Positive effects of recombinant interferon α2b on the phenotype of CD16+INFα/βR1-CD119+, CD16+INFα/βR1+CD119- neutrophil granulocyte subset in patients with post-COVID syndrome and herpesvirus infections

Cover Page


Cite item

Full Text

Abstract

Post-COVID syndrome (PCS) is a multisystem inflammatory condition with manifestations of chronic fatigue syndrome (CFS) and cognitive disorders (CD), along with reactivation of chronic herpesvirus infections (HVI). The PCS manifestations require studying the molecular mechanisms associated with the production of IFN and receptor functions of neutrophil granulocytes (NG), which is relevant and promotes the search for immunotherapeutic strategies in patients with PCS. Our objective was to study the in vitro effects of recombinant interferon α2b (recIFNα2b) on the phenotype of CD16+IFNα/βR1-CD119+, CD16+IFNα/ βR1+CD119+ subsets and functional activity of NG in patients with post-COVID syndrome and herpesvirus infections. Materials and methods: 45 patients (24-60 years old) with PCS and HVI (HSV 1, EBV, HHV6, CMV) comprised the study group 1 (SG1). A questionnaire was conducted to assess the severity of PCS symptoms using a point scale. We performed a study of the content and phenotype of NG subsets, i.e., the CD16+IFNα/βR1-CD119+, CD16+IFNα/βR1+CD119-, CD16+IFNα/βR1+CD119+ subpopulation, phagocytic and NADPH oxidase function of NG before and after in vitro incubation with recIFNα2b (50 IU/ µL, for 60 min, at 37 °C) in the study group 1a (SG1a). The comparison group (CG) of 30 volunteers examined during the pre-COVID period. Results: We revealed more pronounced clinical manifestations of CFS and CD in SG1 patients with mixed HVI, than in mono-HVI cases. Increased expression density of all receptors was registered on CD16+IFNα/βR1+CD119-NG and CD16+IFNα/βR1-CD119+ NG, thus suggesting the NG activation with initiation of cytotoxicity or NETosis, a decrease in phagocytic function and intensity of NADPH oxidase activity with depletion of NG reserve capacity in SG1. We have obtained some data on the positive effect of recIFNα2b in vitro (SG1a), e.g., decreased CD16 expression density and enhancement of IFNα/βR1 receptor expression in the CD16+IFNα/βR1+CD119- subset. In the CD16+IFNα/βR1-CD119+ subset, we have found persistence of increased MFI CD16 and MFI CD119 receptors, restoration of defective NG phagocytic function and reduced excessive activity of NADPH oxidases. Conclusion: The positive effects of the recIFNα2b influence on deficient function of NG in PCS patients suggest an oppoptunity of using immunotherapy with a recIFNα2b-based drug, combined with highly active antioxidants for treatment of various PCS manifestations including CFS, CD, HVI, thus, probably, ensuring adequate functioning of antiviral and regulatory mechanisms of the immune system.

Full Text

Введение

Постковидный синдром (ПКС) стал актуальной проблемой врачей различных специальностей вследствие широкой распространенности и разнообразия клинических проявлений.

ПКС клиническое состояние, с сохраняющимися симптомами, которые способны со временем меняться, исчезать, вновь возникать, и отражают дисфункцию многих систем и органов организма [5].

Выделяют несколько механизмов, оказывающих влияние на развитие ПКС: иммунная дисрегуляция, аутоиммунные процессы, синдром системного воспалительного ответа, повреждение сосудов микроциркуляторного русла, вегетативная, нервная, эндокринная и метаболическая дисфункции, прямое цитотоксическое действие вируса на клетки, и длительная вирусная персистенция [9]. Кроме этого, большинство пациентов с ПКС могут подвергаться повышенному риску коинфекций, вызванных вирусными, бактериальными, грибковыми или другими патогенами [10].

Основные клинические проявления ПКС включают множество состояний и симптомов, при этом процесс носит длительный, волнообразный, часто рецидивирующий характер, что существенно снижает физическую активность и качество жизни пациентов. Развитие синдрома хронической усталости (СХУ) и стойкое ощущение когнитивных расстройств (КР), являются наиболее частыми жалобами пациентов с ПКС и характеризуется астенией различной степени тяжести. Проявления СХУ характеризуются стойким ощущением усталости, снижением работоспособности и толерантности к физическим нагрузкам. КР проявляются снижением процессов запоминания, усвоением новой информации, отмечаются трудности с концентрацией внимания, снижение умственной работоспособности, забывчивость, ощущение «тумана в голове», мигрирующие боли в суставах и мышцах [1]. Эти перечисленные осложнения встречаются у 30-50% реконвалесцентов, чаще у женщин, чем у мужчин, а их выраженность и стойкость более высока у больных с полиорганными и коморбидными формами патологии, находившихся на лечении в палатах интенсивной терапии и реанимационных отделениях [13].

Многочисленные исследования, связанные с индуцированной SARS-CoV-2 реактивацией герпесвирусных инфекций (ГВИ) показали, что острое течение COVID-19 сопровождается дефицитом выработки IFN, при этом происходит активация персистирующих ГВИ – вируса Эпштейна–Барр (ВЭБ), цитомегаловируса (ЦМВ), вируса герпеса человека 6-го типа (ВГЧ6) [12]. В первом систематическом обзоре с метаанализом 85 исследований из 18 стран мира приведены обобщенные результаты об активации ГВИ у пациентов с острой и перенесенной инфекцией COVID-19 [6]. Показано, что пациенты с ПКС имели реактивацию вируса Эпштейна–Барр (ВЭБ) – 42,6%, вируса герпеса человека 6-го типа (ВГЧ6) у 25% и ВЭБ/ВГЧ6 у 32,4% [7, 14].

Нарушения в работе иммунной системы (ИС) в противовирусной защите при ПКС могут сопровождаться истощением и функциональной неполноценностью клеток врожденного и адаптивного иммунитета с последующим прогрессированием нарушений молекулярных механизмов, связанных с продукцией интерферона (IFN) возникших при остром COVID-19 [5]. В частности, было показано, что при COVID-19 наблюдается блокада продукции IFNα и IFNγ, повышение уровней цитокинов ассоциированных с активацией НГ, изменение содержания и фенотипа субпопуляций НГ, изменение их функций [2]. Также продемонстрированы эффекты позитивного влияния рекомбинантного IFNα2b (рекIFNα2b) in vitro на количественные и фенотипические характеристики субпопуляций НГ [3]. Кроме того установлены различные дисрегуляторные нарушения в системе противовирусной иммунной защиты и системе IFN у пациентов с атипичными хроническими активными ГВИ, которые формируют состояние иммунокомпрометированности у пациентов с ПКС, имеют как локальные, так и системные проявления и является одним из основных признаков постковидного периода [4].

НГ являясь эффекторными и регуляторными клетками ИС экспрессируют поверхностные мембранные рецепторы к IFNα и IFNγ, формируя субпопуляции с определенным фенотипом. Связываясь с этими рецепторами, IFNα и IFNγ способны проявлять свои регуляторные действия и модулировать функциональную активность НГ [11]. Таким образом, изучение молекулярных механизмов нарушений не только в остром периоде COVID-19, но и в постковидном периоде, особенно у пациентов с проявлениями ПКС, связанных с продукцией IFN, рецепторной функцией НГ – IFNα/βR, CD119 (IFNγ) на мембране НГ периферической крови (ПК), является актуальным и представляет несомненный интерес, что может помочь в поиске терапевтических стратегий, с целью восстановления и усиления врожденного иммунного ответа против перенесенного SARS-CoV-2.

Цель – изучить эффекты влияния рекомбинантного IFNα2b in vitro на фенотип субпопуляций CD16+IFNα/βR1-CD119+, CD16+IFNα/βR1+CD119- и функциональную активность НГ у пациентов с постковидным синдромом и герпесвирусными инфекциями

Материалы и методы

Проведено исследование 45 пациентов (24 женщины, 21 мужчина), 24-60 лет, находившихся на диспансерном наблюдении с различными симптомами и проявлениями ПКС спустя 12 и более недель после перенесенной инфекции SARS-CoV-2, группа исследования 1 (ГИ1).

Пациенты прошли анкетирование по разработанной нами ранее шкале для оценки тяжести симптомов ПКС в баллах от 0 до 5 [4].

Кроме традиционных методов, включавших сбор анамнеза, методы физикального обследования, общий и биохимический анализы крови, использовали метод ПЦР в реальном времени для детекции ГВИ (ВПГ1, ВЭБ, ВГЧ6, ЦМВ) в соскобе с миндалин и задней стенки глотки, что имело значение для выявления реактивации хронических ГВИ.

Проведено исследование содержания НГ субпопуляций CD16+IFNα/βR1-CD119+, CD16+IFNα/βR1+CD119-, CD16+IFNα/βR1+CD119+, и их фенотипа по плотности экспрессии мембранных рецепторов – MFI (FC 500, Beckman Coulter, США), конъюгаты МКАТ: IFNαβR1- FITC, CD119-PE, CD16-ECD (Beckman Coulter International S.A., Франция), до инкубации (ГИ1) и после инкубации с рекIFNα2b (50 МЕ/мкл) в течение 60 мин при температуре 37 °С in vitro – группа исследования 1а (ГИ1а).

В ГИ1 и ГИ1а оценивали фагоцитарную функцию НГ: по доли активно-фагоцитирующих НГ (%ФАН); объему захваченного бактериального материала (S. aureus, штамм 209) по показателям: фагоцитарное число (ФЧ), фагоцитарный индекс (ФИ) и завершения фагоцитарного акта по проценту переваривания (%П), индексу переваривания (ИП). Параллельно производился подсчет на 100 НГ доли клеток в апоптозе и клеток образующих нейтрофильные экстрацеллюлярные сети (NET). Активность NADРН-оксидазы НГ определяли в NBT-спонтанном тесте (NBTсп.) и в NBT-стимулированном in vitro S. aureus тесте (NBTст.) по показателям: средний цитохимический индекс (СЦИсп, СЦИст), процент формазан-позитивных клеток (%ФПКсп, %ФПКст) и коэффициент мобилизации (КМ) – %ФПКcт/%ФПКсп. Группа сравнения (ГС) сформирована из 30 добровольцев сопоставимых по полу и возрасту, обследованных в доковидный период.

Исследование проведено согласно требованиям Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации 2013 г. У всех пациентов было получено письменное информированное согласие на участие в исследовании и на обработку персональных данных.

Для статистической обработки полученных данных использованы компьютерные программы Microsoft Excel. Результаты представляли в виде медианы (Ме) и верхнего и нижнего квартилей (Q0,25-Q0,75), применяли критерии Манна–Уитни и Вилкоксона. Достоверность различия определяли при p < 0,05.

Результаты и обсуждение

В ходе анкетирования у 100% исследуемых пациентов ГИ1 с ПКС установлены клинические проявления СХУ и КР различной степени выраженности. Согласно разработанной нами 5-балльной шкале (0 баллов – отсутствие симптомов; 1 балл – минимальные симптомы; 2 балла – средняя выраженность симптомов; 3 балла – тяжелая степень; 4 балла – очень тяжелая степень; 5 баллов – крайне тяжелая степень), общее количество баллов в ГИ1 составило – 17,0 (15,25-19,75), что в 17 раз больше чем в ГС-1,0 балл (0,5-2,0) (р < 0,05) (табл. 1).

 

ТАБЛИЦА 1. ВЫРАЖЕННОСТЬ КЛИНИЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ ПОСТКОВИДНОГО СИНДРОМА У ПАЦИЕНТОВ, ПЕРЕНЕСШИХ COVID-19 (В БАЛЛАХ), Me (Q0,25-Q0,75)

TABLE 1. SEVERITY OF CLINICAL MANIFESTATIONS OF POST-COVID SYNDROME IN PATIENTS WHO UNDERWENT COVID-19 (IN POINTS), Me (Q0.25-Q0.75)

Симптомы

Symptoms

Группа сравнения

(ГС)

Comparison group

n = 30

Пост-COVID-19

(ГИ1)

Post-COVID-19

Study group 1

n = 45

Синдром хронической усталости, непереносимость физической нагрузки, снижение работоспособности, повышенная утомляемость

Chronic fatigue syndrome, exercise intolerance, decreased performance, increased fatigue

0,5 (0,1-1,0)

3,0 (2,0-3,0)*

Снижение процессов запоминания, трудности с концентрацией внимания, ощущение тумана в голове

Reduced memorization processes, difficulty concentrating, “brain fog”

0,0 (0,0-0,0)

3,0 (2,0-3,0)*

Головная боль, головокружение, мигрень

Headache, dizziness, migraine

0,5 (0,1-1,0)

2,0 (2,0-3,0)*

Артралгии, миалгии

Arthralgia, myalgia

0,0 (0,0-0,0)

2,0 (1,0-3,0)*

Панические атаки, расстройства настроения, эмоциональная лабильность, психогенная депрессия

Panic attacks, mood disorders, emotional lability, psychogenic depression

0,0 (0,0-0,0)

2,0 (2,0-2,0)*

Нарушения засыпания и сна

Falling asleep and sleep disorders

0,0 (0,0-0,0)

2,0 (2,0-2,0)*

Повышенная потливость, субфебрилитет

Excessive sweating, subfebrility

0,0 (0,0-0,0)

1,0 (1,0-2,0)*

Кашель и одышка

Cough and shortness of breath

0,0 (0,0-0,0)

1,0 (0,0-1,0)

Клинические проявления герпесвирусных инфекций

Clinical manifestations of herpesvirus infections

0,0 (0,0-0,0)

1,0 (0,0-2,0)*

Общее количество баллов

Total number of points

1,0 (0,5-2, 0)

17,0 (15,25-19,75)*

Примечание. * – значимость отличий от показателей группы сравнения; р < 0,05.

Note. *, the significance of differences from the indicators of the comparison group; p < 0.05.

 

Наиболее беспокоящими жалобами пациентов ГИ1 являлись: снижение работоспособности, повышенная утомляемость, снижение толерантности к физическим нагрузкам, стойкое ощущение хронической усталости. Также все пациенты предъявляли жалобы разной степени выраженности на нарушение когнитивных функций в виде снижения процессов запоминания, трудности с концентрацией внимания, ощущение «тумана в голове», артралгии, миалгии. Клинические признаки ГВИ у пациентов ГИ1 были выявлены с их последующей детекцией. Согласно полученным данным, выявлено, что в ГИ1 частота встречаемости моно и микст-ГВИ была следующей: у 57,8% пациентов отмечались клинические проявления ВПГ1-инфекции, орофациальной локализации; из них у 37,2% детектировалась моно-ГВИ-ВПГ1-инфекция; у 62,8% детектировалась микст-ГВИ: ВПГ1-инфекция и ВЭБ-инфекция (36,8%); ВПГ1-инфекция и ВЧГ6-инфекция (21%); ВПГ1-инфекция, ВЭБ-инфекция и ВЧГ6-инфекция (5%). Стоит отметить, что наиболее выраженные клинические проявления ПКС в ГИ1 с лидирующими симптомами СХУ и КР отмечались среди пациентов, страдающих микст-ГВИ, а выраженность симптомов составляла 19 (17-21) баллов, тогда как при моно-ГВИ – 15 (14-16) баллов.

При исследовании НГ ПК ГС выявлены 3 субпопуляции НГ: CD16+IFNα/βR1-CD119+, CD16+IFNα/βR1+CD119-, CD16+IFNα/βR1+CD119+. Доля субпопуляции НГ CD16+IFNα/βR1-CD119+ составляют 93,7 (89,8-96,5) % с плотностью экспрессии по MFI CD16 – 39,8 (20,4-51,3) и CD119+(IFNγ) – 2,8 (2,5-3,1). Субпопуляция CD16+IFNα/βR1+CD119-, не экспрессирующая рецептор к IFNγ, была представлена 1,4 (0,5-2,4) % НГ с плотностью экспрессии по MFI IFNα/ βR1 – 3,4 (2,6-4,1) и MFI CD16 – 39,9 (22,9-54,5). Также определялась малочисленная субпопуляция одновременно экспрессирующая IFNα/β и IFNγ рецепторы НГ CD16+IFNα/ βR1+CD119+ составляющая 0,9 (0,4-1,8) % НГ, но при этом имеющая более высокие значения плотности экспрессии IFNα/βR1(p > 0,05) и CD119 молекул (p > 0,05).

Отличительной особенностью ГИ1 явилось отсутствие в 93% случаев (42 пациента) субпопуляции CD16+IFNα/βR1+CD119+, при этом только у 3 пациентов – в 7% случаев, с микст-ГВИ (ВПГ1-инфекция, ВЭБ-инфекция и ВЧГ6-инфекция) регистрировались 0,3 (0,3-0,7) % НГ субпопуляции CD16+IFNα/βR1+CD119+ с повышенными в 1,8 раза MFI IFNα/βR1-10,3 (9,82-10,5), в 6 раз CD119 – 18,4 (10,4-34,8) и в 1,4 раза CD16- 54,7 (38,4-91,8) по отношению к значениям ГС (p1-3 < 0,05). Содержание НГ субпопуляции CD16+IFNα/βR1-CD119+НГ в ГИ1 не отличалось от ГС (p > 0,05), но при этом отмечалось увеличение плотности экспрессии рецепторов по MFI в 2,6 раза CD16 (p < 0,05) и в 1,9 раза CD119 (p < 0,05). Также наблюдалась тенденция к снижению в 2,8 раза содержания субпопуляции CD16+IFNα/βR1+CD119-НГ (p > 0,05). Для этой субпопуляции были характерны повышенные уровни экспрессии в 4,5 раза рецептора IFNα/ βR1 (p < 0,05) и в 1,7 раза CD16 (p < 0,05) по отношению к показателям ГС (табл. 2).

 

ТАБЛИЦА 2. ЭФФЕКТЫ ВЛИЯНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО IFNα2b НА ФЕНОТИП СУБПОПУЛЯЦИЙ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ РЕЦЕПТОРЫ К IFN I И II ТИПОВ И АКТИВАЦИОННЫЙ МАРКЕРНЫЙ РЕЦЕПТОР CD16, У ПАЦИЕНТОВ С ПОСТКОВИДНЫМ СИНДРОМОМ, Me (Q0,25-Q0,75)

TABLE 2. EFFECTS OF RECOMBINANT IFNα2b ON THE PHENOTYPE OF NEUTROPHIL GRANULOCYTE SUBPOPULATIONS EXPRESSING TYPE I AND II IFN RECEPTORS AND CD16 ACTIVATION MARKER RECEPTOR IN PATIENTS WITH POST-COVID SYNDROME, Me (Q0.25-Q0.75)

Показатели

Parameters

Группа сравнения

(ГС)

Comparison group

n = 30

Пост-COVID-19 до инкубации (ГИ1)

Post-COVID-19

Study group 1

n = 45

Пост-COVID-19 после инкубации + рекIFNα2b

(ГИ1а)

Post-COVID-19

+ recombinant IFNα2b

Study group 1a

n = 45

CD16+IFNα/βR1-CD119+НГ

CD16+IFNα/βR1-CD119+NG

НГ, %

NG, %

93,7

(89,8-96,5)

94,4

(92,6-96,1)

94,0

(92,4-95,0)

MFI CD16

39,8

(20,4-51,3)

103,5*

(83,9-121,0)

110,0*

(95,7-127,0)

MFI CD119

2,8

(2,5-3,1)

5,7*

(5,4-6,8)*

5,0*

(3,7-6,3)

CD16+IFNα/βR1+CD119-НГ

CD16+IFNα/βR1+CD119-NG

НГ, %

NG, %

1,4

(0,5-2,4)

0,5

(0,4-2,0)

1,6

(0,5-1,9)

MFI CD16

39,9

(22,9-54,5)

67,7*

(58,5-100,3)*

50,0

(40,1-62,3)

MFI IFNα/β

3,4

(2,6-4,1)

15,3*

(6,8-22,2)*

19,2*

(13,9-26,1)

CD16+IFNα/βR1+CD119+НГ

CD16+IFNα/βR1+CD119+NG

НГ, %

NG, %

0,9

(0,4-1,8)

0

0

MFI CD16

39,1

(26,6-50,3)

0

0

MFI IFNα/β

5,7

(4,6-6,5)

0

0

MFI CD119

3,2

(2,9-5,8)

0

0

Примечание. * – значимость отличий от показателей группы сравнения; р < 0,05.

Note. *, the significance of differences from the indicators of the comparison group; p < 0.05.

 

Инкубация НГ-пациентов с ПКС (ГИ1а) с рекIFNα2b in vitro не влияла на количество НГ субпопуляций CD16+IFNα/βR1-CD119+ и CD16+IFNα/βR1-CD119+ как по сравнению с показателями ГС (p1, 2 > 0,05), так и по отношению к значениям до инкубации ГИ (p1, 2 > 0,05). В то же время на НГ субпопуляции CD16+IFNα/βR1-CD119+ наблюдались незначительные тенденции увеличения плотности экспрессии по MFI СD16 до 110,0 (95,7-127,0) против 103,5 (83,9-121,0) в ГИ1 (p > 0,05) и снижения плотности экспрессии по MFI СD119 до 5,0 (3,7-6,3) против 5,7 (5,4-6,8) в ГИ1 (p > 0,05). При этом регистрируемые показатели MFI СD16 и MFI СD119 оставались повышенными по отношению к уровню экспрессии молекул на НГ данной субпопуляции в ГС (p1, 2 < 0,05) (табл. 1).

Эффекты влияния рекIFNα2b на фенотип субпопуляций CD16+IFNα/βR1+CD119-НГ заключались в снижении в 1,4 раза MFI CD16 по отношению к показателям ГИ1 (p < 0,05) до уровня, определяемого в ГС (p > 0,05), при этом плотность экспрессии IFNα/βR1 увеличилась в 1,3 раза от значений, регистрируемых в ГИ1 пациентов с ПКС, оставаясь в 5,6 раза выше значений в ГС (р > 0,05) (табл. 2).

Анализ функционального потенциала НГ при ПКС выявил значительное снижение в 1,3 раза доли активно фагоцитирующих НГ (%ФАН) (p < 0,05), %П в 1,4 раза и 2,9 раза ИП (р1, 2 < 0,05) по отношению к показателям ГС, на фоне увеличения содержания НГ образующих NETs и клеток в апоптозе. При этом в этой группе пациентов отмечалось: в спонтанном NBT-тесте напряженность NADPH-оксидаз по показателям СЦИсп – 0,46 (0,41-0,49) и %ФПКсп – 8,0 (6,8-9,0) % по отношению к ГС (р1, 2 < 0,05). В стимулированном NBT-тесте при дополнительной нагрузке S. aureus повышение показателей СЦИст – 0,36 (0,33-0,39) и %ФПК 6,0 (5,8-7,0), что демонстрирует истощение оксидазного микробицидного потенциала, КМ-0,86 (0,75-1,26) (р1, 2 < 0,05) (табл. 3).

 

ТАБЛИЦА 3. ЭФФЕКТЫ ВЛИЯНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО IFNα2b НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ ПАЦИЕНТОВ С ПОСТКОВИДНЫМ СИНДРОМОМ В СИСТЕМЕ IN VITRO, Me (Q0,25-Q0,75)

TABLE 3. EFFECTS OF RECOMBINANT IFNα2b ON THE FUNCTIONAL ACTIVITY OF NEUTROPHIL GRANULOCYTES OF PATIENTS WITH POST-COVID SYNDROME IN THE IN VITRO SYSTEM, Me (Q0.25-Q0.75)

Показатели

Parameters

Группа сравнения

(ГС)

Comparison group

n = 30

Пост-COVID-19 до инкубации (ГИ1)

Post-COVID-19

Study group 1

n = 45

Пост-COVID-19 после инкубации + рекIFNα2b

(ГИ1а)

Post-COVID-19

+ recombinant IFNα2b

Study group 1a

n = 45

%ФАН

%PhAN

65,8 (60,9-79,6)

49,0 (48,0-52,0)*

62,0 (57,5-67,0)^

ФЧ

PhN

3,4 (2,1-4,2)

3,30 (3,1-3,4)

2,5 (2,3-2,6)^

ФИ

PhI

1,8 (1,6-2,0)

1,6 (1,5-1,8)

1,63 (1,56-1,70)

%П

%D

58,9 (51,3-78,3)

40,9 (40,5-41,7)*

47,2 (42,9-51,5)^

ИП

ID

1,90 (1,10-2,40)

0,65 (0,61-0,72)*

1,0 (0,74-1,50)^

СЦИ сп.

MCIsp

0,09 (0,06-0,10)

0,46 (0,41-0,49)

0,2 (0,18-0,21)^

СЦИ ст.

MCPst

0,20 (0,08-0,30)

0,36 (0,33-0,39)

0,34 (0,32-0,37)

%ФПК сп.

%FPCsp

2,4 (2,3-3,5)

8,0 (6,8-9,0)*

6,0 (6,0-6,5)*

%ФПК ст

%FPCst

5,5 (2,8-6,3)

6,0 (5,8-7,0)

8,0 (8,0-9,0)* ^

КМ

MC

1,8 (1,60-2,20)

0,86 (0,75-1,26)*

1,78 (1,58-1,92)^

NET

1,0 (0,0-1,0)

2,0 (1,75-2,50)*

1,0 (1,0-2,0)

Клетки в апоптозе

Cells in apoptosis

1,0 (0,0-1,0)

2,0 (1,0-3,0)

2,0 (1,0-2,0)

Примечание. * – значимость отличий от показателей группы сравнения; р < 0,05. ^ – значимость отличий показателей ГИ1 до инкубации и ГИ1а после инкубации с рекIFNα2b; p < 0,05.

Note. *, the significance of differences from the indicators of the comparison group; p < 0.05. ^, the significance of the differences in the indicators of Group 1 before incubation and Group 1a after incubation with recIFNα2b; р < 0.05.

 

После инкубации НГ пациентов с ПКС в системе in vitro с рекIFNα2b отмечалось увеличение доли ФАН (p < 0,05) и восстановление процессов киллинга и переваривания (%П, ИП) до уровня показателей ГС (р1, 2 > 0,05), снижение спонтанной и усиление стимулированной активности NADPH-оксидаз, как по показателям %ФПК, так и по СЦИ с сохранением резервного микробицидного потенциала, КМ – 1,78 (1,58-1,92). РекIFNα2b в системе in vitro не влиял на процессы образования NETs и апоптоз (табл. 3).

Таким образом, у пациентов с ПКС на фоне моно- и микст-ГВИ выявлена трансформация фенотипа субпопуляций НГ CD16+IFNα/ βR1+CD119-НГ и CD16+IFNα/βR1-CD119+НГ, несущих рецепторы к IFNα и IFNγ и активационный рецептор CD16, отвечающий, за цитотоксичность НГ по отношению к инфицированным вирусами клеткам. Выявлено значимое повышение плотности экспрессии всех изучаемых рецепторов свидетельствующее об активации НГ с предположительной инициацией антителозависимой клеточной цитотоксической реакции или NETosis. При этом установлено снижение функциональной активности НГ проявляющееся в снижении процессов захвата и переваривания бактериальных антигенов и напряженности NADPH-оксидазной активности с истощением резервных возможностей НГ. Ранее нами были получены данные об аналогичных вариантах трансформации фенотипа субпопуляций НГ CD16+IFNα/βR1-CD119+, CD16+IFNα/βR1+CD119-, CD16+IFNα/ βR1+CD119+ на фоне неадекватно низкого уровня IFN I и II типов у пациентов в острый период COVID-19 [3].

Учитывая, что IFN I и II типов усиливают NETosis [11], возможно предположить, что значительное повышение экспрессии рецепторов, отмечаемое в ГИ1, может усугубить нейтрофильную инфильтрацию и нетоз, а также связанные с этими процессами проявления ПКС, показано, что рекIFNα2b в системе in vitro не влиял на процессы образования NETs и апоптоз.

Получены позитивные эффекты влияния рекIFNα2b in vitro на фенотип субпопуляций и функции НГ. РекIFNα2b in vitro не влиял на количество и соотношение 2 субпопуляций CD16+IFNα/βR1-CD119+, CD16+IFNα/βR1+CD119+.. При этом на НГ субпопуляции CD16+IFNα/βR1-CD119+ сохранялись повышенные показатели MFI СD16 и MFI СD119 по отношению к уровню в ГС; на НГ субпопуляции CD16+IFNα/βR1+CD119- отмечено снижение MFI CD16 до уровня ГС, и усилении экспрессии IFNα/βR1 по сравнению с показателями пациентов с ПКС и ГС. Такая модуляция фенотипа возможно необходима для восприятия цитокиновых сигналов и осуществления адекватного противовирусного ответа на ГВИ. На фоне воздействия in vitro с рекIFNα2b отмечалось: увеличение доли ФАН и восстановление процессов киллинга и переваривания (%П, ИП) до уровня показателей ГС, снижение спонтанной и усиление стимулированной активности NADPH-оксидаз, как по показателям %ФПК, так и по СЦИ с сохранением резервного микробицидного потенциала.

Заключение

Анализ полученных результатов позволяет предположить, что у пациентов с ПКС сохраняется дефицит IFN, что способствует активации ГВИ. Полученные в настоящем исследовании позитивные эффекты влияния рекIFNα2b в системе in vitro на дефектно функционирующие НГ в виде изменения фенотипа субпопуляций НГ: CD16+IFNα/βR1-CD119+, CD16+IFNα/ βR1+CD119-, восстановления баланса восприятия IFN, восстановления эффекторных функций НГ с уменьшением их агрессивного действия, спровоцированного перенесенным COVID-19 и реактивацией ГВИ, у пациентов с ПКС, дополняют известные сведения об иммунопатогенезе ПКС и молекулярные механизмы позитивного влияния интерферонотерапии, и обосновывают целесообразность использования лекарственного препарата на основе рекIFNα2b в комбинации с высокоактивными антиоксидантами у пациентов с проявлениями ПКС и ГВИ [4].

×

About the authors

M. G. Atazhakhova

Kuban State Medical University

Email: doctor_atazhachova@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-5516-4964
SPIN-code: 3990-5118

Postgraduate Student, Department of Clinical Immunology, Allergology and Laboratory Diagnostics, Kuban State Medical University

Russian Federation, Krasnodar

Irina V. Nesterova

Kuban State Medical University; P. Lumumba Peoples’ Friendship University

Author for correspondence.
Email: inesterova1@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-5339-4504
SPIN-code: 4714-2488
Scopus Author ID: 56553330300
ResearcherId: A-8785-2016

PhD, MD (Medicine), Professor, Chief Research Associate, Department of Clinical and Experimental Immunology and Molecular Biology, Central Scientific Research Laboratory, Kuban State Medical University; Professor, Department of Clinical Immunology, Allergology and Adaptology, Medical Institute, P. Lumumba Peoples’ Friendship University

Russian Federation, Krasnodar; Moscow

G. A. Chudilova

Kuban State Medical University

Email: chudilova2015@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-8005-9325
SPIN-code: 2092-6412
Scopus Author ID: 6507554434
ResearcherId: AAB-2922-2020

PhD, MD (Biology), Associate Professor, Head of the Department of Clinical and Experimental Immunology and Molecular Biology of the Central Research Laboratory, Professor of the Department of Clinical Immunology, Allergology and Laboratory Diagnostics, Kuban State Medical University

Russian Federation, Krasnodar

V. A. Matushkina

Kuban State Medical University

Email: Im.mva@yandex.ru

Assistant Professor, Department of Infectious Diseases and Epidemiology, Kuban State Medical University

Russian Federation, Krasnodar

S. V. Kovaleva

Kuban State Medical University

Email: 3483335@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9604-5806
SPIN-code: 8289-5342
Scopus Author ID: 55535685400
ResearcherId: AAB-3408-2020

PhD, MD (Medicine), Associate Professor, Department of Clinical Immunology, Allergology and Laboratory Diagnostics, Kuban State Medical University

Russian Federation, Krasnodar

V. N. Chapurina

Kuban State Medical University

Email: pavlenkoevi2016@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-1912-2038
SPIN-code: 4499-9021
Scopus Author ID: 57222552947

Assistant Professor, Department of Clinical Immunology, Allergology and Laboratory Diagnostics, Kuban State Medical University

Russian Federation, Krasnodar

References

  1. Ковальчук В.В., Дроздова М.С., Чепель Ю.А., Нестерин К.В. Постковидный синдром. Мифы и реалии // Эффективная фармакотерапия, 2022. T. 18, № 23. C. 20-26. [Kovalchuk V.V., Drozdova M.S., Chepel Yu.A., Nesterin K.V. Postcovid syndrome. Myths and realities. Effektivnaya farmakoterapiya = Effective Pharmacotherapy, 2022, Vol. 18, no. 23, pp. 20-26. (In Russ.)]
  2. Нестерова И.В., Городин В.Н., Матушкина В.А., Чудилова Г.А., Чапурина В.Н., Халтурина Е.О., Тетерин Ю.В., Ломтатидзе Л.В., Пирогова А.И. Неоднозначная роль нейтрофильных гранулоцитов в иммунопатогенезе COVID-19: взаимосвязь с дисбалансом провоспалительных нейтрофил-ассоциированных цитокинов и дефицитом интерферона- // Инфекционные болезни, 2022. Т. 20, № 4. С. 12-24. [Nesterova I.V., Gorodin V.N., Matushkina V.A., Chudilova G.A., Chapurina V.N., Khalturina E.O., Teterin Yu.V., Lomtatidze L.V., Pirogova A.I. The ambiguous role of neutrophil granulocytes in the immunopathogenesis of COVID-19: the relationship with the imbalance of pro-inflammatory neutrophil-associated cytokines and interferon- deficiency. Infektsionnye bolezni = Infectious Diseases, 2022, Vol. 20, no. 4, pp. 12-24. (In Russ.)]
  3. Нестерова И.В., Городин В.Н., Чудилова Г.А., Чапурина В.Н., Матушкина В.А., Габдрахманова Р.Ю., Ломтатидзе Л.В., Ковалева С.В., Малиновская В.В., Семененко Т.А. Эффекты влияния рекомбинантного интерферона -2b на фенотип субпопуляций нейтрофильных гранулоцитов пациентов с COVID-19 // Инфекционные болезни, 2022. T. 20, № 1. C. 43-51. [Nesterova I.V., Gorodin V.N., Chudilova G.A., Chapurina V.N., Matushkina V.A., Gabdrakhmanova R.Yu., Lomtatidze L.V., Kovaleva S.V., Malinovskaya V.V., Semenenko T.A. Effects of recombinant interferon -2b on the phenotype of neutrophil granulocyte subpopulations of patients with COVID-19. Infektsionnye bolezni = Infectious Diseases, 2022, Vol. 20, no. 1, pp. 43-51. (In Russ.)]
  4. Нестерова И.В., Халтурина Е.О., Малиновская В.В. Клинико-иммунологическая эффективность интеграционной программы реабилитации иммунной системы у пациентов с атипичной хронической активной герпесвирусной коинфекцией до и во время COVID-19, а также в постковидном периоде // Эффективная фармакотерапия, 2022. Т. 18, № 37. С. 30-41. [Nesterova I.V., Khalturina E.O., Malinovskaya V.V. Clinical and immunological effectiveness of the integration program for the rehabilitation of the immune system in patients with atypical chronic active herpesvirus coinfection before and during COVID-19, as well as in the postcovid period. Effektivnaya farmakoterapiya = Effective Pharmacotherapy, 2022, Vol. 18, no. 37, pp. 30-41. (In Russ.)]
  5. Хасанова Д.Р., Житкова Ю.В., Васкаева Г.Р. Постковидный синдром: обзор знаний о патогенезе, нейропсихиатрических проявлениях и перспективах лечения // Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика, 2021. T. 13, № 3. C. 93-98. [Khasanova D.R., Zhitkova Yu.In, Maskaeva G.R. Postcovid syndrome: a review of knowledge about pathogenesis, neuropsychiatric manifestations and treatment prospects. Nevrologiya, neyropsikhiatriya, psikhosomatika = Neurology, Neuropsychiatry, Psychosomatics, 2021, Vol. 13, no. 3, pp. 93-98. (In Russ.)]
  6. Banko A., Miljanovic D., Cirkovic A. Systematic review with meta-analysis of active herpesvirus infections in patients with COVID-19: Old players on the new field. Int. J. Infect. Dis., 2023, Vol. 130, pp. 108-125.
  7. Chen J., Song J., Dai L., Post S.R., Qin Z. SARS-CoV-2 infection and lytic reactivation of herpesviruses: a potential threat in the postpandemic era? J. Med. Virol., 2022, Vol. 94, pp. 5103-5111.
  8. Chua R.L., Lukassen S., Trump S., Hennig B.P., Wendisch D., Pott F., Debnath O., Thürmann L., Kurth F., Völke M. T., Kazmierski J., Timmermann B., Twardziok S., Schneider S., Machleidt F., Müller-Redetzky H., Maier M., Krannich A., Schmidt S., Balzer F., Liebig J. , Loske J. , Suttorp N., Eils J., Ishaque N., Liebert U. G., von Kalle C., Hocke A., Witzenrath M., Goffinet C., Drosten C., Laudi S., Lehmann I., Conrad C. , Sander L.-E., Eils R. COVID-19 severity correlates with airway epithelium-immune cell interactions identified by single-cell analysis. Nat. Biotechnol., 2020, Vol. 38, pp. 970-979.
  9. Inoue S., Hatakeyama J., Kondo Y., Hifumi T., Sakuramoto H., Kawasaki T., Taito S., Nakamura K., Unoki T., Kawai Y., Kenmotsu Y., Saito M., Yamakawa K., Nishida O. Post-intensive care syndrome: its pathophysiology, prevention, and future directions. Acute Med. Surg., 2019, Vol. 6, no. 3, pp. 233-246.
  10. Lescure F.X., Bouadma L., Nguyen D., Parisey M., Wicky P.H., Behillil S., Gaymard A., Bouscambert-Duchamp M., Donati F., Le H.Q., Enouf V., Houhou-F.N., Valette M., Mailles A., Lucet J.-C., Mentre F., Duval X., Descamps D., Malvy D., Timsit J.-F., Lina B., van-der-Werf S., Yazdanpanah Y. Clinical and virological data of the first cases of COVID-19 in Europe: A case series. Lancet Infect. Dis., 2020, Vol. 20, no. 6, pp. 697-706.
  11. Reusch N., de Domenico E., Bonaguro L., Schulte-Schrepping J., Baßler K., Schultze J.L., Aschenbrenner A.C. Neutrophils in COVID-19. Front. Immunol., 2021, Vol. 12, 652470. doi: 10.3389/fimmu.2021.652470.
  12. Simonnet A., Engelmann I., Moreau A.S., Garciaa B., Sixa S., Kalioubie A.E., Robriquet L, Hober D., Jourdain M. High incidence of Epstein–Barr virus, cytomegalovirus, and human-herpes virus-6 reactivations in critically ill patients with COVID-19. Infect. Dis., 2021, Vol. 51, no. 3, pp. 296-299.
  13. Yang J., Zheng Y., Gou X., Pu K., Chen Z., Guo Q., Ji R., Wang H., Wang Y., Zhou Y. Prevalence of comorbidities and its effects in patients infected with SARS-CoV-2: a systematic review and meta-analysis. Int. J. Infect. Dis., 2020, Vol. 94, pp. 91-95.
  14. Zubchenko S., Kril I., Nadizhko O., Matsyura O., Chopyak V. Herpesvirus infections and post-COVID-19 manifestations: a pilot observational study. Rheumatol. Int., 2022, Vol. 42, no. 9, pp. 1523-1530.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2023 Atazhakhova M.G., Nesterova I.V., Chudilova G.A., Matushkina V.A., Kovaleva S.V., Chapurina V.N.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № 77 - 11525 от 04.01.2002.


This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies