Том 25, № 3 (2022)

Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия при гипоксии, повреждении тканей, активации воспаления и коагуляции ассоциирована с экспрессией мембранных молекул ICAM-1 клетками крови и тканей. Одновременно адгезионные рецепторы тромбоцитов обусловливают их адгезию к эндотелию и к рекрутированным лимфоцитам. Роль тромбоцитов в патогенезе ишемических сердечно-сосудистых заболеваний также состоит в их способности модулировать как реакции гемостаза, так и воспалительные реакции, что сопровождается секрецией воспалительных медиаторов и факторов, способствующих рекрутированию лейкоцитов в места повреждения тканей. Чувствительным маркером повреждения тканей и тканевой ишемии является активность креатинкиназы. Цель исследования: изучить влияние противовоспалительной терапии дексаметазоном на активность воспаления и адгезивные свойства лимфоцитов, количество тромбоцитов в крови больных с острой ишемией нижних конечностей (ОИНК) и эффективность лечения больных.

Для изучения влияния противовоспалительной терапии сформирована группа из 32 пациентов с терапией дексаметазоном; контрольная группа представлена 71 пациентом с базисной терапией, группу сравнения составили 15 волонтеров. После операции реваскуляризации все больные получали дезагрегантную и антикоагулянтую терапию. Инфузии дексаметазона проводили курсом от 4 до 6 дней после реконструктивной операции. У всех пациентов определяли содержание С-реактивного белка в крови, активность креатинкиназы, содержание тромбоцитов и крупных тромбоцитов. С помощью иммуноцитохимического метода подсчитывали число лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии ICAM-1 (CD54⁺). Исследования выполняли до операции и через 1, 3, 5, 7, 10 суток после операции.

При обострении ишемии и повреждении эндотелия, накоплении продуктов цитолиза усиливается экспрессия молекул адгезии как на эндотелиоцитах, так и на клетках-эффекторах воспаления – лейкоцитах и тромбоцитах. Молекулы адгезии проводят активационный сигнал внутрь клетки, что способствует адгезии лейкоцитов и тромбоцитов к эндотелию, лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, образованию пристеночного тромба и возможной окклюзии поврежденных сосудов. Усиление экспрессии молекул адгезии связано с активацией метаболизма, воспаления, коагуляции и оксидативного стресса, стимулирует все ростки кроветворения, в том числе тромбоцитарный. Уровень вовлечения клеточных реакций в патогенез заболевания влияет на эффективность и продолжительность лечения, риск рецидивов тромбоза и летального исхода. Противовоспалительная терапия с дексаметазоном способствовала более ранней ремиссии, снижению доли инфекционных и тромботических осложнений, частоты летальных исходов, сокращению сроков лечения.

Воспаление, адгезивность клеток-эффекторов и тромбоз являются важными факторами патогенеза острой ишемии нижних конечностей. Дополнительная противовоспалительная терапия дексаметазоном способствует более ранней ремиссии, снижению доли инфекционных и тромботических осложнений, частоты летальных исходов, сокращению сроков лечения.

Аберрантный иммунный ответ во время инфекции SARS-CoV-2, определяет клиническую картину, тяжесть заболевания и прогрессирование COVID-19. Цель исследования – дать оценку состояния SARS-CoV-2 специфического Т-клеточного ответа при вирусном заболевании COVID-19 и вакцинации Гам-КОВИД-Вак.

Представлена комплексная оценка иммунного ответа со сравнительной характеристикой диагностической информативности определения антител к RBD-домену Spike-белка SARS-CoV-2 и специфических эффекторных CD4⁺ и CD8⁺Т-лимфоцитов к антигенам SARS-CoV-2 у невакцинированных, вакцинированных препаратом Гам-КОВИД-Вак здоровых лиц и пациентов, перенесших инфекцию COVID-19.

Установлено, что антитела IgG к RBD-домену спайк-белка SARS-CoV-2 вырабатываются с частотой от 73% до 92% случаев у вакцинированных и переболевших COVID-19. Количество эффекторных CD4⁺ и CD8⁺Т-лимфоцитов, отвечающих на стимуляцию антигенами SARS-CoV-2 продукцией цитокина IFNã, варьировало в зависимости от внесенного антигена, и имело тенденцию к более высоким значениям у вакцинированных лиц. У не вакцинированных и не болевших COVID-19 здоровых лиц, контактировавших с инфицированными пациентами обнаружен Т-клеточный ответ к нуклеопротеинам коронавируса SARS-CoV-2.

Для адекватной оценки противовирусного и поствакцинального иммунного ответа к COVID-19 необходимо исследование не только гуморального звена по наличию антител, но и определение функционально активных специфических Т-лимфоцитов к антигенам белков SARS-CoV-2.

Пуринергическая система играет важную роль в регуляции функционирования иммунной системы. Внеклеточный АТФ относится к неинфекционным сигналам опасности (DAMP), обладает провоспалительным эффектом и модулирует иммунный ответ. Конечный продукт расщепления АТФ – аденозин играет важную роль в ограничении воспалительного ответа. Активность экзонуклеотидаз CD39 и CD73 обеспечивает баланс АТФ и аденозина в очаге воспаления. Экспрессия CD39 и CD73 характеризуется большой вариабельностью. По данным литературы, исследования проводились либо на трансгенных мышах, либо с участием взрослых здоровых доноров. Количество клеток, экспрессирующих CD39 и CD73, в популяциях Т-лимфоцитов у здоровых детей не проводилось. Цель – изучить особенности экспрессии CD39 и CD73 в различных субпопуляциях CD4⁺ лимфоцитов у условно здоровых детей разного возраста.

Обследовано 45 условно здоровых детей в возрасте от 3,7 до 17,5 (Me (Q_0,25-Q_0,75) – 12,4 (10-16,1)) лет. Оценку количества CD4⁺ клеток, количество регуляторных Т-лимфоцитов (Treg – CD4⁺CD25^highCD127^low), активированных Т-хелперов (Tact – CD4⁺CD25⁺CD127^high) и Th17-лимфоцитов (CD4⁺CD161⁺CD3⁺), экспрессирующих СD39 и CD73, проводили методом проточной цитометрии.

Количество клеток, экспрессирующих CD39 и CD73, зависит от конкретной субпопуляции. Наибольшее количество CD39⁺ клеток наблюдалось в Treg, а наибольшее количество CD73⁺ клеток – в Tact. В Th17-лимфоцитах достоверной разницы между количеством клеток, экспрессирующих CD39 и CD73, выявлено не было. Показано увеличение относительного количества Th17-клеток, экспрессирующих СD73, и снижение относительного количества Tact, экспрессирующих CD39 с возрастом. Отмечено, что относительное и абсолютное количество СD39⁺Th17-клеток, относящихся к супрессорной субпопуляции, с возрастом снижалось, так же как и общее количество Treg клеток. Для Treg, СD39⁺Treg, СD73⁺Treg, СD39⁺Th17 выявлено снижение абсолютных показателей с возрастом, что согласуется с возрастной динамикой снижения абсолютного количества лимфоцитов и CD4⁺ клеток.

Полученные данные об особенностях экспрессии эктонуклеотидаз в функционально различных популяциях CD4⁺ лимфоцитов важно учитывать при исследовании детей разных возрастных групп с иммуноопосредованными заболеваниями.

Сахарный диабет (СД) – распространенное хроническое неинфекционное заболевание, является наиболее значимым сопутствующим заболеванием при вирусной инфекции SARS-CoV-2. Доля больных СД среди заболевших COVID-19 составляет до 25,0% в Российской Федерации. СД утяжеляет течение COVID-19, что характеризуется большей выраженностью и стойкостью легочных повреждений, увеличением потребности больных в иммуносупрессивной, глюкокортикоидной и комбинированной противовирусной терапии, удлинением периода реабилитационных мероприятий. Активно изучаются особенности патогенеза тяжелого течения вирусной инфекции SARS-CoV-2 при СД. Определены негативное влияние гипергликемии на течение инфекции; прямое цитотоксическое и опосредованное повреждение панкреатических β-клеток, с дальнейшей активацией провоспалительных механизмов; кумуляция и прогрессирование характерного для СД и COVID-19 генерализованного воспаления, включая нарушения продукции цитокинов; влияние вируса SARS-CoV-2 на ренин-ангиотензин-альдостероновую систему, с угнетением секреции инсулина и усилением инсулинорезистентности. Хроническое воспаление и нарушение иммунного ответа могут быть одними из основных механизмов ассоциации между СД 2-го типа и COVID-19. Важно определить системные воспалительные нарушения у больных СД 2-го типа, которые могут ассоциироваться с большей тяжестью заболевания и иметь негативное прогностическое значение. Цель работы – исследовать концентрацию некоторых цитокинов в сыворотке у больных СД 2-го типа, не инфицированных SARS-CoV-2.

В исследование включено 20 пациентов с СД 2-го типа, контрольная группа – 11 клинически здоровых добровольцев. Концентрацию в сыворотке 13 цитокинов оценивали при помощи мультиплексного анализа на иммуноанализаторе MAGPIX-100 с использованием набора для мультиплексного анализа Merck (Германия) в соответствии с инструкцией фирмы.

Установлено повышение концентрации в сыворотке у больных СД 2-го типа по сравнению с контрольной группой ключевых провоспалительных цитокинов: CX3CL1, TNFα, IFNγ, IL-8, IL-17А, MIP-1α и MIP-1β. Выявлено снижение концентрации в сыворотке IL-4. Уровень в сыворотке у больных СД 2-го типа иммунорегуляторных цитокинов изменяется разнонаправленно: снижается IL-5, повышается IL-12р70, IL-17, не изменяется концентрация IL-2, IL-13.

Комплексный анализ концентрации цитокинов в сыворотке позволит повысить клиническую значимость оценки концентрации цитокинов в сыворотке в качестве прогностических и диагностических маркеров, терапевтической мишени при СД 2-го типа, в том числе и при инфицировании SARS-CoV-2.

На модели острого тотального рентгеновского облучения белых беспородных мышей-самцов изучено антимутагенное действие растительного тритерпеноида милиацина для характеристики его защитных свойств при радиационной иммуносупрессии. Использованы различные дозы облучения (0,5; 1,0; 2,0; 4,0 Гр) для опытных (получавших милиацин) и контрольных (получавших растворитель для милиацина) животных. Милиацин вводился трехкратно, внутрибрюшинно в разовой дозе 4,0 мг/кг с 24-часовыми интервалами между введениями, завершавшимися за 1 сутки до облучения. Контрольные мыши получали растворитель по аналогичной схеме. В качестве тест-системы использовались миелокариоциты, анализ которых проводился через 24 часа после облучения. Милиацин оказывал определенное защитное действие в виде ограничения постлучевой миелоабляции, снижения количества аберрантных клеток и общего числа аберраций. Протективный эффект тритерпеноидa находился в обратной зависимости от дозы облучения и был наиболее выражен при 0,5 Гр. Более высокие значения хроматидных аберраций при дозах облучения: 1,0 и 2,0 Гр у животных опытной группы по сравнению с контрольной группой мышей могли быть обусловлены антиапоптотическим влиянием тритерпеноида, обеспечивающим большую выживаемость мутагенных клеток с грубыми повреждениями их генетического аппарата. Реализация милиацином защитного эффекта через 24 часа после лучевого воздействия свидетельствует о его влиянии на первичную радиационно-химическую стадию радиационного поражения. Предполагается, что механизм защитного действия тритерпеноида опосредован его ранее показанной антиоксидантной активностью, обусловленной способностью стабилизировать мембраны и нормализовывать экспрессию генов ферментов антиоксидантной защиты. Таким образом, проявление антимутагенной активности милиацина при воздействии облучения является важной характеристикой его иммунопротекторного эффекта при радиационной иммуносупрессии. По способности ограничивать мутагенный эффект, милиацин может быть отнесен к слабым противолучевым антимутагенам с эффективностью защиты 20-40% в диапазоне доз 0,5-1,0 Гр.

Постоянный антигенный дрейф циркулирующих вирусов гриппа приводит к тому, что сезонные вакцины против гриппа становятся неэффективными и возникает необходимость ежегодного перевыпуска таких вакцин. В связи с этим разработка универсальной гриппозной вакцины приобретает особую актуальность. Перспективным направлением исследований в данной области является создание иммуногенов, состоящих из консервативных фрагментов белков различных штаммов вируса гриппа.

Целью данной работы была оценка иммуногенности ДНК-вакцин и мРНК-вакцин, кодирующих искусственные антигены, состоящие из консервативных фрагментов ствола гемагглютинина и консервативного белка М2. Ранее нами были получены ДНК-вакцинные конструкции, кодирующие искусственные иммуногены AgH1, AgH3 и AgM2, которые содержат консервативные фрагменты стебля гемагглютинина двух подтипов гриппа A – H1N1 и H3N2 и консервативный белок M2. Эти ДНК-вакцины послужили матрицей для синтеза мРНК-вакцин.

Для оценки иммуногенности полученных ДНК- и мРНК-вакцин проводили иммунизацию мышей линии BALB/c путем внутримышечного введения соответствующих препаратов. Оценку гуморального иммунного ответа проводили с помощью ИФА, с использованием в качестве антигенов вирусы гриппа A/Aichi/2/68(H3N2), A/California/07/2009 и вакцину УЛЬТРИКС, содержащую очищенные белки вируса гриппа H1N1 и H3N2. Оценку Т-клеточного иммунного ответа проводили с использованием двух методов: метод внутриклеточного окрашивания цитокинов (ICS) и ELISpot. ICS проводили по определению CD8⁺ и CD4⁺Т-лимфоцитов, продуцирующих IFNγ. ELISpot проводили с использованием набора mouse IFNγ ELISpot BD. Для стимуляции клеток использовали смесь пептидов, входящих в состав целевых антигенов. Полученные результаты показали, что спроектированные ДНК-вакцинные конструкции вызывали у иммунизированных животных вирус-специфический гуморальный и клеточный ответы. Внутримышечное введение животным голых мРНК-вакцинных конструкций индуцировало слабый гуморальный иммунный ответ, что свидетельствует о необходимости проведения дальнейших работ по улучшению способов доставки.

Интерес к исследованию функции орексин-содержащих нейронов обусловлен сравнительно недавним их открытием и перспективой применения орексинов для лечения заболеваний различной природы.

Изучение их участия в регуляции клеток микроглии имеет небольшую историю и представляет особый интерес, поскольку возможность воздействия на функциональную активность клеток иммунной системы мозга имеет первостепенное значение для терапии различных форм патологии ЦНС.

Перспективные пути поиска и результаты исследования терапевтических эффектов орексинов при воспалительных, аутоиммунных заболеваниях и опухолях.

Существуют литературные данные, демонстрирующие, что орексины могут оказывать терапевтические эффекты при различных формах патологии, вызванных нарушением нейроиммунных взаимодействий. Доказано участие этой нейромедиаторной системы в патогенезе развития нарколепсии, ожирения, рассеянного склероза, болезни Альцгеймера, заболеваний кишечника, септического шока и рака, что обусловлено участием орексинов в регуляции функций различных компонентов иммунной систем, в том числе и клеток микроглии. Хотя характер этого участия не полностью ясен, полученные в последние годы экспериментальные данные являются основой для понимания механизмов действия орексинов на функциональную активность клеток иммунной системы мозга.

Комплекс проведенных ранее исследований позволил установить эффекты действия орексина на морфофункиональные особенности микроглиоцитов при активации ЛПС, что представляется перспективным для разработки новых подходов к терапии инфекционных, воспалительных, нейродегенеративных и аутоиммунных процессов, происходящих в центральной нервной системе. Целью данного исследования является определение эффектов действия нейромедиатора орексина А на функциональные особенности клеток микроглии, активированных ЛПС (фенотип М1), показателями которой являются изменения площади их тела и длины отростков, а также плотность распределения этих клеток.

Исследовано изменение количества клеток микроглии после интраперитониального введения липополисахарида. Показано, что результате воздействия ЛПС происходит возрастание степени активации этих клеток: происходит увеличение количества микроглиальных клеток в соматосенсорной зоне коры головного мозга.

Комплекс проведенных исследований позволил показать, что интрацеребровентрикулярное введение орексина-А животным после предварительной инъекции ЛПС не вызывает изменений процессов, инициированных ЛПС, анализ не позволил выявить изменений длины отростков микроглиальных клеток, локализованных в соматосенсорной, моторной зонах коры и полосатого тела. В будущем будет произведен дальнейший анализ других показателей активации клеток микроглии.

В 1936 г. канадским патологом Гансом Селье в экспериментах с адреналэктомией было доказано участие гормонов коры надпочечников в развитии акцидентальной инволюции тимуса при стрессе. К 1970-м гг. среди исследователей доминировало представление о лизисе лимфоидных клеток глюкокортикоидами как основном механизме этих изменений. Позже рассматривалась и роль усиления миграции из тимуса Т-лимфоцитов, а также снижения миграции в него костномозговых предшественников, а с 1990-х гг. – индуцированного глюкокортикоидами апоптоза. Для выяснения вклада глюкокортикоидов в те или иные процессы в условиях целостного организма удобным инструментом в экспериментальной эндокринологии и фармакологии является введение самцам крыс или мышей антагониста глюкокортикоидных и прогестероновых рецепторов мифепристона, известного также как RU-38486 или RU-486. Цель работы – исследование влияния мифепристона при остром стрессе на апоптоз тимоцитов мышей. Экспериментальные исследования выполнены на самцах белых неинбредных мышей. Мифепристон вводили однократно подкожно за 30 мин до начала иммобилизации в дозе 50 мг/кг массы тела в растворе, приготовленном на стерильном официнальном оливковом масле. Контрольным мышам и животным группы сравнения вводили однократно подкожно эквивалентное количество растворителя препарата. Для экспериментального моделирования острого стресса использовали классическую модель 24-часового иммобилизационного стресса в положении на спине в пластиковом рестрейнере. Апоптоз тимоцитов оценивали с помощью проточной лазерной цитометрии с набором реактивов BD PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I (BD Pharmingen™) методом, адаптированным для проточного лазерного цитометра Guava EasyCyte корпорации Millipore. Установлено, что острый стресс, вызванный 24-часовой иммобилизацией мышей, приводит к увеличению в тимусе общего относительного числа 7-AAD-позитивных клеток, а также доли клеток, окрашивающиеся 7-AAD, но не аннексином V-PE (ядерный дебрис, аннексин V(-), 7-AAD (+)). Введение мифепристона нивелирует эти изменения, что подтверждает участие глюкокортикоидов в увеличении числа тимоцитов в состоянии некроза. Число тимоцитов, находящихся в состоянии раннего апоптоза (т. е. аннексин V-PE-позитивных и 7-AAD-негативных), так же как и общее относительное число клеток, несущих фосфатидилсерин (аннексин V-PE-позитивные тимоциты) при остром стрессе и стрессе на фоне введения мифепристона, не отличаются от контроля.