Отправить статью по E-mail Регуляторный ревматоидный фактор в экспериментальной модели синдрома Шегрена у крыс
- Авторы: Иванов П.В.1, Сидоров А.Ю.1,2, Терентьев А.С.1,2, Черепанов И.С.1
-
Учреждения:
- ФГБОУ ВО «Удмуртский государственный университет»
- ФГБУН «Удмуртский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук»
- Выпуск: Том 28, № 3 (2025)
- Страницы: 443-448
- Раздел: КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
- Дата подачи: 25.03.2025
- Дата принятия к публикации: 25.05.2025
- Дата публикации: 18.09.2025
- URL: https://rusimmun.ru/jour/article/view/17134
- DOI: https://doi.org/10.46235/1028-7221-17134-RRF
- ID: 17134
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Ранее нами был обнаружен новый фактор регуляции аутореактивности, получивший название регуляторный ревматоидный фактор (регРФ). Он представлен популяцией антиидиотипических антител, которые объединяет наличие общего паратопа, специфичного к PD1-молекуле. РегРФ оказывает цитотоксическое действие на активированные PD-1+CD4 Т-лимфоциты, посредством которого контролирует экспансию лимфоцитов. Было замечено, что продукция регРФ в период индукции таких экспериментальных аутоиммунных заболеваний, как коллаген-индуцированный артрит, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит и атеросклероз крыс, предотвращает развитие заболевания. Ассоциация между регРФ и устойчивостью к развитию заболевания предполагает, что стимуляция продукции регРФ может быть эффективным средством лечения данных аутоиммунных заболеваний, чему были получены экспериментальные доказательства. Синдром Шегрена (СШ) – аутоиммунное заболевание, сопровождающее другие аутоиммунные заболевания или возникающее самостоятельно. При СШ поражаются слюнные железы (СЖ) и может развиваться лимфоцитопения. Является ли регРФ фактором устойчивости крыс к развитию СШ и может ли быть использована стимуляция продукции регРФ для лечения СШ, неизвестно. Целью данной работы было выяснение роли регРФ в обеспечении устойчивости крыс к развитию СШ. СШ индуцировали у крыс Wistar иммунизацией белками, выделенными из СЖ мыши. Еженедельно до и после иммунизации забирали кровь из хвостовой вены. Гистологический анализ поднижнечелюстных СЖ проводили через 12 недель после первой иммунизации. В сыворотке крови определяли уровень регРФ методом пассивной гемагглютинации танизированных нагруженных IgG эритроцитов, а также уровень аутоантител к CD4 методом ИФА. В крови измеряли количество CD3+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов методом проточной цитометрии. У 40% крыс иммунизированных белками СЖ мыши выявлены повреждения СЖ, характерные для неспецифического хронического сиалоаденита, развивающегося при СШ. У 50% крыс в ответ на иммунизацию белками СЖ мыши развивалась хроническая CD3, CD4 и CD8-лимфоцитопения. Аутоантитела к CD4 у крыс с CD4-лимфоцитопенией найдены не были. Выявлена ассоциация между высоким уровнем регРФ на 7-й день после иммунизации белками СЖ мыши и устойчивостью крыс к сиалоадениту. Однако развитие лимфоцитопении не зависело от продукции регРФ в период индукции СШ. Таким образом, регРФ является фактором устойчивости крыс к развитию сиалоаденита, но не лимфоцитопении в модели СШ.
Ключевые слова
Полный текст
Введение
Регуляторный ревматоидный фактор (регРФ) – популяция антиидиотипических антител, направленных к уникальным антигенсвязывающим участкам T- и В-клеточных рецепторов лимфоцитов. Особенностью регРФ, отличающих его от других антиидиотипических антител, является наличие общего паратопа, специфичного к молекуле PD-1 [2], обеспечивающего механизм иммуносупрессивного действия регРФ. регРФ оказывает цитотоксическое действие на активированные PD-1-экспрессирующие CD4-лимфоциты, которые при ряде аутоиммунных заболеваний выполняют основные эффекторные функции либо активируют CD8-лимфоциты [2, 7]. В экспериментальных моделях коллаген-индуцированного артрита, аутоиммунного энцефаломиелита и атеросклероза крыс продукция регРФ в период индукции заболевания предотвращает их развитие [1]. Стимуляции продукции регРФ Fc-фрагментами гомологичного IgG была применена для успешной терапии экспериментально-вызванных аутоиммунных заболеваний [6].
Синдром Шегрена (СШ) представляет собой хроническое системное аутоиммунное заболевание неизвестной этиологии. Как у людей, так и в экспериментальных моделях СШ характеризуется инфильтрацией и повреждением тканей слюнных желез (СЖ) CD4 Т-лимфоцитами и В-лимфоцитами [4]. Предполагается, что основными аутоиммунными мишенями при СШ являются ацинарные, вставочные и исчерченные протоковые эпителиальные клетки [9]. Примерно у 5% пациентов с СШ диагностируется идиопатическая CD4 Т-лимфоцитопения, не связанная с иммунодефицитом или терапией, влияющей на уровень CD4 Т-клеток. Кроме CD4-лимфоцитопении, может иметь место и снижение количества CD8 Т-лимфоцитов в периферической крови [8]. Типичными серологическими показателями при СШ являются гиперглобулинемия, анти-Ro/SSA антитела – у 33-74% и анти-La/SSB антитела – у 23-52%, антинуклеарные антитела – у 59-85%, ревматоидный фактор – у 36-74% пациентов [5].
Является ли регРФ фактором устойчивости крыс к развитию СШ и может ли быть использована стимуляция продукции регРФ для лечения СШ, неизвестно.
Целью работы было выяснение роли регРФ в модели СШ.
Материалы и методы
Для индукции СШ 6 крыс Wistar были иммунизированы внутрикожно белками СЖ мышей (по 100 мкг белка). Крысы получили 3 инъекции с интервалом в 1 неделю, первые две в составе ПАФ, третью – в составе НАФ. 3 крысы контрольной группы получили инъекцию ПАФ. До и после иммунизации у животных еженедельно забирали кровь, определяли уровень регРФ, аутоантител к CD4, количество CD3, CD4 и CD8 Т-лимфоцитов. Через 12 недель после первой иммунизации проводили гистологический анализ подчелюстных СЖ.
Гистологические срезы готовили по стандартной методике и окрашивали гематоксилином-эозином.
Белки для иммунизации готовили из СЖ мыши, смешивали с ПАФ или НАФ в соотношении 1:1 до получения стойкой эмульсии.
Кровь забирали из хвостовой вены под легкой эфирной анестезией перед иммунизацией и еженедельно в течение всего эксперимента.
Фенотипирование лимфоцитов проводили на проточном цитофлуориметре CytoFLEX Beckman Coulter в суспензии мононуклеров, выделенных из свежей крови на фиколле, после добавления к ним антител к CD3-PE/Elab Fluor® 594, к CD4- PE/Cyanine7, к CD8-PE/Cyanine5.5 (Elabscience).
РегРФ определяли в реакции пассивной гемагглютинации фиксированных танизированных нагруженных IgG-крысы эритроцитов человека.
IgG-крысы выделяли из сыворотки крови интактных крыс осаждением сульфатом аммония и эксклюзионной хроматографией.
Наличие и уровень антител к рекомбинантному CD4-белку крысы определяли методом непрямого твердофазного ИФА.
Статистический анализ проведен с использованием ПО GraphPad Prism. Различия считали значимыми при p < 0,05.
Результаты и обсуждение
Гистопатологические изменения в СЖ выявлены у 40% крыс. Обнаружены множественные очаги гиперплазии протокового эпителия, а также визуальное расширение зернистых протоков, что соответствует повреждению эпителия в них (рис. 1А). Выявленное увеличение просвета протоков характерно для неспецифического хронического сиалоаденита, развивающегося у пациентов с СШ [3]. Гиперплазия эпителия протоков, в свою очередь, служит показателем лимфоэпителиальных поражений, возникающих при СШ [3].
Рисунок 1. А, Б – срезы поднижнечелюстных слюнных желез крыс, иммунизированных гетерологичным гомогенатом слюнных желез мыши. А – крысы с гистопатологическими изменениями, подобными синдрому Шегрена. Б – крысы без изменений. Окраска – Н&Е. * – места разрушения эпителия зернистых протоков. Стрелки – очаги гиперплазии. В – кинетика регуляторного ревматоиного фактора у крыс с изменениями в слюнных железах, чувствительных к развитию сидрома Шегрена, и крыс без изменений в слюнных железах, резистентных к развитию сидрома Шегрена
Примечание. Каждая точка представлена как среднее ± SD. * – р < 0,05, критерий Манна–Уитни.
Figure 1. A, B, sections of the submandibular salivary glands of rats immunized with heterologous homogenate of mouse salivary glands. A, rats with histopathological changes similar to Sjogren’s syndrome B, rats without changes. Coloring, N&E. *, sites of destruction of the epithelium of granular ducts. Arrows, foci of hyperplasia. C, kinetics of regulatory rheumatoid factor in rats with changes in salivary glands sensitive to the development of Sjogren’s syndrome and rats without changes in salivary glands resistant to the development of Sjogren’s syndrome.
Note. Each point is represented as the average ± SD. *, p < 0.05, Mann–Whitney criterion.
На основании гистопатологической картины крысы были разделены на две группы – с изменениями в СЖ и без изменений.
Сравнительный анализ уровня регРФ в группах с изменениями в СЖ и без изменений показал, что у животных без изменений в СЖ происходило увеличение уровня регРФ на 7-й день после иммунизации белками-индукторами СШ (p ≤ 0,05), у крыс с изменениями в СЖ, характерными для СШ, уровень регРФ в ответ на иммунизацию не изменялся (рис. 1В). Таким образом, выявлена ассоциация между высоким уровнем регРФ в период индукции СШ и устойчивостью крыс к сиалоадениту.
У половины крыс, иммунизированных белками СЖ мыши, выявлена хроническая лимфоцитопения (рис. 2А). Снижению подверглись и CD4 и CD8 Т-лимфоциты (рис. 2Б, В). Аутоантитела к CD4 не были найдены у крыс с CD4-лимфоцитопенией (рис. 2В). Возможно, аутоиммунная атака в модели Шегрена направлена против дифференцированных антигенов Т-лимфоцитов.
Рисунок 2. Количество CD3 Т-лимфоцитов (А), CD8 Т-лимфоцитов (Б) и CD4 Т-лимфоцитов (В) в крови крыс, иммунизированных гомогенатом слюнных желез мыши. Кинетика аутоантител к CD4 у крыс с CD4 Т-лимфоцитопенией и без нее (В). Кинетика регуляторного ревматоидного фактора у крыс с лимфоцитопенией и без нее (Г)
Примечание. Каждая точка представлена как среднее ± SD.
Figure 2. The number of CD3 T lymphocytes (A), CD8 T lymphocytes (B) and CD4 T lymphocytes (C) in the blood of rats immunized with mouse salivary gland homogenate. Kinetics of CD4 autoantibodies in rats with and without CD4 T-lymphocytopenia (B). Kinetics of regulatory rheumatoid factor in rats with and without lymphocytopenia (D)
Note. Each point is represented as the mean ± SD.
Чтобы выяснить, играет ли регРФ роль в обеспечении устойчивости крыс к развитию Т-лимфоцитопении, был проведен сравнительный анализ уровня регРФ у крыс с лимфоцитопенией и без нее. Обнаружено, что развитие Т-лимфоцитопении не зависит от продукции регРФ в период индукции СШ (рис. 2Г).
Выводы
В экспериментальной модели СШ крыс продукция регРФ в период индукции заболевания предотвращает развитие неспецифического хронического сиалоаденита, но не влияет на развитие Т-лимфоцитопении у крыс.
Об авторах
Павел Владимирович Иванов
ФГБОУ ВО «Удмуртский государственный университет»
Автор, ответственный за переписку.
Email: aka.ven1k@gmail.com
к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории молекулярной и клеточной иммунологии
Россия, Удмуртская Республика, г. ИжевскА. Ю. Сидоров
ФГБОУ ВО «Удмуртский государственный университет»; ФГБУН «Удмуртский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук»
Email: aka.ven1k@gmail.com
к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории молекулярной и клеточной иммунологии, старший научный сотрудник лаборатории биосовместимых материалов
Россия, Удмуртская Республика, г. ИжевскА. С. Терентьев
ФГБОУ ВО «Удмуртский государственный университет»; ФГБУН «Удмуртский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук»
Email: aka.ven1k@gmail.com
старший научный сотрудник лаборатории молекулярной и клеточной иммунологии, научный сотрудник лаборатории биосовместимых материалов
Россия, Удмуртская Республика, г. ИжевскИ. С. Черепанов
ФГБОУ ВО «Удмуртский государственный университет»
Email: aka.ven1k@gmail.com
к.х.н., доцент кафедры фундаментальной и прикладной химии
Россия, Удмуртская Республика, г. ИжевскСписок литературы
- Beduleva L., Menshikov I., Stolyarova E., Fomina K., Lobanova O., Ivanov P., Terentiev A. Rheumatoid factor in idiotypic regulation of autoimmunity. Int. J. Rheum. Dis., 2015, Vol. 18, no. 4, pp. 408-420.
- Khramova T., Beduleva L., Sidorov A., Terentiev A., Menshikov I. Regulatory rheumatoid factor is specific to PD-1 and Uses PD-1 pathway to control CD4 T lymphocytes. Immunol. Invest., 2023, Vol. 52, no. 7, pp. 897-908.
- Liao R., Yang H.T., Li H., Liu L.X., Li K., Li J.J., Liang J., Hong X.P., Chen Y.L., Liu D.Z. Recent advances of salivary gland biopsy in Sjögren’s Syndrome. Front. Med. (Lausanne), 2022, Vol. 8, 792593. doi: 10.3389/fmed.2021.792593.
- Negrini S., Emmi G., Greco M., Borro M., Sardanelli F., Murdaca G., Indiveri F., Puppo F. Sjögren’s syndrome: a systemic autoimmune disease. Clin. Exp. Med., 2022, Vol. 22, no. 1, pp. 9-25.
- Patel R., Shahane A. The epidemiology of Sjögren’s syndrome. Clin. Epidemiol., 2014, Vol. 6, pp. 247-255.
- Sidorov A., Beduleva L., Menshikov I., Terentiev A., Stolyarova E., Abisheva N. Fc fragments of immunoglobulin G are an inductor of regulatory rheumatoid factor and a promising therapeutic agent for rheumatic diseases. Int. J. Biol. Macromol., 2017, Vol. 95, pp. 938-945.
- Stolyarova E., Beduleva L., Menshikov I., Snigiryev A., Khramova T. Mechanism by which regulatory rheumatoid factor prevents experimental autoimmune encephalomyelitis. Endocr. Metab. Immune Disord. Drug Targets, 2018, Vol. 18, no. 6, pp. 596-601.
- Sudzius G., Mieliauskaite D., Siaurys A., Viliene R., Butrimiene I., Characiejus D., Dumalakiene I. Distribution of Peripheral Lymphocyte Populations in Primary Sjögren’s Syndrome Patients. J. Immunol. Res., 2015, Vol. 2015, 854706. doi: 10.1155/2015/854706.
- Yura Y., Hamada M. Outline of salivary gland pathogenesis of Sjögren’s Syndrome and current therapeutic approaches. Int. J. Mol. Sci., 2023, Vol. 24, no. 13, 11179. doi: 10.1371/10.3390/ijms241311179.
Дополнительные файлы
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).