Laboratory criteria for improving the diagnosis of autoimmune hepatitis and Wilson’s disease in children

Anastasia A. Zhuzhula; Жужула Анастасия Андреевна; Olga V. Kurbatova; Курбатова Ольга Владимировна; Svetlana V. Petrichuk; Петричук Светлана Валентиновна; Andrei P. Fisenko; Фисенко Андрей Петрович; Marina A. Snovskaya; Сновская Марина Андреевна; Goar B. Movsisyan; Мовсисян Гоар Борисовна; Alexander S. Potapov; Потапов Александр Сергеевич; Elena L. Semikina; Семикина Елена Леонидовна

doi:10.46235/1028-7221-17275-LCF

Лабораторные критерии для совершенствования диагностики аутоиммунного гепатита и болезни Вильсона у детей

Авторы: Жужула А.А.¹, Курбатова О.В.¹, Петричук С.В.¹, Фисенко А.П.¹, Сновская М.А.¹, Мовсисян Г.Б.¹, Потапов А.С.¹^,2, Семикина Е.Л.¹^,2
Учреждения:
1. ФГАУ «Национальный медицинский исследовательский центр здоровья детей» Министерства здравоохранения РФ
2. ФГАОУ «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения РФ (Сеченовский университет)
Выпуск: Том 28, № 4 (2025)
Страницы: 971-978
Раздел: КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
Дата подачи: 15.05.2025
Дата принятия к публикации: 22.06.2025
Дата публикации: 28.09.2025
URL: https://rusimmun.ru/jour/article/view/17275
DOI: https://doi.org/10.46235/1028-7221-17275-LCF
ID: 17275

Цитировать

Полный текст

Аннотация
Полный текст
Об авторах
Список литературы
Дополнительные файлы
Статистика

Аннотация

Определение лабораторных критериев для совершенствования дифференциальной диагностики детей с аутоиммунным гепатитом (АИГ) и болезнью Вильсона (БВ) является актуальным в педиатрии. Одним из критериев постановки диагноза АИГ является повышение титров антинуклеарного фактора (АНФ) в сыворотке крови. Описаны случаи, когда БВ может клинически протекать по типу АИГ с выявлением неспецифических аутоантител, что затрудняет дифференциальную диагностику. Цель исследования – выявить особенности определения антинуклеарного фактора на клеточной линии Hep-2 и специфических аутоантител с использованием тройного субстрата у детей с АИГ и БВ. Обследовано 62 ребенка с БВ и 28 детей с АИГ. Определяли антинуклеарный фактор (АНФ) на клеточной линии HEp-2 (клетки аденокарциномы гортани человека, ANA-HEp-2, AESKUSLIDES^®, Германия) и специфические аутоантитела с использованием тройного субстрата, полученного от грызунов, который включает образцы тканей почки, печени и желудка (LKS Mouse, separated, Германия) с помощью реакции непрямой флюоресценции с использованием автоматического анализатора HELIOS^® (Германия). Проведенный анализ выявил положительные результаты исследования АНФ у 15 детей из 62 (24%) с БВ. Положительные результаты АНФ получены у 26 детей из 28 (93%) с АИГ, достоверно чаще АНФ выявляется у детей с АИГ по сравнению с БВ. При исследовании специфических аутоантител с использованием тройного субстрата были выявлены положительные результаты у 34 детей с БВ (55%) и у 26 детей с АИГ (93%), достоверно чаще специфические аутоантитела на тройном субстрате выявляются у детей с АИГ (р < 0,001), чем у детей с БВ. При обследовании ребенка с подозрением на АИГ при выявлении гомогенного типа свечения на клеточной линии HEp-2 и при комбинации различных типов свечения на тройном субстрате нельзя исключать наличие у пациентов БВ.

Ключевые слова

дети, аутоиммунный гепатит, болезнь Вильсона, антинуклеарный фактор на клеточной линии Hep- 2, тройной субстрат LKS Mouse, аутоантитела к микросомам печени и почек 1-го типа, аутоантитела к гладким мышцам, аутоантитела к митохондриям, аутоантитела к париетальным клеткам желудка

Полный текст

Введение

Заболевания печени – группа наследственных и приобретенных заболеваний с разнообразной клинической картиной [9]. К одним из распространенных заболеваний печени у детей относят аутоиммунный гепатит (АИГ), болезнь Вильсона–Коновалова и другие.

Болезнь Вильсона (БВ) – тяжелое редкое наследственное заболевание, характеризующееся нарушением метаболизма меди и избыточным накоплением меди в различных органах и тканях, что приводит к сочетанному поражению преимущественно паренхиматозных органов (печень) и центральной нервной системы (в чечевиднообразных ядрах, в подкорковых ядрах и в коре головного мозга) [4, 9, 10]. Распространенность БВ колеблется от 1:30 000 до 1:100 000 человек [8, 10]. Чаще болезнь встречается у мужчин, чем у женщин [10].

БВ вызвана мутацией в гене АТР7В, который кодирует трансмембранную АТФазу, транспортирующую медь, из-за чего избыточно накапливается медь в гепатоцитах, разрушая их и повышая концентрацию свободной меди в сыворотке крови и увеличенной экскреции меди с мочой [4, 9, 10, 11].

БВ у детей отличается широким полиморфизмом клинической симптоматики: дебют заболевания начинается с поражением печени в 5-18 лет (40-45% случаев), в 30% случаев – с развитием неврологических и психических расстройств [4, 9]. БВ является трудно диагностируемым заболеванием печени из-за длительного латентного течения, особенно на начальных этапах заболевания [8]. Поэтому актуальным является изучение пациентов детского возраста с патологией печени неуточненной этиологии для подтверждения/исключения БВ [8].

Описаны случаи, когда БВ может клинически протекать по типу АИГ с выявлением неспецифических аутоантител, что затрудняет дифференциальную диагностику, при этом не исключает аутоиммунный компонент в патогенезе БВ [4]. Описаны случаи обнаружения антител к микросомам печени и почек 1-го типа (LKM- 1) у пациентов с БВ после эпизодов отторжения трансплантатов печени [7]. Тем не менее частота выявления наличия специфических аутоантител при БВ не изучена, поэтому следует проявлять настороженность при дифференциальной диагностике печеночной формы БВ и АИГ [13].

АИГ – тяжелое хроническое аутоиммунное воспалительное заболевание печени неизвестной этиологии, характеризующееся продукцией аутоантител к собственным гепатоцитам [1, 3, 7, 14]. АИГ является редким заболеванием, его распространенность в Европе и США колеблется 3-17 случаев на 100 000 человек [3]. В России в структуре хронических гепатитов у детей доля АИГ составляет 2%, лица женского пола болеют чаще [1].

В развитии АИГ одной из основных причин является нарушение иммунотолерантности организма у генетически предрасположенных лиц [1, 3]. Нарушения в иммунной системе могут проявляться дефектом функции регуляторных Т-клеток и наличием аутоантител в крови [1, 3]. Аутоантитела фиксируются на мембране гепатоцитов, способствуя их разрушению собственными лимфоцитами [1, 3].

Одним из критериев постановки диагноза АИГ является повышение титров антинуклеарного фактора (АНФ) в сыворотке крови [1]. У детей в зависимости от выявленных аутоантител выделяют 2 типа АИГ: АИГ 1-го типа, при котором выявляются специфические аутоантитела к гладкой мускулатуре (ASMA) и/или АНФ и АИГ 2-го типа, при котором выявляются специфические антитела к микросомам печени и почек 1-го типа (LKM-1), и/или антитела к цитозольному антигену печени 1-го типа (LC-1) [1, 3, 7]. АИГ 2-го типа составляет 3-4% от всех случаев АИГ [1, 3]. Антитела к печеночному растворимому антигену (SLA) – аутоантитела, которые специфичны и обладают высокой диагностической значимостью при любом типе АИГ [1].

Определение лабораторных критериев для совершенствования дифференциальной диагностики детей с АИГ и БВ является актуальным в педиатрии.

Цель исследования – выявить особенности определения АНФ на клеточной линии Hep-2 и специфических аутоантител с использованием тройного субстрата у детей с АИГ и БВ.

Материалы и методы

В исследование было включено 62 ребенка с БВ и 28 детей с АИГ, находившиеся на обследовании в гастроэнтерологическом отделении в ФГАУ «НМИЦ здоровья детей» Минздрава России.

Всем детям определяли АНФ на клеточной линии HEp-2 (клетки аденокарциномы гортани человека) с помощью реакции непрямой флюоресценции (РНИФ, AESKUSLIDES^® ANA-HEp-2, Германия) с использованием автоматического анализатора HELIOS^® (AESKU.GROUP, Германия) [2]. Данное исследование является «золотым стандартом» лабораторной диагностики выявления аутоантител в сыворотке крови [2, 3, 4]. Результат анализа представляет собой информацию о конечной титре и типе свечения ядра и цитоплазмы клеток HEp-2 [3]. Отрицательными значениями считали титры АНФ < 1/160, при титре 1/160 ответ считали низкопозитивным, 1/320-1/640 – умеренно позитивным, 1/1280 и выше – высокопозитивным [3]. Любой из выявленных типов свечений АНФ мы принимали за положительный результат [3].

Всем детям определяли специфические аутоантитела с использованием тройного субстрата, полученного от грызунов, который включает образцы тканей почки, печени и желудка (AESKUSLIDES^® LKS Mouse, separated, Германия). Метод основан на РНИФ и позволяет выявить аутоантитела к микросомам печени и почек 1-го типа (LKM-1), к гладким мышцам (ASMA), к митохондриям (AMA), к париетальным клеткам желудка (PCA) [3]. Примеры типов свечения для выявление аутоантител с использованием тройного субстрата представлены на рисунке 1 (см. 3-ю стр. обложки).

Рисунок 1. А1, 2 – аутоантитела к гладким мышцам (ASMA), Б – к митохондриям (AMA), Б1 – к париетальным клеткам желудка (PCA), В – аутоантитела к микросомам печени и почек 1-го типа (LKM-1)

Figure 1. A1, 2, autoantibodies to smooth muscles (ASMA); B, to mitochondria (AMA); B1, to parietal cells of the stomach (PCA); C, autoantibodies to liver and kidney microsomes type 1 (LKM-1)

Статистическая обработка проводилась в программе Microsoft Exсel 2010 с расчетом ошибки среднего для доли варианта и достоверности по t-критерию.

Результаты и обсуждение

Проведенный анализ выявил положительные результаты исследования АНФ у 15 детей из 62 (24%) с БВ. Из них у 10 детей был низкопозитивный титр (1/160 – 16%), у 4 детей – умеренно позитивный титр (1/320-640 – 6%), у 1 ребенка – высокопозитивный титр (1/2560 – 2%). Положительные результаты АНФ получены у 26 детей из 28 (93%) с АИГ. Из них у 5 детей был низкопозитивный титр (18%), у 10 детей – умеренно позитивный титр (36%), у 11 детей – высокопозитивный титр (1/1280-5120 – 39%). Таким образом, получено, что достоверно чаще АНФ выявляется у детей с АИГ по сравнению с БВ (р < 0,001; табл. 1).

Таблица 1. Сравнительная характеристика типов свечения у детей при БВ и АИГ

Table 1. Comparative characteristics of the types of luminescence in children with WD and AIH

Типы свечения Types of glow	БВ (n, %) WD (n, %)	АИГ (n, %) AIH (n, %)	Достоверные различия, р Significant difference, р
АНФ на клеточной линии HEp-2 ANF on the HEp-2 cell line
Гомогенный (h) Homogeneous	5; 33% ±5,9	3; 12% ±6,1	р < 0,02
Гранулярный (sp) Speckled	4; 27% ±5,6	3; 12% ±6,1	–
Цитоплазматический (cytopl) Cytoplasmic	1; 6,5% ±3,1	–	–
Центромерный (centr) Centromere	1; 6,5% ±3,1	–	–
Смешанный Mixed: – h + cytopl – h + sp + cytopl – nucl + cytopl – sp + cytopl – h + sp	4; 27% ±5,6 2; 13% ±4,3 1; 7% ±3,2 1; 7% ±3,2 – –	20; 76% ±8 16; 62% ±9,2 1; 3,5% ±3,5 – 2; 7% ±4,8 1; 3,5% ±3,5	р < 0,001
Всего Total	15; 24% ±5,4	26; 93% ±4,8	р < 0,001
Определение специфических аутоантител на тройном субстрате Determination of specific autoantibodies on a triple substrate
ASMA	6; 18% ±4,9	14; 54% ±9,4	р < 0,001
AMA	14; 41% ±6,2	6; 23% ±8	–
LKM-1	–	3; 12% ±6,1	–
PCA	1; 3% ±2,2	1; 4% ±3,7	–
Смешанный Mixed: – AMA + ASMA – AMA + PCA – ASMA + PCA – LKM-1 + PCA – ASMA + LKM-1	13; 38% ±6,1 9; 26% ±5,6 2; 6% ±3 1; 3% ±2,2 1; 3% ±2,2 –	2; 7% ±4,8 – – – – 2; 7% ±4,8	р < 0,001
Всего Total	34; 55% ±6,32	26; 93% ±4,8	р < 0,001

Результаты данного исследования свидетельствуют о том, что титры свечения АНФ выше при АИГ, чем при БВ, согласуются с данными литературы [3, 4]. Сообщения о выявлении аутоантител при БВ у детей, представленые клиническими случаями, подтверждаются нашими данными, полученными на большой выборке [4, 9].

При анализе типов свечения АНФ у детей с БВ чаще встречались: гомогенный (33%), гранулярный (27%) и комбинации типов свечения, преимущественно гомогенного и цитоплазматического (13%) (табл. 1). У детей с АИГ чаще встречались комбинации типов свечения, преимущественно гомогенного и цитоплазматического (62%), тогда как гомогенный и гранулярный типы свечения выявлялись в 12% случаев каждый.

Сравнительный анализ типов свечения АНФ у детей с БВ и АИГ показал, что при БВ достоверно чаще встречаются гомогенный (р < 0,02) тип свечения. Однако различные комбинации типов свечения достоверно чаще встречаются при АИГ (р < 0,001).

Сопоставление полученных данных о преобладающих типах свечения АНФ у детей при БВ частично согласуется с данными литературы о выявлении преимущественно гранулярного типа свечения, а также гомогенного и комбинации гомогенного и цитоплазматического типов свечения [4].

При исследовании специфических аутоантител с использованием тройного субстрата были выявлены положительные результаты у 34 детей с БВ (55%) и у 26 детей с АИГ (93%). У детей с БВ чаще выявлялись антитела к AMA в 41%, к ASMA в 18%, а также к комбинациям типам свечения, преимущественно к AMA и ASMA – 26%. У детей с АИГ чаще выявлялись антитела к ASMA – 54%, к AMA – 23%, к LKM-1 – 12%. Анализ данных показал, что достоверно чаще специфические аутоантитела на тройном субстрате выявляются у детей с АИГ (р < 0,001), чем у детей с БВ.

Сравнительный анализ типов свечения специфических аутоантител на тройном субстрате у детей с БВ и АИГ показал, что при БВ достоверно чаще выявляются комбинации разных типов свечения специфических аутоантител (р < 0,001), а при АИГ достоверно чаще встречаются антитела к ASMA (р < 0,001).

Аутоантитела у детей с БВ выявляются в 55% случаев, хотя для них характерны менее низкопозитивные титры свечения, как на клеточной линии HEp-2, так и на тройном субстрате. Аутоантитела у детей с БВ чаще выявляются на тройном субстрате, чем на линии HEp-2, в связи с тем, что учитываются более низкие титры свечения образца, включая титры 1/20.

Полученные результаты выявления аутоантител у детей с АИГ и БВ согласуются с данными литературы о повышении содержания провоспалительных Тh17-лимфоцитов, что характерно для аутоиммунных заболеваний [4, 5].

В настоящий момент продолжается поиск дополнительных специфических маркеров для лабораторной диагностики АИГ и других заболеваний печени. Потенциальным маркером может являться полиреактивный IgG [12].

Заключение

Таким образом, при обследовании ребенка с подозрением на АИГ при выявлении гомогенного типа свечения на клеточной линии HEp-2 и при комбинации различных типов свечения на тройном субстрате нельзя исключать наличие у пациентов БВ.