КУЛЬТУРА МОНОЦИТОВ КАК МОДЕЛЬ ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ КОМПОЗИЦИЙ IN VITRO

Резюме

Целью исследования являлось изучение иммунотропных эффектов фармацевтической композиции на основе метаболитов пробиотического штамма и растительных компонентов различного происхождения на моноциты человека in vitro. Авторами предложен экзометаболит S. boulardii как основа всех предлагаемых составов для регенерации эпителиоцитов человека. В состав смесей входили экстракт зверобоя и масло кориандра. Эффективность полученных фармацевтических средств оценивали на моноцитах взрослого человека. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли методом градиентного центрифугирования. Моноциты высевали в 24-луночные планшеты, сокультивировали с исследуемыми композициями (опыт) и без добавления композиций (контроль). Для идентификации поверхностных маркеров линии моноцитов/макрофагов использовались моноклональные антитела. Фенотипический анализ моноцитов проводили с помощью проточного цитофлуориметра CytoFLEX. Характеристика фенотипа M2 проводилась с использованием антител CD204, CD163 и CD206, тогда как фенотип M1 исследовался с использованием антител CD80 и CD86. Экспериментально доказано, что сокультивирование с экстрактом зверобоя индуцировало культивируемые моноциты к приобретению фенотипа M1, при этом наблюдалось достоверное повышение экспрессии всех поверхностных маркеров для TLR4 CD80 и CD86. Экспрессию маркёров фенотипа М2 по сравнению с нестимулированными клетками, экстракт кориандра напротив, достоверно подавлял. Процентное соотношение моноцитов M2 фенотипа CD204+, CD206+, CD163+ было увеличено после совместного культивирования как с маслом, так и после сокультивирования с метаболитами S. boulardii для всех исследуемых маркеров. Воздействие масла кориандра, так и смеси №1 значительно снизило экспрессию генов всех маркеров M1: TLR4, CD80, CD86. Понижающий эффект экспрессии маркеров M1 сохранялся после добавления метаболитов S. boulardii только для TLR4 и CD 86 по сравнению с контролем. Субпопуляция моноцитов фенотипа TLR4+, CD204+, CD206+, CD163+, коэкспрессирующие маркеры поляризации M1 и M2 выявлены при сокультивировании со смесями как 2, так и 3. Процент гибридных TLR4 +М2 моноцитов был значительно выше в смеси 2 по сравнению со смесью 3 (p<0,001 и p<0,05 соответственно). Таким образом, различные исследуемые смеси вызывают поляризацию моноцитов в М1/M2 в зависимости от состава композиции, что позволит рекомендовать к использованию в косметологии и, возможно, лечебной практике в зависимости от этиологии заболевания.