Содержание хемокинов RANTES, IL-8 и MIP-1β в лизатах тромбоцитов, полученных из донорской крови

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Ростовые добавки, получаемые из сыворотки животных, имеют достаточно лабильный диапазон содержания конкретного ростового фактора и потенциально могут быть инфицированы. С другой стороны, ростовые добавки, получаемые из животного сырья, содержат композицию белков, витаминов и микроэлементов, необходимых для полноценного роста клеток, а указанные недостатки возможно преодолеть заменой на продукт, получаемый из донорской крови человека. Лизат тромбоцитов имеет в составе биологически активные молекулы, заключенные в различных гранулах этих форменных элементов крови. Концентрация отдельных компонентов в получаемом продукте различна и, по-видимому, зависит не только от пола и группы крови, но и от других, пока не установленных индивидуальных особенностей. Целью исследования было изучить содержание некоторых членов семейства хемокиниов, в частности: RANTES, MIP-1β и IL-8 в лизатах тромбоцитов, полученных от здоровых доноров. Наиболее высокие концентрации цитокина MIP-1β отмечены у доноров с резус-отрицательной принадлежностью, у женщин с третьей и мужчин четвертой группы крови. Самые высокие значения содержания IL-8 в лизате тромбоцитов зарегистрированы также у мужчин и женщин с резус-отрицательной кровью четвертой группы. Лизат тромбоцитов волонтеров второй группы крови (мужчины резус-отрицательные, женщины резус-положительные) содержал наибольшее количество RANTES. Обнаружены достоверные различия между уровнем фактора MIP-1β в тромболизате у мужчин и женщин со второй A (II) и четвертой AB (IV) группами резус-отрицательной крови; между женщинами третьей B (III) группы крови с разным резус-фактором. Кроме того, статистически значимо различались значения хемокина RANTES/CCL5 в тромболизате крови в группах мужчин и женщин со второй A (II) (с R (+) и R (-)) и четвертой AB (IV) группами крови (с R (+)). Интересно, что у мужчин с первой 0 (I) и второй A (II) группами крови с отрицательным резус-фактором содержание хемокина RANTES/CCL5 в тромболизате крови значимо превышало аналогичные значения в таковом, полученном от резус-положительных мужчин. Связь между принадлежностью доноров к той или иной группе крови и содержанием указанных хемокинов пока не ясна, в дальнейшем глубокий биоинформатический анализ позволит вскрыть пока не очевидную коммуникацию между этими показателями.

Полный текст

Введение

Для наращивания целевых клеток, предназначенных для использования в качестве биомедицинских клеточных продуктов (БМКП), наиболее оптимальным является выбор так называемых синтетических сред, позволяющих обеспечить достаточно стандартные условия культивирования [5]. Другим, не менее важным компонентом систем культивирования, являются ростовые факторы, обеспечивающие, с одной стороны, стабильный рост культуры, ее функциональность, с другой – нужное направление дифференцировки клеток [14]. Выбор между синтетическими и ростовыми добавками животного происхождения является предметом дискуссии среди исследователей. Синтетические (рекомбинантные) ростовые факторы легко дозируются и не подвержены факторам контаминации. Для ростовых добавок, получаемых от животных (в т. ч. от человека), потенциально всегда существует риск инфицирования и достаточно широкий (лабильный) диапазон содержания в них конкретного ростового фактора. В то же время они содержат композицию белков, витаминов и микроэлементов, необходимых для полноценного роста клеток. Указанные недостатки применения ростовых добавок животного происхождения возможно преодолеть заменой на продукт, получаемый из донорской крови человека. В этом отношении, многообещающим источником ростовых факторов является лизат тромбоцитов, получаемый из донорской крови. Роль тромбоцитов в процессах гемостаза, воспаления и регенерации общеизвестна и обеспечивается биологически активными молекулами, содержащимися в различных гранулах этих форменных элементах крови. Основным резервуаром, содержащим гомеостатические соединения, являются альфа-гранулы тромбоцитов. В этих специализированных органеллах содержатся белки свертывания крови (фактор V, фактор IX, фактор XIII, антитромбин, плазминоген, ингибитор активатора плазминогена 1), фибриноген, P-селектин, тромбоцитарный фактор-4, B-тромбоглобулин, фактор фон Виллебранда, фибронектин, хемотаксические агенты, опосредующие процесс свертывания [1]. Кроме того, альфа-гранулы тромбоцитов включают в себя ряд уникальных медиаторов/молекул, принимающих участие в реакциях иммунной системы, механизмах воспаления и регенерации. Среди них можно выделить: тромбоцитарные факторы роста (PDGF), трансформирующие факторы роста (TGF-β), факторы роста эндотелия сосудов (VEGF), факторы роста эпителия (EGF), факторы роста фибробластов (FGF), инсулиноподобные факторы роста (IGF), ряд интерлейкинов и хемокинов: IL-1β, IL-1Ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-8, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, PF4 и TNFα [2, 3, 15]. Содержимое этих гранул высвобождается после активации тромбоцитов, попадая в окружающую среду через их канальцевую систему. Основное внимание специалистов, работающих в области регенеративной медицины, сосредоточено на содержании в продуктах, обогащенных тромбоцитами, различных ростовых факторов, про- и противовоспалительных цитокинов. Однако, несмотря на многочисленные сведения, на сегодняшний день нет четких данных о количественном содержании членов семейства хемокинов, в частности RANTES, MIP-1β и IL-8 в лизатах тромбоцитов, полученных от разных групп доноров, в зависимости от пола, группы крови и резус-фактора. Изучение этого вопроса и определило цель настоящего исследования.

Материалы и методы

Для решения поставленной цели в лизатах тромбоцитов, выделенных из донорской крови 112 здоровых доноров, мы повели оценку содержания фактора активации и секреции нормальных Т-лимфоцитов (Regulated upon Activation, Normal T cell Expressed and Secreted, RANTES, CCl5), фактора хемотаксисса нейтрофилов (интерлейкин-8, IL-8) и макрофагального воспалительного белка 1β (MIP-1β). Образцы донорского материала получали на ГБУЗ «Станция переливания крови Калининградской области». Группа добровольцев в возрасте от 26 до 45 лет состояла из 64 женщин и 64 мужчин. Все волонтеры были разбиты на подгруппы по принадлежности к группам крови и резус-фактору. Донорская кровь (в объеме 450 мл) на станции переливания крови проходила следующие технологические процедуры: центрифугирование с целью выделения эритроцитарной массы и плазмы. Осадок в виде тромбо-лейкоцитарной взвеси в объеме от 50 до 80 мл поступал для дальнейшего анализа в Центр иммунологии и клеточных биотехнологий (ЦИКБ) БФУ им. И. Канта. Экспериментальные образцы были стандартизированы по количеству тромбоцитов – 1 × 108 тр/мл. Лизат тромбоцитов получали по оригинальной методике, разработанной в ЦИКБ. В серии экспериментов нами была адаптирована и апробирована методика получения лизата тромбоцитов, с определением оптимальных режимов замораживания, размораживания и центрифугирования тромбоцитарного концентрата. Содержание факторов: RANTES, IL-8 и MIP-1β в тромболизатах, полученных от отдельных групп доноров, определяли методом проточной флуориметрии, с использованием автоматизированной системы анализа белков (Bio-Plex Protein Assay System, Bio-Rad, США) и коммерческой тест-системы (Bio-Plex Pro Human Cytokine 27-plex Assay, Bio-Rad, Hercules, CA, США), в соответствии с протоколом производителя, с использованием программного обеспечения (Bio-Plex Manager, Bio-Rad, США).

Статистическая обработка полученных результатов

Анализ совокупности экспериментальных данных, полученных в ходе исследования, проводился с помощью программы по статистической обработке экспериментальных данных SPSS Statistics. Исследование нормальности распределения количественных характеристик проводили с использованием критерия Краскела–Уоллиса. Так как данные соответствовали нормальному распределению, гипотезу о равенстве выборочных средних проверяли с использованием t-критерия Стьюдента (двусторонний, непарный с неравным отклонением) для сравнения групп. Различия считались достоверными при уровне значимости р < 0,05.

Результаты и обсуждение

Секреторный потенциал тромбоцитов зависит от их предшественника – мегакариоцита [13]. В настоящее время показано, что мегакариоциты посредством цитокиновой сигнализации не только принимают активное участие в иммунологических реакциях врожденного и адаптивного иммунитета, но и регулируют развитие иммунных клеток в красном костном мозге [4, 8]. Поэтому наличие не только ростовых факторов, но и широкого спектра интерлейкинов и хемокинов, в первую очередь в альфа-гранулах тромбоцитов, с биологической точки зрения является вполне логичной. Хемокины относятся к группе внеклеточных белковых молекул, экспрессируемых большинством ядросодержащих клеток и, как показали исследования последних лет, безъядерными тромбоцитами [3].

Одним из 28 хемокинов подкласса СС, секретируемым в том числе активированными тромбоцитами, является RANTES (CCl5). Помимо тромбоцитов, главными его продуцентами выступают также Т-лимфоциты и лимфатические эпителиальные клетки. Основные биологические эффекты этого цитокина реализуются через экспрессируемые на лимфоцитах, эозинофилах, тромбоцитах, тучных и мезенхимальных клетках рецепторы CCR1, CCR3, CCR4 и CCR5 [7]. Будучи мощным хемоантрактантом для клеток, принимающих участие в реакциях воспаления, он также привлекает в очаг воспаления ММСК, принимая таким образом участие в процессах регенерации [10]. К хемокинам семейства СС относится также выявленный нами в лизате тромбоцитов MIP-1β (CCL4). Основными продуцентами этого хемокина являются макрофаги, дендритные клетки и лифоциты [12]. Биологические эффекты CCL4 связаны, в первую очередь, с хемотаксисом в очаг воспаления нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, а затем и моноцитов, дендритных клеток, Т-лимфоцитов NK-клеток, фибробластов и тромбоцитов. Помимо хемотаксиса, он вызывает синтез и дегрануляцию провоспалительных цитокинов таких как интерлейкин 1 (IL-1), IL-6 и TNFα из фибробластов и макрофагов. Действие CCL4 осуществляется через рецепторы CCR5 и CCR1, представленные на вышеперечисленных клетках [9]. Интерлейкин-8 (IL-8, CXCL8) по своим функциональным характеристикам можно отнести как к про-, так и противовоспалительным циткинам [6]. Главными клетками-продуцентами этого хемокина являются моноциты, макрофаги и клетки эндотелия [11]. Основная роль IL-8 при воспалении заключается в рекрутинге нейтрофилов, при этом он также ответственен за хемотаксическую миграцию и активацию моноцитов, лимфоцитов, базофилов и эозинофилов в очаг воспаления. IL- 8, взаимодействуя со стволовыми/прогениторными клетками костного мозга, также обладает способностью мобилизовать и высвобождать кроветворные клетки в периферическое кровообращение [11]. Реализация эффектов IL-8 происходит через активацию на клетках-мишенях главным образом CXCR1, в меньшей степени через CXCR2. Важно отметить, что при связывании IL-8 с рецепторами происходит активация внутриклеточных каскадов, вызывающих не только хемотаксис, но и дегрануляцию клеток-мишеней. В соответствии с поставленной целью нами было изучено содержание химозинов RANTES, IL-8 и MIP-1β в лизатах тромбоцитов, выделенных из донорской крови в группах доноров, распределенных по полу, группам крови и резус принадлежности.

В таблице 1 представлены результаты по содержанию членов семейства хемокинов RANTES, MIP-1β и IL-8, в лизатах тромбоцитов. Можно отметить, что наиболее высокие концентрации цитокина MIP-1β отмечены у доноров с резус-отрицательной принадлежностью, у женщин с третьей и мужчин четвертой группы крови. Самые высокие значения содержания IL-8 в лизате тромбоцитов зарегистрированы также у мужчин и женщин с резус-отрицательной кровью четвертой группы. Лизат тромбоцитов волонтеров второй группы крови (мужчины резус-отрицательные, женщины резус-положительные) содержал наибольшее количество RANTES. Обнаружены достоверные различия между содержанием в тромболизате фактора MIP-1β у мужчин и женщин со второй A (II) и четвертой AB (IV) группами резус-отрицательной крови; между женщинами третьей B (III) группы крови с разным резус-фактором. Кроме того, статистически значимо различались значения хемокина RANTES/CCL5 в тромболизате крови в группах мужчин и женщин со второй A (II) (с R (+) и R (-)) и четвертой AB (IV) группами крови (с R (+)). Интересно, что у мужчин с первой 0 (I) и второй A (II) группами крови с отрицательным резус-фактором содержание хемокина RANTES/CCL5 в тромболизате крови значимо превышало аналогичные значения в таковом, полученном от резус-положительных мужчин. Связь между принадлежностью доноров к той или иной группе крови и содержанием указанных хемокинов пока не ясна, тем более что в целом уровень цитокинов даже в физиологических условиях имеет высокую лабильность. Возможно, в дальнейшем глубокий биоинформатический анализ позволит вскрыть пока не очевидную коммуникацию между этими показателями.

 

Таблица 1. Концентрации в лизате тромбоцитов (пг/мл) в зависимости от пола, группы крови, резус-фактора, Ме (Q0,25-Q0,75)

Table 1. Concentrations in platelet lysate (pg/mL) depending on gender, blood type, Rh factor, Ме (Q0.25-Q0.75)

MIP-1b

0 (I)

A (II)

B (III)

AB (IV)

Мужчины

Men

R (+)

138,83

(134,11-209,61)

163,1

(155,68-194,88)

168,675

(102,56-258,75)

250,515

(216,07-278,56)

R (-)

193,155

(157,30-278,56)

306,735

(247,55-329,31)

230,34

(194,8575-234,5400)

505,33

(341,98-610,03)

Женщины

Women

R (+)

148,295

(123,27-173,29)

192,245

(173,800-236,865)

178,6

(128,7600-219,8225)

191,78

(160,2600-215,6975)

R (-)

169,67

(148,04-204,59)

126,19*

(117,925-170,335)

301,935#

(181,95-401,56)

169,55*

(124,3500-228,9425)

IL-8

0 (I)

A (II)

B (III)

AB (IV)

Мужчины

Men

R (+)

231,53

(212,56-1290,67)

205,9

(162,0-388,8)

285,62

(98,02-655,72)

205,34

(111,16-754,46)

R (-)

156,13

(129,4-1291,2)

170,25

(114,84-1214,95)

263,59

(196,29-699,57)

415,61

(317,88-1458,25)

Женщины

Women

R (+)

202,78

(195,51-261,23)

386,89

(247,86-736,33)

197,73

(132,24-273,37)

63,42

(14,36-238,66)

R (-)

357,75

(157,72-686,26)

403,92

(351,3900-436,1175)

266,41

(80,52-2779,67)

389,9

(84,60-504,61)

RANTES/CCL5

0 (I)

A (II)

B (III)

AB (IV)

Мужчины

Men

R (+)

1648

(1279,88-2621,12)

2615,04

(2342,07-3067,30)

3509,32

(3155,97-3731,69)

2761,485

(2578,31-3004,51)

R (-)

3157,33#

(2474,93-4010,42)

4232,25#

(3475,37-5121,47)

3154,265

(2435,66-4042,72)

3199,05

(2728,88-3512,47)

Женщины

Women

R (+)

2538,27

(1378,28-2764,50)

4164,48*

(2785,18-5748,01)

3611,2

(3074,75-4132,56)

1830,45*

(1193,77-2450,31)

R (-)

1664,5

(1261,31-2387,54)

2374,5* #

(2295,24-2525,30)

3732,385

(3005,00-4416,50)

2322,53

(2182,78-2867,64)

Примечание. * – достоверные различия (p < 0,05) между мужчинами и женщинами в пределах одной группы крови и резус-фактора; # – достоверные различия (p < 0,05) в группах мужчин/женщин в пределах одной группы крови и разного резус-фактора.

Note. *, significant differences (p < 0.05) between men and women within the same blood group and Rh factor; #, significant differences (p < 0.05) in groups of men/women within the same blood group and different Rh factors.

 

Заключение

Лизат тромбоцитов представляет собой достаточно сложную композицию ростовых факторов, цитокинов, хемокинов. Содержание отдельных компонентов в получаемом продукте различна и, по-видимому, зависит не только от пола и группы крови, но и от других, пока не установленных индивидуальных особенностей. Однозначно, при выборе ростовой добавки, в первую очередь, необходимо ориентироваться на высокую концентрацию в ней ростовых факторов. Однако для отдельных культур клеток, таких как стромальные клетки или клетки происходящих из гемопоэтического ростка, присутствие хемокинов является необходимым условием для получения высококлеточных жизнеспособных культур. На наш взгляд, применение ростовых добавок, полученных из донорского материала, по сравнению с рекомбинантными факторами роста, более предпочтительно. Помимо ростовых факторов, они в большей степени соответствуют условиям in vivo, поскольку содержат весь спектр сбалансированных элементов, необходимых для роста клеток.

×

Об авторах

Валерия Владимировна Шуплецова

ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»

Автор, ответственный за переписку.
Email: vshupletsova@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-7243-9731

к.б.н., старший научный сотрудник Центра иммунологии и клеточных биотехнологий

Россия, 236022, г. Калининград, ул. Гайдара, 6, каб. 301

Ольга Борисовна Мелащенко

ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»

Email: OMelashchenko@kantiana.ru
ORCID iD: 0000-0002-0892-1168

научный сотрудник Центра иммунологии и клеточных биотехнологий

Россия, г. Калининград

Наталья Динисламовна Газатова

ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»

Email: n_gazatova@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-4646-3436

старший научный сотрудник, заведующая лабораторией экспериментальных исследований препаратов крови Центра иммунологии и клеточных биотехнологий

Россия, г. Калининград

Ольга Генадьевна Хазиахматова

ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»

Email: hazik36@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-5525-3529

к.б.н., старший научный сотрудник Центра иммунологии и клеточных биотехнологий

Россия, г. Калининград

Александра Сергеевна Минина

ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»

Email: minina.saschenka@yandex.ru
ORCID iD: 0009-0000-2222-2649

студент-исследователь Центра иммунологии и клеточных биотехнологий

Россия, г. Калининград

Анастасия Михайловна Коптева

ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»

Email: vohumanaah@gmail.com
ORCID iD: 0009-0002-4722-643X

студент-исследователь Центра иммунологии и клеточных биотехнологий

Россия, г. Калининград

Нина Августовна Кабанчук

ГБУЗ «Станция переливания крови Калининградской области»

Email: spk@infomed39.ru
ORCID iD: 0009-0004-9655-4223

и. о. главного врача

Россия, г. Калининград

Татьяна Николаевна Первенецкая

ГБУЗ «Станция переливания крови Калининградской области»

Email: pervenetskaia.tatiana@gmail.com
ORCID iD: 0009-0006-0073-5455

заведующая экспедицией с центром управления запасами компонентов донорской крови

Россия, г. Калининград

Андрей Геннадьевич Гончаров

ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»

Email: agoncharov59@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-6967-8838

к.м.н., старший научный сотрудник Центра иммунологии и клеточных биотехнологий

Россия, г. Калининград

Лариса Сергеевна Литвинова

ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»

Email: larisalitvinova@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-5231-6910

д.м.н., директор Центра иммунологии и клеточных биотехнологий

Россия, г. Калининград

Список литературы

  1. Халиулин А.В., Гусякова О.А., Козлов А.В., Габрильчак А.И. Процессы метаболизма и механизмы регуляции активности тромбоцитов (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика, 2019. Т. 64, № 3. С. 164-169. [Khaliulin A.V., Gusyakova O.A., Kozlov A.V., Gabrilchak A.I. Metabolic processes and mechanisms of regulation of platelet activity (literature review). Klinicheskaya laboratornaya diagnostika = Russian Clinical Laboratory Diagnostics, 2019, Vol. 64, no. 3, pp. 164-169. (In Russ.)]
  2. Burnouf T., Chou M.L., Lundy D.J., Chuang E.Y., Tseng C.L., Goubran H. Expanding applications of allogeneic platelets, platelet lysates, and platelet extracellular vesicles in cell therapy, regenerative medicine, and targeted drug delivery. J. Biomed. Sci., 2023, Vol. 30, no. 1, 79. doi: 10.1186/s12929-023-00972-w.
  3. Cognasse F., Duchez A.C., Audoux E., Ebermeyer T., Arthaud C.A., Prier A., Eyraud M.A., Mismetti P., Garraud O., Bertoletti L., Hamzeh-Cognasse H. Platelets as key factors in inflammation: focus on CD40L/CD40. Front. Immunol., 2022, Vol. 13, 825892. doi: 10.3389/fimmu.2022.825892.
  4. Cunin P., Nigrovic P.A. Megakaryocytes as immune cells. J. Leukoc. Biol., 2019, Vol. 105, no. 6, pp. 1111-1121.
  5. Golshan M., Dortaj H., Rajabi M., Omidi Z., Golshan M., Pourentezari M., Rajabi A. Animal origins free products in cell culture media: a new frontier. Cytotechnology, 2025, Vol. 77, no. 1, 12. doi: 10.1007/s10616-024-00666-7.
  6. Hou Y., Huttenlocher A. Advancing chemokine research: the molecular function of CXCL8. J. Clin. Invest., 2024, Vol. 134, no. 10, e180984. doi: 10.1172/JCI180984.
  7. Hughes C.E., Nibbs R.J.B. A guide to chemokines and their receptors. FEBS J., 2018, Vol. 285, no. 16, pp. 2944-2971.
  8. Köhler A., de Filippo K., Hasenberg M., van den Brandt C., Nye E., Hosking M.P., Lane T.E., Männ L., Ransohoff R.M., Hauser A.E., Winter O., Schraven B., Geiger H., Hogg N., Gunzer M. G-CSF-mediated thrombopoietin release triggers neutrophil motility and mobilization from bone marrow via induction of Cxcr2 ligands. Blood, 2011, Vol. 117, no. 16, pp. 4349-4357.
  9. Korbecki J., Grochans S., Gutowska I., Barczak K., Baranowska-Bosiacka I. CC Chemokines in a tumor: A review of pro-cancer and anti-cancer properties of receptors CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, and CCR10 Ligands. Int. J. Mol. Sci., 2020, Vol. 21. no. 20, 7619. doi: 10.3390/ijms21207619.
  10. Luo H., Li L., Han S., Liu T. The role of monocyte/macrophage chemokines in pathogenesis of osteoarthritis: A review. Int. J. Immunogenet., 2024 , Vol. 51, no. 3, pp. 130-142.
  11. Matsushima K., Yang D., Oppenheim J. J. Interleukin-8: An evolving chemokine. Cytokine, 2022, Vol. 153, 155828. doi: 10.1016/j.cyto.2022.155828.
  12. Maurer M., von Stebut E. Macrophage inflammatory protein-1. Int. J. Biochem. Cell Biol., 2004, Vol. 36, no. 10, pp. 1882-1886.
  13. Potts K.S., Farley A., Dawson C.A., Rimes J., Biben C., de Graaf C., Potts M.A., Stonehouse O.J., Carmagnac A., Gangatirkar P., Josefsson EC., Anttila C., Amann-Zalcenstein D., Naik S., Alexander W.S., Hilton D.J., Hawkins E.D., Taoudi S. Membrane budding is a major mechanism of in vivo platelet biogenesis. J. Exp. Med., 2020, Vol. 217, no. 9, e20191206. doi: 10.1084/jem.20191206.
  14. Price P.J. Best practices for media selection for mammalian cells. In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim., 2017, Vol. 53, no. 8, pp. 673-681.
  15. Singh A., Bisht P., Bhattacharya S., Guchhait P. Role of platelet cytokines in dengue virus infection. Front. Cell. Infect. Microbiol., 2020, Vol. 10, 561366. doi: 10.3389/fcimb.2020.561366.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Шуплецова В.В., Мелащенко О.Б., Газатова Н.Д., Хазиахматова О.Г., Минина А.С., Коптева А.М., Кабанчук Н.А., Первенецкая Т.Н., Гончаров А.Г., Литвинова Л.С., 2025

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № 77 - 11525 от 04.01.2002.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах