [Baidun L.A., Zurochka A.V., Khaidukov S.V., Totolian Areg A. Methods. Standardized technology “Study of the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes using flow cytofluorometer-analyzers” (draft). Meditsinskaya immunologiya = Medical Immunology (Russia), 2012, Vol. 14, no. 3. pp. 255-268. (In Russ.)] doi: 10.15789/1563-0625-2012-3-255-268.
  2. Кудрявцев И.В., Субботовская А.И. Опыт измерения параметров иммунного статуса с использованием шестицветного цитофлуоримерического анализа // Медицинская иммунология, 2015. T. 17, № 1. С. 19-26. [Kudryavtsev I. V., Subbotovskaya A.I. Application of six-color flow cytometric analysis for immune profile monitoring. Meditsinskaya immunologiya = Medical Immunology (Russia), 2015, Vol. 17, no. 1, pp. 19-26. (In Russ.)] doi: 10.15789/1563-0625-2015-1-19-26.
  3. Лихтерман Л.Б. Черепно-мозговая травма. Диагностика и лечение. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. 488 с. [Likhterman L.B. Traumatic brain injury. Diagnosis and treatment]. Moscow. GEOTAR-Media, 2014. 488 pp.
  4. Сабиров Д.М., Росстальная А.Л., Махмудов М.А. Эпидемиологические особенности черепно-мозгового травматизма // Вестник экстренной медицины, 2019. № 2. С. 61-65. [Sabirov D.M., Rosstalnaya A.L., Makhmudov M.A. Epidemiological features of craniocerebral traumatism. Vestnik ekstrennoy meditsiny = Bulletin of Emergency Medicine, 2019, no. 2, pp. 61-65. (In Russ.)]
  5. Dantzer R., O’Connor J.C., Freund G.G., Johnson R.W., Kelley K.W. From inflammation to sickness and depression: when the immune system subjugates the brain. Nat. Rev. Neurosci., 2008, Vol. 9. no. 1, pp. 46-56. doi: 10.1038/nrn2297.
  6. Erickson M.A., Wilson M.L. In vitro modeling of blood-brain barrier and interface functions in neuroimmune communication. Fluids Barriers CNS, 2020, Vol. 17, no. 1, 26. doi: 10.1186/s12987-020-00187-3.
  7. Langeh U.U., Singh S. Targeting S100B protein as a surrogate biomarker and its role in various neurological disorders. Curr. Neuropharmacol., 2021, Vol. 9, no. 2, pp. 265-277.
  8. Nizamutdinov D., Shapiro L.A. Overview of traumatic brain injury: an immunological context overview of traumatic brain injury: an immunological context. Brain Sci., 2017, Vol. 7, no. 1, 11. doi: 10.3390/brainsci7010011.
  9. Peeters W.R., van den Brande R., Polinder S. Epidemiology of traumatic brain injury in Europe. Acta Neurochir. (Wien), 2015, Vol. 157, no. 10, pp. 1683-1696.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Норка А.О., Воробьев С.В., Кузнецова Р.Н., Серебрякова М.К., Кудрявцев И.В., Коваленко С.Н., Монашенко Д.Н., 2023

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № 77 - 11525 от 04.01.2002.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах