Lymphocyte subsets in epicardial, thymic and subcutaneous adipose tissue during advanced coronary atherosclerosis in patients with coronary artery disease

Full Text

Введение

В настоящее время важная роль жировой ткани в регуляции метаболизма, процессов репродукции, иммунорегуляции и увеличения риска сердечно-сосудистых заболеваний является общепризнанной. Кроме того, установлено, что свойства различных жировых депо разнятся как по характеристикам адипоцитов, основных клеточных элементов жировой ткани, так и по составу клеток стромально-сосудистой фракции жировой ткани, которые очень тесно взаимодействуют с адипоцитами [4].

Отличительной чертой висцеральной жировой ткани является значительная доля в ней FoxP3⁺Т-регуляторных (Treg)-лимфоцитов, которые в норме могут составлять до 50% от всех CD4⁺Т-лимфоцитов [15]. FoxP3 является основным транскрипционным фактором Treg, что подразумевает необходимость его транслокации в ядро для участия Treg-лимфоцитов в подавлении иммунного ответа и воспаления [10]. В последнее время обсуждается наличие субпопуляций Treg-лимфоцитов с высокой и низкой экспрессией молекулы CD25 (CD4⁺CD25^hiFoxP3⁺ и CD4⁺CD25^lowFoxP3⁺Treg), которые, по-видимому, представляют собой клетки на различных стадиях зрелости. Причем увеличение доли клеток с низкой экспрессией CD25 оказалось характерным для пациентов с хроническими воспалительными заболеваниями [2].

Следует признать, что для пациентов с сердечно-сосудистой патологией, в том числе атеросклеротической природы, важнейшую роль играет морфология и функциональная активность эпикардиальной жировой ткани (ЭЖТ) [3]. ЭЖТ непосредственно прилежит к ткани миокарда и имеет с ней общее кровоснабжение. Несмотря на то, что адипоциты ЭЖТ имеют морфологию, свойственную белой жировой ткани, они обладают рядом черт бурой жировой ткани, что определяет их уникальность [7]. У пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС) ЭЖТ характеризуется более выраженным воспалением по сравнению с подкожной жировой тканью (ПЖТ) и висцеральными жировыми депо [7]. Однако на сегодняшний день получено крайне мало данных о вовлеченности лимфоцитарного звена иммунной системы в модуляцию воспаления в ЭЖТ у пациентов с ИБС, а также о взаимосвязи выраженности коронарного атеросклероза с долей иммуносупрессорных FoxP3⁺T-регуляторных лимфоцитов в составе стромально-сосудистой фракции ЭЖТ.

Жировая ткань тимуса (ТЖТ) представляет собой наименее изученное в функциональном аспекте депо жировой ткани, начиная с того, что отсутствует однозначное мнение о происхождении тимусных адипоцитов [9]. При этом показано, что тимус в зрелом возрасте сохраняет очаги функциональной активности. FoxP3⁺Treg-лимфоциты в свою очередь оказались способными к рециркуляции в тимус. Рециркулировавшие Treg могут подавлять развитие Treg-лимфоцитов de novo и таким образом способствовать срыву аутоиммунной толерантности, что особенно актуально у пациентов с ИБС и атеросклерозом [1, 6], однако взаимосвязь клеточного состава ТЖТ с выраженностью коронарного атеросклероза по-прежнему остается неизученной.

Целью данной работы стало исследование состава субпопуляций лимфоцитов и свойств FoxP3⁺Treg-лимфоцитов в эпикардиальной, тимусной и подкожной жировой ткани в зависимости от выраженности коронарного атеросклероза у пациентов с хронической ИБС.

Материалы и методы

Проведено наблюдательное одноцентровое одномоментное исследование на базе института (директор – директор). В исследование вошло 24 пациента с ИБС, имеющие показания для проведения хирургической операции на открытом сердце. Все исследования и манипуляции были проведены в рамках Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266. Исследование было одобрено локальным этическим комитетом института (протокол № 241 от 09.03.2023 г.). Все пациенты, вошедшие в исследование, подписали добровольное информированное согласие. Критерии включения в исследование: возраст пациентов от 40 до 70 лет; наличие верифицированного диагноза «хроническая ИБС со стабильной стенокардией II–III ФК»; наличие показаний для проведения селективной ангиографии и проведения кардиохирургического вмешательства на открытом сердце. Критерии исключения из исследования: острые атеросклеротические осложнения или проведение хирургического вмешательства в течение последних 6 месяцев; любое острое воспалительное заболевание или хроническое заболевание в стадии обострения; хроническая болезнь почек выше с3б; любое онкологическое или гематологическое заболевание; отказ от участия в исследовании.

Все пациенты получали стандартную медикаментозную терапию. Как минимум за неделю до хирургического вмешательства всем пациентам была выполнена селективная ангиография на ангиографическом комплексе Artis one и Digitron-3NAC компьютерной системе (Siemens Shenzhen Magnetic Resonance Ltd., Shenzhen, Китай). На основании данных ангиографии оценивали выраженность коронарного атеросклероза путем расчета индекса Gensini Score [13].

Материалом для исследования служили образцы ЭЖТ, ПЖТ и ТЖТ, взятые в ходе операционного вмешательства, массой 0,2-1 г. Транспортировку образцов в лабораторию осуществляли в течение 15 минут после помещения жировой ткани в среду М199. Выделение стромально-сосудистой фракции жировой ткани проводили следующим образом: образцы жировой ткани механически измельчали, добавляли раствор коллагеназы I типа в буфере Кребса–Рингера (1 мг/ мл, НПП «ПанЭко», Россия) и помещали в термостат при 37 °С и постоянном мягком перемешивании; затем добавляли раствор Кребса–Рингера в соотношении 1:1 для нейтрализации коллагеназы; полученную суспензию клеток пропускали через нейлонный фильтр (Falcon Cell strainer, диаметр пор 100 мкм), центрифугировали 5 мин при 400 g, пропускали через нейлонный фильтр (Falcon Cell strainer, диаметр пор 700 мкм), центрифугировали 5 мин при 400 g и ресуспендировали осадок в полной среде RPMI 1640 (10% фетальной бычьей сыворотки; 1% L-глутамина; 1% пенициллина/стрептомицина).

Суспензию клеток стромально-сосудистой фракции ЭЖТ, ПЖТ и ТЖТ аликвотировали по 100 мкл и проводили окрашивание основных субпопуляций лимфоцитов и NK-клеток (использовали коктейль моноклональных антител: анти-CD3-FITC; анти-CD16/CD56-PE; анти-CD45-PerCP-Cy5.5; анти-CD4-PE-Cy7; анти-CD19-APC; анти-CD8-APC-Cy7; BD, США), а также FoxP3⁺Treg-лимфоцитов. Для окрашивания поверхностных маркеров FoxP3⁺Treg-лимфоцитов использовали моноклональные антитела, меченные флуорохромами: анти-CD45-APC-Cy7; анти-CD4-FITC, анти-CD25-PE (BD Pharmingen, США). Затем клетки фиксировали, пермеабилизировали, и окрашивали антителами анти-FoxP3-AF647 (BD Pharmingen, США). В качестве ДНК-тропного красителя использовали 7-аминоактиномицин D (7-AAD).

Клетки собирали на проточной цитометре Amnis FlowSight (Cytek Biosciences, Fremont, США), оснащенном лазерами 488 нм и 642 нм, используя программное обеспечение INSIRE (Amnis Corporation, США). Светлопольные изображения собирали на канале 1. Регистрацию бокового светорассеяния производили с помощью лазера 785 нм. Анализ данных проводили в программе IDEAS 6.2.64.0 (Amnis Corporation, США). Выделяли субпопуляции CD4⁺CD25^hiFoxP3⁺ и CD4⁺CD25^lowFoxP3⁺Treg. Оценивали долю Treg в каждой субпопуляции с FoxP3, транслоцированным в ядро, с помощью мастера для анализа изображений клеток Nuclear Localization Wizard.

Статистическую обработку данных проводили с помощью программного обеспечения STATISTICA 10.0 (StatSoft, США). Для оценки характера распределения данных использовали критерий Шапиро–Уилка. Количественные данные представляли в виде медианы и межквартильного интервала – Me (Q_0,25-Q_0,75). Категориальные данные представляли в виде абсолютных значений (n). Для исследования значимости различий количественных данных применяли U-критерий Манна–Уитни. Ранговый коэффициент корреляции Спирмена (rs) использовали для оценки взаимосвязи между переменными. Значения p < 0,05 считали статистически значимыми.

Результаты и обсуждение

Верхний квартиль индекса Gensini Score в общей выборке пациентов с ИБС составил 65,0 баллов. Мы разделили всех пациентов в зависимости от выраженности коронарного атеросклероза в соответствии с индексом Gensini Score: группа 1 – пациенты с Gensini Score < 65 баллов; группа 2 – пациенты с Gensini Score ≥ 65 баллов (наиболее выраженный и распространенный коронарный атеросклероз). Группы пациентов были сопоставимы по полу, возрасту, продолжительности ИБС, окружности талии, статусу курения, качеству контроля артериального давлению. Все пациенты принимали препараты статинов. Пациенты с Gensini Score ≥ 65 баллов характеризовались более высоким ИМТ по сравнению с пациентами с Gensini Score < 65 баллов (табл. 1).

 

Таблица 1. Базовые характеристики пациентов

Table 1. Basic characteristics of patients

Параметр Parameter	Gensini Score < 65 баллов Gensini Score < 65 points (n = 15)	Gensini Score ≥ 65 баллов Gensini Score ≥ 65 points (n = 9)	p
Пол (муж/жен), n Sex (male/female), n	12/3	9/0	0,266
Возраст, лет Age, years	65,0 (58,0-67,0)	65,0 (55,0-68,0)	0,953
Gensini Score, баллы Gensini Score, points	33,5 (9,0-56,0)	77,5 (75,0-100,0)	< 0,001
Продолжительность ИБС, лет CAD duration, years	4,5 (1,0-12,0)	8,5 (2,3-12,5)	0,482
ИМТ, кг/м2 BMI, kg/m2	27,3 (24,7-29,0)	30,5 (28,7-32,4)	0,035
Окружность талии, см Waist circumference, cm	100,0 (96,5-106,5)	106,0 (100,0-111,0)	0,310
Курение, n Smoking, n	7	3	0,679
Систолическое АД, мм рт. ст. Systolic BP, mmHg	137,0 (125,0-144,0)	125,0 (111,0-133,0)	0,088
Диастолическое АД, мм рт. ст. Diastolic BP, mmHg	68,0 (65,0-77,0)	70,0 (68,0-73,0)	0,689
Прием статинов, n Statins intake, n	15	9	0,999

Примечание. АД – артериальное давление; ИМТ – индекс массы тела; ИБС – ишемическая болезнь сердца.

Note. BP, blood pressure; BMI, body mass index; CAD, coronary artery disease.

 

В общей группе мы выявили прямую корреляционную взаимосвязь между уровнем Gensini Score и долей CD4⁺CD25^loTreg-клеток с внутриядерной транслокацией FoxP3 в ЭЖТ (r_s = 0,468; p = 0,021). Относительное содержание CD4⁺CD25^hiTreg-клеток с внутриядерной транслокацией FoxP3 в ТЖТ было обратно взаимосвязано со значением отношения окружности талии к окружности бедер (r_s = -0,474; p = 0,041).

В группе с Gensini Score ≥ 65 баллов пациенты характеризовались большим относительным содержанием CD4⁺CD25^loTreg-клеток в ЭЖТ с внутриядерной транслокацией FoxP3, а также имели тенденцию к снижению относительного содержания CD4⁺CD25^hiTreg-клеток с внутриядерной транслокацией FoxP3 в ТЖТ (табл. 2).

 

Таблица 2. Доля FoxP3⁺Т-регуляторных лимфоцитов и уровень транслокации FoxP3 в ядро клеток в различных жировых депо пациентов с ИБС

Table 2. FoxP3⁺T regulatory lymphocytes frequency and FoxP3 nuclear translocation in various fat depots of CAD patients

Параметр Parameter	Gensini Score < 65 баллов Gensini Score < 65 points (n = 15)	Gensini Score ≥ 65 баллов Gensini Score ≥ 65 points (n = 9)	p
ТЖТ CD25hiFoxP3+Treg, % TAT CD25hiFoxP3+Treg, %	7,5 (4,5-13,9)	9,1 (6,5-16,3)	0,482
ТЖТ CD25loFoxP3+Treg, % TAT CD25loFoxP3+Treg, %	3,2 (2,2-6,7)	5,5 (3,9-6,8)	0,411
ТЖТ ядр FoxP3 CD25hiTreg, % TAT nucl FoxP3 CD25hiTreg, %	34,3 (22,8-51,4)	19,4 (14,9-26,0)	0,084
ТЖТ ядр FoxP3 CD25loTreg, % TAT nucl FoxP3 CD25loTreg, %	23,1 (11,6-38,8)	13,8 (5,8-18,7)	0,138
ЭЖТ CD25hiFoxP3+Treg, % EAT CD25hiFoxP3+Treg, %	9,5 (4,2-17,2)	8,9 (5,6-22,3)	0,770
ЭЖТ CD25loFoxP3+Treg, % EAT CD25loFoxP3+Treg, %	3,0 (0,9-11,0)	3,1 (2,2-6,2)	0,999
ЭЖТ ядр FoxP3 CD25hiTreg, % EAT nucl FoxP3 CD25hiTreg, %	19,6 (0,0-32,0)	16,7 (11,8-22,1)	0,770
ЭЖТ ядр FoxP3 CD25loTreg, % EAT nucl FoxP3 CD25loTreg, %	11,0 (0,0-26,1)	27,6 (20,0-33,3)	0,014
ПЖТ CD25hiFoxP3+Treg, % SAT CD25hiFoxP3+Treg, %	13,1 (9,8-20,0)	8,8 (4,5-17,5)	0,411
ПЖТ CD25loFoxP3+Treg, % SAT CD25loFoxP3+Treg, %	4,6 (1,4-10,5)	3,5 (1,8-8,2)	0,999
ПЖТ ядр FoxP3 CD25hiTreg, % SAT nucl FoxP3 CD25hiTreg, %	15,8 (7,8-33,0)	16,3 (0,0-20,9)	0,640
ПЖТ ядр FoxP3 CD25loTreg, % SAT nucl FoxP3 CD25loTreg, %	16,4 (0,0-24,5)	0 (0,0-14,3)	0,411

Примечание. ТЖТ – тимусная жировая ткань; ПЖТ – подкожная жировая ткань; ЭЖТ – эпикардиальная жировая ткань; ядр FoxP3 – доля клеток с FoxP3, локализованным в ядре; для субпопуляций Treg указана доля клеток от всех CD4⁺Т-лимфоцитов; доля клеток с транслокацией FoxP3 в ядро указана от всех CD25^hiTreg или CD25^loTreg.

Note. TAT, thymic adipose tissue; SAT, subcutaneous adipose tissue; EAT, epicardial adipose tissue; nucl FoxP3, frequency of cells with FoxP3, localized in nucleus; Treg frequency represents percentage of all CD4⁺T lymphocytes; frequency of cells with FoxP3 nuclear translocation represents percentage of all CD25^hiTreg или CD25^loTreg.

 

Кроме того, у пациентов с Gensini Score ≥ 65 баллов мы выявили статистически значимо большее содержание CD8⁺Т-лимфоцитов и NK-клеток и меньшее содержание двойных позитивных CD4⁺CD8⁺Т-лимфоцитов в ТЖТ по сравнению с пациентами с Gensini Score < 65 баллов (табл. 3).

 

Таблица 3. Субпопуляции лимфоцитов в различных жировых депо пациентов с ИБС

Table 3. Lymphocyte subsets in various fat depots of CAD patients

Параметр Parameter	Gensini Score < 65 баллов Gensini Score < 65 points (n = 15)	Gensini Score ≥ 65 баллов Gensini Score ≥ 65 points (n = 9)	p
ТЖТ CD4+Т-лимфоциты, % TAT CD4+Т lymphocytes, %	33,6 (30,5-43,5)	29,6 (25,4-31,6)	0,112
ТЖТ CD8+Т-лимфоциты, % TAT CD8+Т lymphocytes, %	19,5 (15,8-27,2)	30,3 (29,9-30,9)	0,029
ТЖТ CD4+CD8+Т-лимфоциты, % TAT CD4+CD8+Т lymphocytes, %	1,3 (0,7-2,4)	0,3 (0,2-0,6)	0,038
ТЖТ NK-клетки, % TAT NK cells, %	3,1 (1,8-6,0)	14,2 (10,9-16,7)	0,022
ТЖТ NKT-клетки, % TAT NKT cells, %	9,9 (4,7-14,6)	10,9 (5,8-18,9)	0,596
ТЖТ В-лимфоциты, % TAT B lymphocytes, %	5,7 (3,8-8,5)	3,3 (2,6-4,2)	0,316
ЭЖТ CD4+Т-лимфоциты, % EAT CD4+T lymphocytes, %	35,2 (31,0-37,9)	31,2 (23,5-39,8)	0,680
ЭЖТ CD8+Т-лимфоциты, % EAT CD8+T lymphocytes, %	26,8 (19,6-28,4)	30,6 (22,7-35,9)	0,517
ЭЖТ NK-клетки, % EAT NK cells, %	10,7 (6,6-15,4)	10,1 (5,9-12,9)	0,680
ЭЖТ NKT-клетки, % EAT NKT cells, %	13,0 (5,0-13,4)	14,7 (6,4-20,2)	0,596
ЭЖТ В-лимфоциты, % EAT B lymphocytes, %	4,8 (2,7-11,1)	7,9 (4,2-10,8)	0,680
ПЖТ CD4+Т-лимфоциты, % SAT CD4+T lymphocytes, %	32,8 (23,7-32,9)	34,1 (32,7-36,4)	0,216
ПЖТ CD8+Т-лимфоциты, % SAT CD8+T lymphocytes, %	16,3 (13,4-20,5)	27,1 (18,6-28,7)	0,216
ПЖТ NK-клетки, % SAT NK cells, %	21,5 (16,3-26,1)	14,6 (10,8-21,9)	0,215
ПЖТ NKT-клетки, % SAT NKT cells, %	14,4 (7,3-17,3)	10,1 (6,7-18,4)	0,723
ПЖТ В-лимфоциты, % SAT B lymphocytes, %	2,2 (1,3-3,7)	1,9 (1,2-2,3)	0,953

Примечание. ТЖТ – тимусная жировая ткань; ПЖТ – подкожная жировая ткань; ЭЖТ – эпикардиальная жировая ткань; доля клеток указана от всех CD45⁺ лимфоцитов.

Note. TAT, thymic adipose tissue; SAT, subcutaneous adipose tissue; EAT, epicardial adipose tissue; the frequency of cells is indicated as percentage of all CD45⁺ lymphocytes.

 

По данным корреляцонного анализа уровень ядерной транслокации FoxP3 в CD4⁺CD25^hiTreg-клетках ТЖТ был обратно взаимосвязан с долей CD8⁺Т-лимфоцитов (r_s = -0,653; p = 0,012) и NK-клеток (r_s = -0,723; p = 0,003) в ТЖТ и прямо – с долей двойных позитивных CD4⁺CD8⁺Т-лимфоцитов в ТЖТ (rs = 0,567; p = 0,034).

Ранее были получены сведения, что сохранность функциональной активности тимуса непосредственно взаимосвязана с тяжестью коронарного атеросклероза. Отчасти это можно объяснить нарушением негативной селекции в тимусе и выходу аутореактивных клонов Т-лимфоцитов, способных распознавать молекулу ApoB [6]. При этом была также показана тесная взаимосвязь между состоянием тимуса и метаболической дисфункцией: полная жировая дегенерация тимуса ассоциировалась с мужским полом, более высоким ИМТ, дислипидемией и артериальной гипертензией [12].

На наш взгляд, присутствие меньшего количества двойных позитивных CD4⁺CD8⁺Т-лимфоцитов в ТЖТ при более выраженном коронарном атеросклерозе может отражать более выраженное угасание тимопоэза у пациентов с ИБС и может находиться в непосредственной взаимосвязи с функциональной активностью Treg-лимфоцитов. Помимо тимуса, присутствие двойных позитивных CD4⁺CD8⁺ лимфоцитов было показано в жировой ткани средостения и дуге аорты [14]. Остается открытым вопрос, способны ли CD4⁺CD8⁺ лимфоциты мигрировать из жировой ткани в стенки сосуда и какую функцию они там могут выполнять.

Для CD8⁺Т-лимфоцитов жировой ткани в свою очередь была показана способность к переключению фенотипа макрофагов на провоспалительный М1-фенотип и поддержанию воспаления в жировой ткани [8]. Схожую функцию, по-видимому, могут выполнять и NK-клетки жировой ткани [5]. Мы показали взаимосвязь этих клеточных популяций, расположенных в ТЖТ, с развитием выраженного атеросклеротического поражения коронарных артерий у пациентов с ИБС, и их ассоциацию с уровнем ядерной транслокации FoxP3 в Treg-лимфоцитах.

В соответствии с нашими данными, Treg-лимфоциты в ЭЖТ, непосредственно прилегающей к ткани миокарда, при наиболее выраженном коронарном атеросклерозе находятся в активированном состоянии, так как уровень транслокации FoxP3 в их ядро был выше. Учитывая способность Treg-лимфоцитов к рециркуляции в тимус из периферических органов и систем [1], нельзя исключить, что субпопуляции ТЖТ и ЭЖТ Treg-лимфоцитов взаимосвязаны между собой, а Treg из ЭЖТ при возвращении в тимус, могут подавлять генерацию Treg de novo и приводить к угнетению аутотолерантности. ЭЖТ даже в физиологических условиях характеризуется более выраженной экспрессией генов, контролирующих развитие воспаления, и снижением регуляции со стороны генов, контролирующих пролиферацию и катаболизм, по сравнению с ПЖТ. Нельзя исключить, что в условиях ишемии, адипоциты, взаимодействуя напрямую с кардиомиоцитами и стромальными клетками миокарда, могут получать дополнительные паракринные сигналы, способствующие прогрессированию воспаления [11]. Природа данных сигналов и место Treg-лимфоцитов в регуляции данных процессов требует дальнейшего изучения.

Заключение

Таким образом, мы показали, что у пациентов с хронической ИБС уровень транслокации FoxP3 в ядро в эпикардиальной жировой ткани в CD4⁺CD25^loTreg-клетках прямо связан с выраженностью атеросклероза, в то время как в тимусной жировой ткани имеется тенденция к наличию обратной взаимосвязи между выраженностью атеросклероза и уровнем транслокации FoxP3 в ядро в CD4⁺CD25^hiTreg-клетках. В жировой ткани тимуса уровень ядерной транслокации FoxP3 в CD4⁺CD25^hiTreg-клетках имеет ассоциацию с антропометрическими показателями ожирения и изменением субпопуляционного состава лимфоцитов. Требуется проведение дальнейших исследований для изучения молекулярных механизмов реализации данных взаимосвязей и определения места данного патофизиологического феномена в стратификации риска и разработке подходов к терапии пациентов с коронарным атеросклерозом и хронической ИБС.

About the authors

I. V. Kologrivova

Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Center, Russian Academy of Sciences

Author for correspondence.
Email: ikologrivova@gmail.com

PhD (Medicine), Senior Research Associate, Department of Clinical Laboratory Diagnostics

Russian Federation, Tomsk

A. A. Dmitriukov

Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Center, Russian Academy of Sciences

Email: ikologrivova@gmail.com

Postgraduate Student, Junior Research Associate, Department of Clinical Laboratory Diagnostics

Russian Federation, Tomsk

N. V. Naryzhnaya

Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Center, Russian Academy of Sciences

Email: ikologrivova@gmail.com

PhD, MD (Medicine), Leading Research Associate, Laboratory of Experimental Cardiology

Russian Federation, Tomsk

O. A. Koshelskaya

Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Centre, Russian Academy of Sciences

Email: ikologrivova@gmail.com

PhD, MD (Medicine), Professor, Leading Research Associate, Department of Atherosclerosis and Coronary Artery Disease

Russian Federation, Tomsk

O. A. Kharitonova

Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Centre, Russian Academy of Sciences

Email: ikologrivova@gmail.com

Junior Research Associate, Department of Atherosclerosis and Coronary Artery Disease

Russian Federation, Tomsk

A. I. Vyrostkova

Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Centre, Russian Academy of Sciences

Email: ikologrivova@gmail.com

Research Laboratory Assistant, Department of Clinical Laboratory Diagnostics

Russian Federation, Tomsk

V. V. Evtushenko

Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Centre, Russian Academy of Sciences

Email: ikologrivova@gmail.com

PhD, MD (Medicine), Doctor of the Department of Cardiovascular Surgery

Russian Federation, Tomsk

A. S. Krapivina

Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Centre, Russian Academy of Sciences

Email: ikologrivova@gmail.com

Research Laboratory Assistant, Department of Atherosclerosis and Coronary Artery Disease

Russian Federation, Tomsk

P. E. Riabchenko

Siberian State Medical University

Email: ikologrivova@gmail.com

Student

Russian Federation, Tomsk

T. E. Suslova

Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Centre, Russian Academy of Sciences

Email: ikologrivova@gmail.com

PhD (Medicine), Head, Department of Clinical Laboratory Diagnostics

Russian Federation, Tomsk

References

Supplementary files