Experimental assessment of the immunotropic properties of the new biocomplund

Full Text

Введение

На сегодняшний день известно, что медицинские иммунобиологические препараты (МИП) являются весьма эффективными иммунотропными средствами для лечения и коррекции иммунопатологических состояний [1, 2]. Известно, что одной из распространенных фармакологических групп, принадлежащих к МИП, являются пробиотики, эубиотики и метабиотики [3, 4]. Так, отечественными и зарубежными исследователями отдается предпочтение метабиотикам при разработке новых лекарственных кандидатов [4, 5, 6]. Именно отсутствие вегетативных пробиотических клеток позволяет снизить антигенную нагрузку в условиях иммунокорекции. При этом фармакологическая активность и эффективность метабиотиков не уступает самим пробиотикам.

Целесообразно отметить, что сегодня активно ведется поиск новых направлений использования метабиотиков, например иммунопротекторов, иммунокоректоров, гепатопротекторов, иммуномодуляторов и др. [8]. В проведенных нами ранее исследованиях гепатопиктов – перспективных биологически активных соединениях, продуцируемых микроорганизмами сенной палочки, были установлены гепатопротективные свойства. Кроме того, метаболиты штаммов 59Т и 60Т проявляли свойства индуктора á-интерферона. В связи с этим, представляется целесообразным выполнить исследования по оценке иммунотропных свойств на показатели гуморального иммунитета метаболитов данных штаммов в условиях острого токсического повреждения печени.

Цель исследования – изучить влияние сочетанного применения БАД, продуцируемых микроорганизмами сенной палочки на характеристики гуморального статуса у лабораторных животных с острым токсическим гепатитом.

Материалы и методы

Объектом исследования являлся комплекс метаболитов (БАД) сенной палочки штаммов 59Т и 60Т в равных частях. Комплекс БАД получали в соответствии с общепринятыми и имеющимися в научной литературе методами [7]. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии оценивали количественное и качественной содержание биологически активных веществ: полисахаридный и белковый комплексы 210-320 г/л; протеины и аминокислоты (свободные) – 110-190 г/л; гексозамин – 50-60 г/л; основания пуриновые и пиримидиновые (аденин 21-22 г/л; гуанин 3-4 г/л; цитозин г/л; тимин 4-6 г/л; урацил 14-16 г/л); витамины и витаминоподобные соедиения: пиридоксин 2,0 г/л; рибофлавин 2,2 г/л; ферментные комплексы: ферменты: протеолитические 800-890 ед/г; амилолитические 900-950 ед/г; антибиотики и антибиотикоподобные вещества 0,09-0,4%; другие соединения < 5%.

Воспроизведение модели острого токсического поражения печени осуществляли на лабораторных животных – белые крысы линии Wistar. В течение двухнедельного срока интрагастрально белым лабораторным животным вводили четыреххлористый углерод (40%-ный раствор расчета 2,0 dg.kg^-1). Критерием оценки острого гепатита были общий, биохимический анализ периферической крови и гистоморфологическое исследование.

Все животные в эксперименте были разделены на 6 групп, по 8 лабораторных животных в каждом. Первой группе назначали исследуемый БАД. Вторая группа получала метаболиты штамма сенной палочки 59Т. Третьей группе вводили метаболиты штамма сенной палочки 60Т. Четвертая группа получала препарат сравнения урсосан. Пятая группа – контроль – острый токсический гепатит без лечения. Шестая группа – интактные животные. Лечение назначалось в течение 7 дней с момента возникновения острого гепатита. Наблюдение за подопытными животными осуществляли в течение 30 суток.

Оценку иммунотропного действия проводили по таким показателям, как: иммуноглобулиновый титр М, G, A, E, количественные показатели á-интерферона и циркулирующих иммунных комплексов.

Статистическую обработку полученных данных осуществляли с применением компьютерных программ Microsoft Office Excel 2019 и Statistica 23.0. Использовали метод дисперсионного анализа (ANOVA). Нормальность распределения полученных данных оценивали по методу Колмогорова–Смирнова. Применяли параметрический критерий Фишера в зависимости от нормальности распределения данных, также непараметрический W-критерий Вилкоксона при уровне значимости р < 0,05.

Результаты и обсуждение

В результате проведенного исследования установлено, что у животных с воспроизведенной моделью острого токсического поражения печени на третьи сутки наблюдали возникновение иммуновоспалительного синдрома, о чем свидетельствует увеличении всех исследуемых параметров гуморального иммунитета. Так, следует отметить, что содержание иммуноглобулинов Е увеличилось в 2,2 раза, количественный показатель IgM повысился в 4 раза, а титр циркулирующих иммунных комплексов – в 2,9 раза. При этом в экспериментальной группе отмечали индукцию эндогенного интерферона в 3,1 раза по сравнению с контрольной группой.

На четверные сутки после начала введения исследуемых образцов в группах лабораторных животных, которым назначали начало достоверного снижения количественных показателей IgE, IgM и CIC. При этом установлено увеличение таких факторов, как IgG и IgA, а также повышение индукции á-интерферона 74,8±3,3 нг/л (группа I) 24,1±1,5 нг/л (группа V). В группе, где животные получали препарат сравнения (группа IV), данный показатель составлял 25,6±1,4 нг/л и достоверно коррелировал с группой V. Дальнейшего достоверного снижения во всех экспериментальных группах титра CIC не регистрировали.

На пятнадцатые сутки эксперимента установлена регрессия исследуемых показателей гуморального иммунитета во всех группах лабораторных животных. Однако титр IgM превышал в 4 раза, чем аналогичный показатель в контроле (группа VI). При этом остальные количественные параметры также оставались высокими. Кроме того, титр á-IFN в группе I составлял 59,1±2,7 нг/л по сравнению с группой IV 24,3±1,4 нг/л и группой V – 22,6±1,2 нг/л.

На двадцать четвертые сутки эксперимента в группе I отмечали возвращение показателей гуморального иммунитета до первоначальных величин. В группах II и III зарегистрирована регрессия всех показателей гуморального иммунитета до верхних границ нормальных величин только на тридцатые сутки. Следует отметить, что в группе IV сохранялся повышенный титр циркулирующих иммунных комплексов.

Заключение

В результате проведенных исследований получены достоверные данные об увеличении количества всех типов иммуноглобулинов, индукцию эндогенного альфа-интерферона и антителобразующих клеток в условиях острого токсического поражения печени, а по истечении 15 суток под действием БАВ зарегистрировано достоверное возвращение всех измененных показателей до первоначальных значений факторов гуморального иммунитета.

Таким образом, на основании выполненных исследований можно сделать заключение о потенцированном действии изучаемого БАД (метаболиты двух штаммов) по сравнению с метабиотиками от одного из штаммов и препаратом сравнения. В связи с этим целесообразно в качестве будущего лекарственного кандидата рекомендовать именно сочетанное использования консорциума метаболитов двух штаммов сенной палочки.

About the authors

N. A. Zabokritskiy

Author for correspondence.
Email: pharmusma@rambler.ru

PhD, MD (Medicine), Associate Professor, Senior Research Associate, Laboratory of Immunophysiology and Immunopharmacology

References

Supplementary files