Т-лимфоциты периферической крови при ожоговой травме у детей раннего возраста

Полный текст

Введение

При ожоговой травме инфекционные осложнения по-прежнему являются важной причиной заболеваемости и смертности. Механизмы иммунной защиты начинают подавляться при ожоговых травмах при поражении общей площади поверхности тела от 25%. В научной литературе факт антиген-неспецифической активации Т-лимфоцитов активно обсуждается с позиций физиологической и иммунопатологической модуляции активности иммунного ответа [1, 2, 3]. На основании исследований in vitro маркеры активации Т-лимфоцитов были классифицированы как ранние (CD25), поздние (HLADR) в зависимости от их экспрессии во времени после активации [5]. В связи с этим, логичным является выяснение роли активированных Т-лимфоцитов в патогенезе ожоговой болезни, предполагается, что антигены HLA могут модулировать функцию лимфоцитов путем ингибирования через блокаду их рецепторов или путем индукции апоптоза, вызывая тем самым послеожоговый иммунодефицит [6].

Цель работы – изучить иммунологические показатели, оценить уровень экспрессии активационных маркеров CD25 и HLA-DR Т-лимфоцитами и их связь с β2-микроглобулином (β2-m) у детей раннего возраста с ожоговой болезнью.

Материалы и методы

Были обследованы 31 больной, лечившийся в ожоговом центре г. Тюмени, из них 19 мальчиков и 12 девочек в возрасте от 1 года до 3 лет, с площадью ожоговых ран II-IIIАБ степени от 7% до 70% поверхности тела. В 100% случаев ожог получен горячими жидкостями. Венозную кровь получали путем пункции периферической вены и собрали в 2 вакуумные пробирки с К₃ЭДТА в первые 24 часа на 7-е и 20-е сутки после получения травмы, что соответствовало токсической и септикотоксической стадиям ожоговой болезни. Контрольную группу составили 30 условно здоровых детей в возрасте от 1 года до 3 лет. Все исследования выполнены в соответствии с этическими нормами Хельсинкской декларации (2013). Общий анализ крови выполняли с использованием автоматического анализатора Mindray ВС 5500 (Китай). Подготовку образцов периферической крови и настройку проточного цитофлуориметра проводили с учетом рекомендаций Хайдукова с соавторами [4]. Анализ субпопуляционного состава проводили методом многоцветной проточной цитометрии на приборе Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США) с применением программного обеспечения CXP 2.0. Для окрашивания клеток цельной крови использовали моноклональные антитела CD4, CD8, CD3, CD25, HLA-DR (Beckman Coulter, США). Лизис эритроцитов проводили с использованием лизирующего раствора VersaLyze (Beckman Coulter, США). Обнаружение β2-m проводили с использованием набора для иммуноферментного анализа (ORGENTEC Diagnostika, США). Регистрацию результатов проводили на фотометре Multiskan (Labsistem, Финляндия).

Статистическую обработку проводили при помощи программного обеспечения Statistica 10.0 (StatSoft, США). Сравнительные исследования проводились с использованием t-критерия Стьюдента. Корреляции между количественными переменными были выполнены с использованием корреляции Пирсона.

Результаты и обсуждение

При анализе субпопуляционого состава Т-лимфоцитов у детей раннего возраста с ожоговой болезнью наблюдалось статистически значимое снижение относительного (40,7±7,0 и 66,8±6,3 соответственно (р < 0,05)) и абсолютного (5,8±1,3 и 19,5±1,2 соответственно (р < 0,001)) количества CD3⁺ клеток и соотношения CD4/ CD8 (р < 0,05) в первые 24 часа по сравнению с контрольной группой. Абсолютное и относительное количество CD3⁺ клеток увеличивалось к 20-му дню заболевания (58,5±5,1 и 66,8±6,3 соответственно) и абсолютного (12,3±3,9 и 19,5±1,2 соответственно (p < 0,05)), но все еще оставалось меньше контрольных цифр. Однако соотношение CD4/CD8, достоверно снижаясь в первые 24 часа, в последующем не отличалось от показателей контрольной группы на протяжении всего периода исследования.

Относительное количество CD25 позитивных Т-лимфоцитов после ожога увеличивалось только к 20-му дню заболевания (12,7±4,1 и 5,3±2,5соответственно (р < 0,001)). Однако коэкспрессия позднего активационного маркера HLA-DR на Т-лимфоцитах обнаруживалась уже через 24 часа после полученной травмы (7,3±1,7 и 3,1±1,2 в контрольной группе (р < 0,05)). Количество CD3⁺ HLA-DR⁺ лимфоцитов последовательно достоверно возрастало на 7-й (р < 0,01) и 20 (р < 0,001) день заболевания. Абсолютное количество CD25⁺T-клеток у пациентов с ожогами было ниже (р < 0,05), чем в контрольной группе в течение всего периода исследования, тогда как количество HLA-DR⁺T-лимфоцитов достоверно увеличилось на 20-й день после полученной травмы (р < 0,05) по сравнению с контролем. Средние значения β2-m в течение всей продолжительности исследования были значительно выше у пациентов с ожогами, чем у контрольной группы (2,8±1,3 мг/л; 2,9±0,7 мг/л; 3,3±1,2 мг/л и 0,7±0,1 мг/л соответственно (р < 0,001)), но без существенных различий между измерениями через 24 часа, 7 или 20 дней. Значительные отрицательные корреляции были обнаружены между β2-m и абсолютными значениям CD3⁺ клеток через 24 часа (r = -0,71) и через 7 дней (r = -0,63) после начала заболевания. Кроме того, была значительная положительная корреляция между показателями средних значений β2-m и значений экспрессии CD25 (r = 0,58) через 24 часа после ожога.

Иммунодефицит после ожоговой травмы может быть вызван значительным уменьшением абсолютного количества CD3⁺ и снижением иммунорегуляторного индекса CD4/CD8 на первой неделей после ожога, что объясняет и присоединение бактериальной коинфекции, и увеличение числа случаев сепсиса. Ожоговый токсин, характеризующийся как полимеризованный комплекс липидных белков клеточной мембраны, возможно, ингибирует пролиферацию нормальных Т-лимфоцитов в ответ на стимуляцию. Обширная деструкция тканей по механизму некроза может быть одной из причин повышения уровня β2m в сыворотке крови, что приводит к значительному уменьшению количества лимфоцитов. Увеличение β2-m в крови пациентов с ожоговой травмой может быть следствием активации клеток, участвующих в компенсаторных механизмах после ожоговой травмы, таких как повышение экспрессии HLA-DR на Т-лимфоцитах уже через 24 часа. Значительная положительная корреляция между показателями β2-m и экспрессией CD25 через 24 часа позволяет предположить, что синтез β2-m в первые дни заболевания вызывает гибель CD4⁺ лимфоцитов, что подтверждается достоверным снижением соотношения CD4/ CD8 в первые 24 часа. Значительная отрицательная корреляция между β2-m и абсолютными значениям CD3⁺ лимфоцитов через 24 часа и через 7 дней после полученной термической травмы говорит о возможности β2-m ингибировать функцию Т-клеток за счет блокады рецепторов или индукции апоптоза.

Выводы

Нарушение функций Т-лимфоцитов, регулирующих иммунный ответ, и их гибель может являться важным следствием системной иммуносупрессии при ожоговой болезни. Полученные данные свидетельствуют о постоянной активации Т-лимфоцитов через две недели после сильных ожогов, тогда как раннее выделение β2-m усиливает активацию лимфоцитов, увеличивая их восприимчивость к апоптозу, что свидетельствует об измененном иммунном ответе. Результаты исследования позволяют предположить, что поддержка иммунной системы гораздо важнее в первые часы после ожоговой травмы. Контроль за иммунологическим состоянием пациентов наряду со специфической антимикробной терапией, а также гемодинамическим и электролитным балансом позволит избежать бактериальной коинфекции с ожидаемым более быстрым заживлением ран или успешной трансплантацией кожи.

Об авторах

Елена Геннадьевна Костоломова

ФГБОУ ВО «Тюменский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ

Автор, ответственный за переписку.
Email: lenakost@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0237-5522

к.б.н., доцент кафедры микробиологии

Россия, 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54

Сергей Павлович Сахаров

ФГБОУ ВО «Тюменский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ

Email: sacharov09@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-1737-3906

к.м.н., доцент, заведующий кафедрой мобилизационной подготовки здравоохранения и медицины катастроф

Россия, 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54

Елизавета Дмитриевна Полянских

ФГБОУ ВО «Тюменский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ

Email: polyanskih.li@mail.ru

студент Института материнства и детства

Россия, 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54

Полина Борисовна Лозовая

ФГБОУ ВО «Тюменский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ

Email: p.lozovaya@yandex.ru

студент Института клинической медицины

Россия, 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54

Список литературы

Дополнительные файлы