Скрининговая оценка иммунного статуса пациентов с острым коронарным синдромом

Полный текст

Введение

При постковидном синдроме, в том числе и у больных с острым коронарным синдромом (ОКС) выявлены различные нарушения Т- и В-звена иммунитета и NK-клеток [7]. Исследование полноценного иммунного статуса очень дорогостоящи и поэтому мы начали поиск вариантов оценки скрининговыми методами, к которым относятся молекулы кольцевой ДНК Т-рецепторных эксцизионных колец (TREC), каппа-делеционных рекомбинационных эксцизионных колец (KREC) и исследования с использованием тетр (СD45⁺, СD3⁺, СD4⁺, СD8⁺ и СD45⁺, СD16^-СD56⁺, СD19⁺), которые позволяют определять основные субпопуляции Т-, В- и NK-лейкоцитов, как наиболее часто встречающиеся нарушения при посковиде [1]. В настоящей ситуации повышается число взрослых лиц с различными иммунодефицитами, в том числе первичными. В работе М.А. Сайтгалиной и соавт. [4] найдена статистически значимая разница в содержании TREC в группах разных возрастов. При ВИЧ-инфекции наблюдалось значимое падение достоверное снижение уровней TREC и KREC при длительном течении ВИЧ-инфекции [3].

В работе М.А. Сайтгалиной и соавт. [5] показано, что молекулярными маркерами степени выраженности Т- и В-лимфопений может быть содержание в периферической TREC и KREC. TREC и KREC можно считать количественным маркером недифференцированных Т- и B-клеток в центральных лимфоидных органах и Т- и B-лимфоцитов на периферии. У 63,7% скончавшихся от COVID-19 больных содержание молекул TREС/KREC было ниже возрастных норм. TREС и СD-3,4 снижались у части пациентов с постковидным синдромом (ПКС) [1]. Таже в исследовании А.В. Зурочки и соавт. показана дисфункция иммунной защиты в Т-клеточном звене больных с ПКС, что возможно обусловлено нарушением образования Т-клеток в вилочковой железе. Длительное снижение уровня TREC в крови воздействует на иммунитет пациентов и требует иммунокорригирующего лечения. В то же время у лиц с ОКС и ПКС это не исследовалось прежде, поэтому актуальным было изучить у пациентов ОКС TREC и KREC и тетр (СD45⁺, СD3⁺, СD4⁺, СD8⁺ и СD45⁺, СD16^-СD56⁺, СD19⁺).

Целью работы было определение различий в клинической картине и иммунологическом статусе у больных с ОКС и ПКС с учетом уровня TREС в периферической крови.

Материалы и методы

Обследовано 32 пациента в возрасте от 40 до 65 лет с ОКС и болевшими прежде COVID-19 от 6 до 18 месяцев назад. Всем пациентам выполнялась коронароангиография и проводилось стентирование коронарных артерий. Также определяли общепринятые лабораторные показатели, инструментальное обследование, в том числе электрокардиографию, доплер-эхокардиографию.

Для определения уровней TREC в периферической крови определяли численную мультиплексную ПЦР параллельно с амплификацией целевого фрагмента ДНК TREC и фрагментов двух нормировочных генов HPRT и RPP30, применяя набор реагентов TREC/KREC-AMP PS (ФБУН НИИ Пастера, Санкт-Петербург) [6]. Те данные, которые были получены, сопоставляли с нормальными значениями в зависимости от возраста [4].

При регистрации исследуемых субпопуляций лимфоцитов крови применяли реактивы компании Beckman Coulter (США) – TetraChrome. При определении Т-лимфоцитов (фенотип CD3⁺CD19^-), B-лимфоцитов (фенотип CD3^-CD19⁺), NK-клеток (фенотип CD3^-CD56⁺CD16⁺) и T-NK-лимфоцитов (фенотип CD3⁺CD56⁺CD16⁺) использовали моноклональные антитела: CD45-FITC, CD56-RD1+CD16-PE, CD19-ECD и CD3-PC5. При регистрации Т-хелперов CD3⁺CD4⁺ и цитотоксических Т-лимфоцитов CD3⁺CD8⁺ применяли антитела CD45-FITC, CD4-RD1, CD8-ECD и CD3-PC5. Анализ образцов исследовали на проточном цитофлуориметре Navios™ (Beckman Coulter, США) [8].

Результаты и обсуждение

Из числа пациентов с ОКС и ПКС содержание TREC определено 32 больным, из них с нестабильной стенокардией было 28 лиц, а с острым инфарктом миокарда без подъема сегмента ST (ОИМ бпST) – 3. Пациентов разделили на группы в зависимости от содержания TREС: с пониженным уровнем TREС (1-я группа ) и нормальным (2-я группа). Что касается KREC, то следует отметить, что только у одного больного из исследуемых был снижен показатель, у остальных в пределах нормы, поэтому в нашей работе у лиц с ОКС и ПКС мы не обнаружили влияния KREC на их клинические и иммунологические особенности.

При сопоставлении лиц с ОКС и ПКС в зависимости от содержания TREC, необходимо зафиксировать, что была достоверная разница в содержании этого параметра между сравниваемыми группами (р < 0,05) (табл. 1).

 

Таблица 1. Клиническая характеристика пациентов с ОКС и постковидным синдромом в зависимости от содержания TREC

Table 1. Clinical characteristics of patients with ACS and post-COVID syndrome depending on the content of TREC

Показатель Indicator	TREC пониженные TREC decreased (n = 8)	TREC нормальные TREC normal (n = 24)	Т	p
TREC	5,23±2,17	196,26±46,44	2,35	0,013
Поражение легочной ткани по компьютерной томографии (КТ), % Lung tissue damage according to computed tomography (CT), %
Не было поражения (0%) There was no defeat (0%)	4 (50,00%)	16 (66,67%)
КТ-1 (до 25%) CT-1 (up to 25%)	3 (37,50%)	5 (20,83%)
Риск по Грейс, баллы Risk by Grace, points	107,63±6,90	92,58±5,17	1,53	0,049
Количество установленных стентов в настоящую госпитализацию Number of stents installed during current hospitalization
0	4 (50%)	10 (41,67%)
1	1 (12,5%)	9 (37,5%)
2	2 (25%)	4 (16,67%)
3	0	1 (4,17%)
4	1 (12,5%)	0
Фракция выброса (Симпсон), % Ejection fraction (Simpson), %
Сохранная (более 50%) Preserved (more than 50%)	3 (37,5%)	15 (62,5%)
Промежуточная (40-49%) Intermediate (40-49%)	3 (37,5%)	6 (25%)
Низкая (менее 40%) Low (less than 40%)	2 (25%)	3 (12,5%)

 

Были проанализированы клинические, лабораторные и инструментальные показатели у пациентов со сниженным количеством TREC (1-я группа) и нормальным содержанием TREC (2-я группа).

Пациенты обеих групп не отличались по возрасту, давности перенесенного COVID-19, продолжительности госпитализации. Что касается поражения легочной ткани при COVID-19, то в 1-й группе КТ-1 (до 25%) было выше, чем у лиц 2-й группы: 37,5% пациентов и 20,83% соответственно. Также было меньше отсутствие КТ-признаков ковидной пневмонии: у лиц с пониженными TREC 50%, в то время как у больных с повышенными TREC – 66,67%. Регистрировалось достоверное увеличение риска по Грейс (р < 0,05) у лиц с низкими TREC. В настоящую госпитализацию обращает на себя внимание больший процент установления 2 стентов у больных с низкими TREC: 25% против 16,67% соответственно. У одного пациента из 1-й группы было имплантировано 4 стента в отличие от лиц с нормальными TREC. Сохранная ФВ преобладала у больных 2-й группы, промежуточная и низкая ФВ превалировали у пациентов пониженными TREC (37,5 и 25% соответственно). Имелась тенденция к увеличению тропонина у больных 1-й группы. ОИМ на момент настоящей госпитализации был у 1 больного среди лиц с низкими TREC (12,5%) и у 2 пациентов с нормальными TREC (8,33%). Таким образом, согласно полученным данным, более тяжелая в клиническом плане была когорта пациентов с пониженными TREC.

В таблице 2 представлены сравнительные особенности иммунных показателей в зависимости от содержания TREC.

 

Таблица 2. Сопоставление Т- и В-клеточного звена иммунитета и NK-клеток у пациентов с ОКС и постковидным синдромом в зависимости от числа TREC

Table 2. Comparison of T and B cell immunity and NK cells in patients with ACS and post-COVID syndrome depending on the number of TREC

Показатель Indicator	TREC понижены TREC decreased (n = 8)	TREC нормальные TREC normal (n = 24)
TREС	3,83±1,85 р1-2 < 0,018	194,99±46,65
T-хелперы (CD45+CD3+CD4+), % T helpers (CD45+CD3+CD4+), %	32,78±4,17 р1-2 < 0,003	45,62±2,04
T-хелперы (CD45+CD3+CD4+), 106 кл/л T helpers (CD45+CD3+CD4+), 106 cells/L	495,28±56,69 р1-2 < 0,006	828,92±65,59
T-цитотоксические (CD45+CD3+CD8+), % T cytotoxic (CD45+CD3+CD8+), %	38,83±3,83 р1-2 < 0,003	27,27±1,76
T-цитотоксические (CD45+CD3+CD8+), 106 кл/л T cytotoxic (CD45+CD3+CD8+), 106 cells/L	635,86±113,51 р1-2 < 0,043	479,79±34,86
Иммунорегуляторный индекс(Tx/Tc) Immunoregulatory index (Tx/Tc)	0,93±0,26 р1-2 < 0,004	1,87±0,16
T-NK-лимфоциты (CD45+CD3+CD16+CD56+), % T-NK lymphocytes (CD45+CD3+CD16+CD56+), %	6,48±1,32 р1-2 < 0,05	4,33±0,59

 

У лиц со сниженными TREC регистрировалось меньшее относительное и абсолютное число Т-хелперов (р < 0,01), был ниже иммунорегуляторный индекс (р < 0,01). В то же время отмечалось в этой группе пациентов увеличение относительного (р < 0,01) и абсолютного числа Т-цитотоксических клеток (р < 0,05), а также процентного содержания Т-NK-лимфоцитов (р < 0,05). Также у больных 1-й группы имелась тенденция к повышению NK-лимфоцитов и снижению В-лимфоцитов (CD3^-CD19⁺).

Предложенная система оценки позволяет выявить нарушения иммунной системы у больных с ОКС (пациенты с ПКС и ОКС с низкими TREС). Учитывая что выборка пока не очень значительная, планируется дальнейшее исследование таких больных и при большем наборе пациентов возможно добавятся достоверности тех изменений к которым выявлена пока тенденция. То есть предложенная система скрининга работает и может быть предложена для широкого применения. Выявление нарушений при помощи предложенных скрининговых методов требует формирования подходов для иммунокоррекции таких нарушений, которые в настоящее время в кардиологии только обсуждаются [9].

Выводы

1. У пациентов с ОКС и ПКС со сниженными TREС наблюдалась более тяжелая клиническая картина, но учитывая, что выборка пока не очень значительная, планируется дальнейшее исследование таких больных и при большем наборе пациентов возможно добавятся достоверности тех изменений, к которым выявлена пока тенденция.
2. Выявление нарушений при помощи предложенных скрининговых методов требует формирования подходов для иммунокоррекции таких нарушений, которые в настоящее время в кардиологии только обсуждаются.

Об авторах

Э. А. Сафронова

ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ; Медико-биологический университет инноваций и непрерывного образования ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации – Федеральный медицинский биофизический центр имени А.И. Бурназяна» Федерального медико-биологического агентства

Автор, ответственный за переписку.
Email: safronovaeleonora68@gmail.com

к.м.н., доцент, доцент кафедры поликлинической терапии и клинической фармакологии, преподаватель кафедры терапии

Россия, Челябинск; Москва

Л. В. Рябова

ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ

Email: safronovaeleonora68@gmail.com

д.м.н., доцент, профессор кафедры безопасности жизнедеятельности, медицины катастроф, скорой и неотложной медицинской помощи

Россия, Челябинск

Г. П. Сарапульцев

ФГБУН «Институт иммунологии и физиологии» Уральского отделения Российской академии наук

Email: safronovaeleonora68@gmail.com

очный аспирант

Россия, Екатеринбург

Список литературы

Дополнительные файлы