Выявление IgE-опосредованной сенсибилизации у детей методами иммуноферментного и иммунофлуоресцентного анализа

Полный текст

Введение

Аллергические заболевания занимают ведущие позиции в общей структуре нозологий и характеризуются глобальным ростом [9]. В последние 20-30 лет становится все более очевидным увеличение количества аллергических заболеваний [4]. Эта тенденция свойственна большинству стран, в том числе отмечается она и в нашей стране. По данным Всемирной организации здравоохранения аллергические заболевания являются одной из наиболее значимых проблем, особенно в педиатрии: у детей данная патология по распространенности занимает второе место и по прогнозам ВОЗ в XXI веке аллергические и иммунодефицитные заболевания по распространенности выйдут на первое место. Кроме того, повсеместно отмечается увеличение частоты тяжелых аллергических реакций, полисенсибилизации и все более раннее начало клинических проявлений, которые могут возникать у ребенка даже в возрасте нескольких месяцев жизни и в дальнейшем прогрессировать [5]. Эпидемиологические исследования, проведенные за последние десятилетия в различных регионах России, показали высокую (от 15% до 35%) распространенность аллергии, особенно у лиц детского возраста, и высокую вариабельность частоты сенсибилизации к определенным аллергенам и частоты симптомов аллергических заболеваний в различных географических регионах, обусловленную климатогеографическими, экологическими факторами, стилем жизни, уровнем здравоохранения [2, 3, 4, 8]. Так, в центральной полосе России поллиноз чаще связан с сенсибилизацией к пыльце злаковых трав, деревьев, сорных трав. На юге России основные аллергены амброзия, полынь, подсолнечник, кукуруза. В Сибири в спектре сенсибилизации преобладает пыльца деревьев и злаков. В странах центральной Европы ведущая роль в этиологии поллинозов принадлежит злаковым травам и деревьям, в северной Европе – злакам и сорнякам, в южной Европе – деревьям, кустарникам и травам, в США – амброзии.

Выявление IgE-опосредованной сенсибилизации с определением уровня IgE, являющихся одними из ключевых молекул в патогенезе аллергических болезней, в созданных тест-системах, позволяющих определять не только общую концентрацию IgE, а также выявлять аллергенспецифические IgE в биологических жидкостях значительно расширили возможности диагностики аллергий. [5]. Определение общего уровня IgE и концентрации аллергенспецифических IgE позволило проводить обследование пациентов в период обострения заболевания, на фоне приема антигистаминных препаратов, при выраженном поражении кожных покровов, низком пороге кожной чувствительности, а также обследовать беременных женщин с неспецифической кожной чувствительностью и детей любого возраста. Благодаря развитию технологии иммуноферментного и иммунофлуоресцентного анализа стало возможным точное количественное определение содержания антител класса E (IgE) в сыворотке крови пациентов. Современные технологии ИФА отличаются экономической доступностью, простотой эксперимента, универсальностью оборудования для всех ИФА-тестов, высокой чувствительностью и специфичностью, возможностью полноценной автоматизации ИФА-исследований. Наряду с этим, золотым стандартом аллергодиагностики, согласно Всемирной Организацией Здравоохранения, является метод ImmunoСАР. Метод ImmunoСАР обладает большей чувствительностью при низкой концентрации аллергенов в крови. Метод ImmunoСАР сохраняет за собой лидирующее значение при необходимости точного количественного определения концентрации IgE.

В связи с этим проведение своевременной и квалифицированной диагностики аллергопатологий с учетом региональных особенностей структуры причинно-значимой сенсибилизации, ее распространенности на тот или иной аллерген, а также выбором наиболее адекватного в конкретных условиях метода исследования становится наиболее актуальным.

Цель исследования – определить частоту выявления и структуру причинно-значимой сенсибилизации к основным группам аллергенов (пищевых, пыльцевых, бытовых, эпидермальных) у детей с аллергическими заболеваниями в Сибири при оценке результатов методами иммуноферментного и иммунофлуоресцентного анализа.

Материалы и методы

В консультативно-диагностическом центре аллергологии и иммунологии ГДКБ №2 им. В.П. Бисяриной г. Омска было обследовано 968 детей с аллергическим ренитом, бронхиальной астмой, крапивницей, аллергическим дерматитом в возрасте от 6 месяцев до 18 лет. В лаборатории клинической иммунологии всем детям была проведена диагностика образцов сыворотки крови in vitro и определены аллергенспецифические концентрации IgE к 109 аллергенам, включая пищевые аллергены (молоко, яйца, мясо, рыба, крупы, фрукты, овощи), бытовые аллергены (эпидермальные домашних животных, пыль и клещей домашней пыли, плесневые грибы), ингаляционные антигены (трава, деревья).

Иммунологическое обследование 435 детей с аллергическими заболеваниями проводили методом иммуноферментного анализа с использованием ИФА-анализатора Bio-Rad (США) и реагентов Dr. Fooke (Германия).

Наряду с ИФА основные аллерготесты у 533 детей проводили методом непрямой иммунофлуоресценции на анализаторе ImmunoCAP 250 (Швеция). По данным производителя, порог чувствительности анализатора составляет 0,01 кЕ/л, граница cut-off для специфических IgE принята равной 0,35 кЕ/л.

Статистическую обработку данных осуществляли с помощью программ Statistica 8,0 for Windows. Анализ характера распределения данных осуществляли по критерию Шапиро–Уилка. Использовали параметрические методы (t-критерий Стьюдента). Критический уровень значимости р принимался равным 0,05.

Результаты и обсуждение

Проведенное исследование выявило, что среди обследованных детей с аллергическими заболеваниями в Сибири преобладала IgE-опосредованная сенсибилизация на бытовые аллергены: компоненты пыли жилища, микроклещи, перхоть и эпителий животных, сапрофиты и условно-патогенные плесени. Специфические IgE были выявлены у 33,7% обследованных на данный вид аллергенов. IgE-опосредованная сенсибилизация на ингаляционные и пищевые аллергены встречалась реже, в 22,9% и 19,5% соответственно. Самым распространенным причинно-значимым аллергеном среди бытовых являлась домашняя пыль, специфические IgE к которым были выявлены в 90% (ИФА), затем следовали перхоть и эпителий животных – 86% (ИФА), клещи домашней – 13,5% (ИФА), 12,3% (ImmunoСАР), плесневые грибы – 1,4% (ИФА). Наиболее распространенным причинно-значимым аллергеном среди пыльцевых оказались аллергены деревьев (47,8% – ИФА, 28,4% – ImmunoСАР) за исключением тополя (4,5% и 0%), затем злаковых (23,5% и 22,1%) и сорных трав (20,1% и 27,4%).

Диагностическая значимость исследований зависела от их объема. При обследовании пациента на 1 предполагаемый аллерген положительный результат был выявлен лишь у 22%, на 2-5 аллергенов – у 50%, 6-10 аллергенов – 81%, более 11 аллергенов – 100%. Между объемом обследования и количеством выявленных причинно-значимых аллергенов наблюдалась прямая зависимость. Отмечено частое сочетание бытовых и респираторных аллергенов (71,5%), реже бытовых и пищевых (14,3%), бытовых и гельминтов (11,9%). Сочетание пищевых и респираторных аллергенов наблюдалось в 1,4%.

При сопоставлении результатов выявления специфических IgE методами ИФА и ImmunoСАР статистически значимых различий между количеством выявленных причинно-значимых аллергенов данными методами не обнаружено (табл. 1, 2). Процент положительных результатов в ИФА составил 76,1%, в ImmunoСАР – 79,8%.

 

Таблица 1. Количественная характеристика чувствительности методов ИФА и ImmunoСАР

Table 1. Quantitative characterization of the sensitivity of ELISA and ImmunoCAP

Концентрация специфического IgЕ Specific IgE concentration	Методы исследования Research methods
	ИФА Linked immunosorbent assay	ImmunoСАР
Сверхвысокая Superhigh	> 100 МЕ/мл > 100 IU/mL	> 100 кЕд/л > 100 kU/L
% выявления % of detection	10%	8%
Средняя, высокая Medium, high	1,0-99,9 МЕ/мл 1.0-99.9 IU/mL	0,7-99,9 кЕд/л 0.7-99.9 kU/L
% выявления % of detection	75%	73%
Низкая Low	0,5-1,0 МЕ/мл 0.5-1.0 IU/mL	0,35-0,79 кЕд/л 0.35-0.70 kU/L
% выявления % of detection	15%	19%

 

Таблица 2. Количество специфических IgE-антител в сыворотке крови у детей с аллергией

Table 2. Number of specific IgE antibodies in serum in children with allergies

Классы IgE-антител (референсные значения kU/L) IgE antibody classes (kU/L reference values)	Уровень антител Antibody level	Методы исследования Research methods		Процент совпадений Match percentage
		ИФА, МЕ/мл Linked immunosorbent assay, IU/ mL	ImmunoСАР, kU/L
0 (< 0,34)	Отрицательный Negative	–	< 0,34	–
1а (0,351-0,490)	Низкий Low	< 0,5	0,39±0,01	–
1в (0,50-0,69)	Низкий Low	0,61±0,08	0,57±0,03	93,4
2 (0,70-3,49)	Средний Medium	2,92±0,15	3,21±0,11	91,0
3 (3,50-17,49)	Высокий Hight	8,72±0,41	9,02±0,38	96,6
4 (17,50-49,99)	Очень высокий Superhight	30,70±0,81	29,20±0,68	95,1
5 (50,0-99,9)	Насыщенно высокий Saturated high	78,80±1,18	71,90±1,30	91,2
6 (> 100,0)	Крайне высокий Extremely high	100±0	100±0	100

Примечание. Классы, интерпретация результатов согласно стандартной классификации; kU/L = МЕ/мл = 2,4 нг/л.

Note. Classes, interpretation of results according to standard classification; kU/L = IU/mL = 2.4 ng/L.

 

Как видно из результатов исследования, наиболее частой причиной аллергических заболеваний у детей в Сибири являлись бытовые аллергены, с которыми связана IgE-опосредованная сенсибилизация у трети детей с аллергическими заболеваниями и прежде всего домашняя пыль. Домашняя пыль считается одним из наиболее активных ингаляционных аллергенов, гиперчувствительность к которой играет важную роль в развитии таких аллергических заболеваний, как аллергический ринит, бронхиальная астма, атопический дерматит [4]. Известно, что домашняя пыль по аллергенному составу многокомпонентна и ее аллергенный профиль могут определять клещевые, эпидермальные, грибковые, и другие инсектные аллергены, а также бактериальные, химические и прочие компоненты. Основным компонентом домашней пыли в жилых помещениях г. Москвы являются клещи домашней пыли и их аллергены, обусловливающих распространенность аллергии к внутрижилищным инсектным аллергенам [1, 7]. Нами выявлено, что у детей с аллергическими заболеваниями в Сибири IgЕ-опосредованная сенсибилизация связана прежде всего с эпидермальными компонентами, источниками которых являются домашние животные, которые в 7 раз чаще, чем клещи, участвовали в создания высокого аллергизирующего фона. Сенсибилизация к ингаляционным аллергенам домашних животных в настоящее время абсолютно правомерно считается одним из ключевых факторов риска аллергического ринита и бронхиальной астмы и в значительной степени определяет развитие тяжелых форм атопического дерматита и респираторных аллергозов [10, 11, 12]. При этом в отличие от других причин, вызывающих у больных симптомы аллергических заболеваний, в случае гиперчувствительности к аллергенам домашних животных элиминация последних зачастую связана с внутренним сопротивлением со стороны больных и их родственников, считающих домашних питомцев полноценными членами семьи. Безусловно, различные аспекты рассматриваемой проблемы связаны с огромным количеством безосновательных утверждений, ведущих к неадекватной профилактике и терапии, а также негативно отражающихся на социальной активности больных и их семей [4]. Иная картина наблюдалась у детей с аллергическими заболеваниями в Сибири, в основе которых лежала IgЕ-опосредованная сенсибилизация к ингаляционным и пищевым аллергенам, которые в 1,5 раза реже являлись причиной аллергии, чем бытовые. При этом наиболее распространенными среди ингаляционных были аллергены деревьев. Контакт с аллергенами злаковых и сорных трав в 2 раза реже, чем с аллергенами деревьев являлся причиной атопии.

Заключение

В результате исследований структуры причинно-значимой сенсибилизации при аллергических заболеваниях у части детей в Сибири было установлено наличие поливалентной сенсибилизации с преимущественным сочетанием бытовых и респираторных аллергенов, и более редким сочетанием бытовых и пищевых аллергенов.

Следует отметить, что уровень специфических IgE антител в сыворотке крови большинства обследованных детей с аллергическими заболеваниями в Сибири был высоким и одинаково хорошо выявлялся как методом ИФА, так и методом ImmunoСАР. При низкой концентрации специфических IgE в сыворотке крови наибольшей чувствительностью обладал метод ImmunoСАР, который сохраняет за собой лидирующее значение при необходимости точного количественного определения содержания IgE, особенно при низкой их концентрации. Возможность сочетания и рационального использования методов ИФА и ImmunoСАР повышают качество диагностики аллергических заболеваний у детей и ее доступность в регионах Сибири.

Об авторах

Т. Ф. Соколова

ФГБОУ ВО «Омский государственный медицинский университет»

Email: eleon_74@mail.ru

д.м.н., доцент кафедры фармакологии, клинической фармакологии

Россия, Омск

Е. Л. Щеглова

ФГБОУ ВО «Омский государственный медицинский университет»

Автор, ответственный за переписку.
Email: eleon_74@mail.ru

к.м.н., доцент кафедры патологической физиологии

Россия, Омск

Е. Ю. Соколов

Научно-клинический центр «Карповка»

Email: eleon_74@mail.ru

к.м.н., врач-психотерапевт

Россия, Санкт-Петербург

Ю. В. Емельянов

ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохраненения РФ

Email: eleon_74@mail.ru

к.м.н., доцент кафедры психотерапии Института клинической психологии и социальной работы

Россия, Москва

Список литературы

Дополнительные файлы