СКРИНИНГОВАЯ ОЦЕНКА ИММУННОГО СТАТУСА ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ КОРОНАРНЫМ СИНДРОМОМ

Полный текст

Скрининговая оценка иммунного статуса пациентов с острым коронарным синдромом

Введение. При постковидном синдроме, в том числе и у больных с острым коронарным синдромом (ОКС) выявлены различные нарушения Т- и В- звена иммунитета и NK-клеток [7].  Исследование полноценного иммунного статуса очень дорогостоящи и поэтому мы начали поиск вариантов оценки скрининговыми методами, к которым относятся молекулы кольцевой ДНК Т-рецепторных эксцизионных колец (TREC), каппа-делеционных рекомбинационных эксцизионных колец (KREC) и исследования с использованием тетр (СD 45⁺, 3⁺,4⁺, 8⁺ и СD 45⁺, 16-56⁺, 19⁺​​​​​​​), которые позволяют определять основные субпопуляции Т,В и NK​​​​​​​-лейкоцитов, как наиболее часто встречающиеся нарушения при посковиде [1].  В настоящей ситуации повышается число взрослых лиц с различными иммунодефицитами, в том числе первичными. В работе Сайтгалиной М.А. и др. [4] найдена статистически значимая разница в содержании TREC в группах разных возрастов. При ВИЧ-инфекции наблюдалось значимое падение достоверное снижение уровней TREC и KREC при длительном течении ВИЧ-инфекции [3].

В работе М.А. Сайтгалиной и др. [5] показано, что молекулярными маркерами степени выраженности Т- и В-лимфопений может быть содержание в периферической TREC и KREC.  TREC и KREC можно считать количественным маркером недифференцированных Т- и B-клеток в центральных лимфоидных органах и Т- и B-лимфоцитов на периферии. У 63,7% скончавшихся от COVID-19  больных содержание молекул TREС/KREC было ниже возрастных норм. TREС  и СD-3,4 снижались у части пациентов с постковидным синдромом [1]. Таже в исследовании Зурочки А.В. и др. показана дисфункция иммунной защиты в Т-клеточном звене больных с постковидным синдромом (ПКС), что возможно обусловлено нарушением образования Т-клеток в вилочковой железе. Длительное снижение уровня TREC в крови воздействует на иммунитет пациентов и требует иммунокорригирующего лечения. В то же время у лиц с ОКС и ПКС это не исследовалось прежде, поэтому актуальным было изучить у пациентов ОКС TREC и KREC и тетр (СD 45⁺, 3⁺,4⁺, 8⁺ и СD​​​​​​​ 45⁺, 16-56⁺, 19⁺​​​​​​​). 

Целью работы было определение различий в клинической картине и иммунологическом статусе у больных с ОКС и ПКС с учетом уровня TREС в периферической крови.

Материалы и методы.

Обследовано 32 пациента в возрасте от 40 до 65 лет с острым коронарным синдромом (ОКС) и болевшими прежде COVID-19 от 6 до 18 месяцев назад. Всем пациентам выполнялась коронароангиография и проводилось стентирование коронарных артерий. Также определяли общепринятые лабораторные показатели, инструментальное обследование, в том числе электрокардиографию, допплер-эхокардиографию.

Для определения уровней TREC в периферической крови  определяли численную мультиплексную ПЦР параллельно с амплификацией целевого фрагмента ДНК TREC и фрагментов двух нормировочных генов HPRT и RPP30, применяя набор реагентов «TREC/KREC-AMP PS» (ФБУН НИИ Пастера, Санкт-Петербург) [6]. Те данным, которые были получены, сопоставляли с нормальными значениями в зависимости от возраста [4].

При регистрации исследуемых субпопуляций лимфоцитов крови применяли реактивы компании Beckman Coulter (США) - TetraChrome. При определении Т-лимфоцитов (фенотип CD3⁺CD19^–), B-лимфоцитов (фенотип CD3^– CD19⁺), NK-клеток (фенотип CD3^– CD56⁺ CD16⁺) и T-NK лимфоцитов (фенотип CD3⁺ CD56⁺ CD16 использовали моноклональные антитела: CD45-FITC, CD56-RD1+CD16-PE, CD19-ECD и CD3-PC5. При регистрации Т-хелперов CD3⁺ CD4⁺ и цитотоксических Т-лимфоцитов CD3⁺ CD8⁺ применяли антитела CD45-FITC, CD4-RD1, CD8-ECD и CD3-PC5.  Анализ образцов исследовали на проточном цитофлуориметре Navios™ (Beckman Coulter, США) [8].

Результаты и обсуждение. Из  числа пациентов с ОКС и ПКС содержание TREC определено 32 больным, из них с нестабильной стенокардией было 28 лиц, а с острым инфарктом миокарда без подъема сегмента ST (ОИМ бпST) – 3. Пациентов разделили на группы в зависимости от содержания TREС: с пониженным уровнем TREС (одна группа ) и нормальным  (вторая группа). Что касается  KREC, то следует отметить, что только у одного больного из исследуемых был снижен показатель, у остальных в пределах нормы, поэтому в нашей работе у лиц с ОКС и ПКС мы не нашли влияние  KREC на их клинические и иммунологические особенности.

При сопоставлении лиц с ОКС и ПКС в зависимости от содержания TREC, необходимо зафиксировать, что была достоверная разница в содержании этого параметра между сравниваемыми группами (р<0,05) – таблица 1.

Были проанализированы клинические, лабораторные и инструментальные показатели у пациентов со сниженным количеством TREC (1 группа) и нормальным содержанием TREC (2 группа).

Таблица 1. Клиническая характеристика пациентов с ОКС и постковидным синдромом в зависимости от содержания TREC 

показатель	TREC пониженные (n=8)	TREC нормальные (n=24)	Т	p
TREC	5,23±2,17	196,26±46,44	2,35	0,013
поражение легочной ткани по компьютерной томографии (КТ), %
не было поражения (0%)	4 (50,00%)	16 (66,67%)
КТ-1 (до 25%)	3 (37,50%)	5 (20,83%)
Риск по Грейс, баллы	107,63±6,90	92,58±5,17	1,53	0,049
количество установленных стентов в настоящую госпитализацию
0	4 (50%)	10 (41,67%)
1	1 (12,5%)	9 (37,5%)
2	2 (25%)	4 (16,67%)
3	0	1 (4,17%)
4	1 (12,5%)	0
Фракция выброса (Симпсон), %
сохранная (более 50%)	3 (37,5%)	15 (62,5%)
промежуточная (40-49%)	3 (37,5%)	6 (25%)
низкая  (менее 40%)	2 (25%)	3 (12,5%)

Пациенты обеих групп не отличались по возрасту, давности перенесенного COVID-19, продолжительности госпитализации. Что касается поражения легочной ткани при COVID-19, то в первой группе КТ-1 (до25%) было выше, чем у лиц 2 группы: 37,5% пациентов и 20,83%, соответственно. Также было меньше отсутствие КТ-признаков ковидной пневмонии: у лиц с пониженными TREC 50%, в то время как у больных с повышенными TREC – 66,67%. Регистрировалось достоверное увеличение риска по Грейс (р<0,05) у лиц с низкими TREC. В настоящую госпитализацию обращает на себя внимание больший процент установления 2 стентов у больных с низкими TREC: 25% против 16,67%, соответственно. У одного пациента из 1 группы было имплантировано 4 стента в отличие от лиц с нормальными TREC. Сохранная ФВ преобладала у больных 2 группы, промежуточная и низкая ФВ превалировали у пациентов пониженными TREC (37,5 и 25%, соответственно).          Имелась тенденция к увеличению тропонина у больных 1 группы. ОИМ на момент настоящей госпитализации был у 1 больного среди лиц с низкими TREC (12,5%) и у 2 пациентов с нормальными  TREC (8,33%). Таким образом, согласно полученным данным, более тяжелая в клиническом плане была когорта пациентов с пониженными TREC.

В таблице 2 представлены сравнительные особенности иммунных показателей в зависимости от содержания TREC.

         Таблица 2. Сопоставление Т- и В-клеточного звена иммунитета и NK-клеток у пациентов ОКС и постковидным синдромом в зависимости от числа TREC

Показатель	TREC понижены (n=8)	TREC нормальные (n=24)
TREС	3,83±1,85 р1-2<0,018	194,99±46,65
T-хелперы (CD45+CD3+ CD4+), %	32,78±4,17 р1-2<0,003	45,62±2,04
T-хелперы (CD45+CD3+ CD4+), 106 кл/л	495,28±56,69 р1-2<0,006	828,92±65,59
T-цитотоксические (CD45+CD3+ CD8+), %	38,83±3,83 р1-2<0,003	27,27±1,76
T-цитотоксические (CD45+CD3+CD8+), 106 кл/л	635,86±113,51 р1-2<0,043	479,79±34,86
Иммунорегуляторный индекс(Tx/Tc)	0,93±0,26 р1-2<0,004	1,87±0,16
T-NK лимфоциты (CD45+CD3+CD 16+CD 56+), %	6,48±1,32 р1-2<0,05	4,33±0,59

                   У лиц со сниженными TREC регистрировалось меньшее относительное и абсолютное число Т-хелперов (р<0,01), был ниже иммунорегуляторный индекс (р<0,01). В то же время отмечалось в этой группе пациентов увеличение относительного (р<0,01) и абсолютного числа Т-цитотоксических клеток (р<0,05), а также процентного содержания Т-NK-лимфоцитов (р<0,05). Также у больных первой группы имелась тенденция к повышению NK-лимфоцитов и снижению В-лимфоцитов  (CD3^- CD19⁺).

Обсуждение полученных результатов. Предложенная система оценки позволяет выявить нарушения иммунной системы у больных ОКС (пациенты с ПКС и ОКС с низкими TREС). Учитывая что выборка пока не очень значительная, планируется дальнейшее исследование таких больных и при большем наборе пациентов возможно добавятся достоверности тех изменений к которым выявлена пока тенденция. То есть предложенная система скрининга работает и может быть предложена для широкого применения. Выявление нарушений при помощи предложенных скрининговых методов требует формирования подходов для иммунокоррекции  таких нарушений, которые в настоящее время в кардиологии только обсуждаются [9].

Выводы:

1. У пациентов с острым коронарным синдромом и ПКС со сниженными TREС наблюдалась более тяжелая клиническая картина, но учитывая, что выборка пока не очень значительная, планируется дальнейшее исследование таких больных и при большем наборе пациентов возможно добавятся достоверности тех изменений, к которым выявлена пока тенденция.
2. Выявление нарушений при помощи предложенных скрининговых методов требует формирования подходов для иммунокоррекции  таких нарушений, которые в настоящее время в кардиологии только обсуждаются.

Работа выполнена по теме Гос. заданий ИИФ УрО РАН «Иммунофизиологические и патофизиологические механизмы регуляции и коррекции функций организма» № гос. регистрации 122020900136-4, НИИВИ «ВИРОМ» «Изучение механизмов формирования хронической вирусной инфекции у пациентов с постковидным синдромом и нарушением функций иммунной системы. Разработка патогенетических подходов к эффективной профилактике и иммунокоррекции выявленных нарушений у пациентов с «постковидным синдромом» № гос. регистрации 124031500020-4

Об авторах

Элеонора Аркадьевна Сафронова

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства Здравоохранения Российской Федерации, г.Челябинск, Россия; Медико-биологический университет инноваций и непрерывного образования ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации – Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна» Федерального медико-биологического агентства, Москва, Россия

Автор, ответственный за переписку.
Email: safronovaeleonora68@gmail.com

кандидат медицинских наук, доцент, доцент кафедры поликлинической терапии и клинической фармакологии; преподаватель кафедры терапии

Россия, 454141 город Челябинск, улица Воровского, дом 64;123098, г. Москва, ул.Живописная д.46, стр.8

Лиана Валентиновна Рябова

Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: lianarabowa@rambler.ru

д.м.н., доцент, профессор кафедры безопасности жизнедеятельности, медицины катастроф, скорой и неотложной медицинской помощи 

Россия, Российская Федерация, 454141 город Челябинск, улица Воровского, дом 64

Герман Петрович Сарапульцев

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской академии наук, г. Екатеринбург, Россия

Email: dr.sarapultsev@yandex.ru

очный аспирант Федерального государственное бюджетного учреждения науки Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской академии наук, г. Екатеринбург, Россия

Россия, 620078, Российская Федерация, г. Екатеринбург ул. Первомайская, 106

Список литературы

Дополнительные файлы