Экспериментальное перепрограммирование in vitro в модели вирусно-бактериальной коинфекции фенотипа субпопуляций CD64-CD32+CD16+CD11b+НГ, CD64+CD32+CD16+CD11b+НГ нейтрофильных гранулоцитов под влиянием аргинил-альфа-аспартиллизил-валил-тирозил-аргинина

Одной их ключевых причин негативного полимикробного синергизма при коинфекциях является нарушение функционирования нейтрофильных гранулоцитов (НГ). В этой связи актуальность приобретает разработка в системе in vitro экспериментальных моделей вирусно-бактериальных коинфекций, в которых возможно на молекулярном уровне выявить дефекты включения НГ в эффекторные процессы и оценить реорганизацию взаимосвязанных функционально-значимых рецепторов НГ под влиянием различных иммунотропных веществ. Понимание молекулярных механизмов работы той или иной молекулы, включая «молекулу» лекарственного препарата, обеспечивает безопасное его применение и делает его препаратом выбора. Функциональная активность НГ связана с поверхностными мембранными рецепторами CD64, CD32, CD16, CD11b, формирующими субпопуляции с различными фенотипами, активация которых приводит к сложным процессам элиминации патогена.
Цель исследования – в созданной in vitro экспериментальной модели вирусно-бактериальной коинфекции уточнить варианты трансформации фенотипа субпопуляций нейтрофильных гранулоцитов CD64^-CD32⁺CD16⁺CD11b⁺НГ, СD64⁺CD32⁺CD16⁺CD11b⁺НГ и оценить возможность перепрограммирования их фенотипа под влиянием гексапептида аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозиларгинина (ГП).
Проведено исследование 39 образцов периферической крови (ПК) условно здоровых взрослых добровольцев (7 женщин, 6 мужчин) в возрасте от 21 до 32 лет. Сформировано 3 группы: группа сравнения 1 (интактные НГ); группа сравнения 2 – модель вирусно-бактериальной инфекции; группа исследования – оценка влияния гексапептида аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинина (ГП). Для воспроизведения модели вирусно-бактериальной коинфекции образцы ПК инкубировали последовательно с ДцРНК (10-7М) в течение 60 мин, далее с fMLP (10^-7М) в течение 60 мин 37 °С. Для оценки влияния ГП образцы ПК после преинкубации с ДцРНК и fMLP инкубировали с ГП (10^-6 г/л) в течение 60 мин 37 °С. Проточной цитометрией (FC 500, Beckman Coulter, США) тестировалось количество НГ субпопуляций CD64^-CD32⁺CD16⁺CD11b⁺НГ, CD64⁺CD32⁺CD16⁺CD11b⁺НГ и плотность экспресcии рецепторов (MFI) с использованием МКАТ (Beckman Coulter International S.A., Франция).
Экспериментально выявлена трансформация фенотипа функционально значимых субпопуляций НГ CD64^-CD32⁺CD16⁺CD11b⁺НГ, СD64⁺CD32⁺CD16⁺CD11b⁺НГ в модели вирусно-бактериального процесса в виде усиления экспрессии всех изучаемых рецепторов. Получены неоднозначные результаты влияния ГП на трансформированный в системе in vitro в модели вирусно-бактериальной коинфекции фенотип субпопуляций CD64^-CD32⁺CD16⁺CD11b⁺НГ, СD64⁺CD32⁺CD16⁺CD11b⁺НГ, способствующие восстановлению адекватного ответа НГ.