Том 26, № 3 (2023)

Травма передней крестообразной связки (ПКС) коленного сустава сопровождается развитием артрогенного мышечного торможения, вследствие дизрегулирующих афферентных влияний на возбудимость спинномозговых и супраспинальных путей. Цель – изучение показателей электромиографии, уровней миокинов на фоне миостимуляции при травматическом повреждении ПКС.

Принимали участие 28 мужчин-спортсменов с травматическим повреждением ПКС. Все пациенты при поступлении проходили электромиографическое исследование травмированной конечности на аппарате ЭМГ/ВП Viking Quest (Nicolet, США). Части пациентов за 10 дней до начала оперативного лечения, проводили пассивную электромиостимуляцию (ЭМС) четырехглавой мышцы бедра на аппарате INTELECT^® Advanced (Chattanooga (DJO), США). Далее всем пациентам проводили артропластику на артроскопе Karl Storz (Германия). В послеоперационный период на протяжении 2-недельной иммобилизации все пациенты получали ЭМС, после снятия ортеза пациенты переходили к режиму активных тренировок. Уровни цитокина IL-6 исследовали с помощью набора реагентов для ИФА (АО «Вектор-Бест», Новосибирск), трансформирующего фактора роста – β (Cloud-Clone Corp., Китай). Статистическая обработка материала проводилась при помощи пакета Statistica. vers.10.0 (StatSoft Inc., США).

Наиболее высокая средняя амплитуда (мкВ) при проведении электромиографии регистрировалась у здоровых лиц, у пациентов основной группы фиксировались значимо меньшие величины средней амплитуды. После проведения 10-дневной ЭМС отмечено значимое увеличение показателя до значений здоровых лиц. В динамике после оперативного вмешательства показатели ЭМГ без ЭМС оставались на прежнем низком уровне, значения, регистрируемые на фоне ЭМС, были сравнимы со здоровыми лицами, что отражает более быстрое и качественное восстановление мышц после травмы. Уровни цитокинов – миокинов IL-6 и TGF-β1 значимо превысили исходные уровни на фоне ЭМС. Биологическое значение повышения уровня IL-6 при мышечной нагрузке заключается в активации на уровне скелетной мускулатуры АМФ-киназы и/или фосфатидилинозитол-3-киназы и более эффективном обеспечении мышц энергетическим субстратом. TGF-β1 способствует пролиферации фибробластов, увеличивает содержание коллагена.

Проведение пассивной и активной ЭМС приводит к улучшению показателей электромиографии, повышению концентрации в крови миокинов – IL-6 и TGF-β1, что способствует улучшению энергетического баланса, повышению противовоспалительного и репаративного потенциала поврежденных тканей.

Зарегистрированный в России риамиловир (метилтионитрооксодигидротриазолотриазинид натрия, торговое название – Триазавирин) является синтетическим аналогом гуанина и препаратом прямого противовирусного действия. В настоящее время имеются противоречивые данные относительно использования риамиловира в качестве профилактического и лечебного средства при коронавирусных инфекциях. Целью настоящего исследования стал анализ некоторых результатов применения риамиловира как в целях профилактики инфицирования вирусом SARS-CoV-2, так и для лечения COVID-19 в период первой волны пандемии новой коронавирусной инфекции.

Анализ был сделан на основе опроса 62 медицинских работников, одного из медицинских учреждений г. Екатеринбурга, переболевших COVID-19, подразделенных на 4 группы: 1) не получавших риамиловир (контроль), 2) получавших риамиловир только в качестве профилактики заболевания, 3) получавших препарат в качестве лечебного средства, 4) получавших риамиловир до и во время заболевания.

Полученные данные по использованию риамиловира в целях профилактики заражения вирусом SARS-CoV-2 показало, что следствием стало: увеличение длительности госпитализации, рост таких осложнений COVID-19, как: лихорадка, одышка, легочная недостаточность, пневмония легких, повышенная частота неврологических расстройств, о чем не сообщалось ранее. Перенесенное заболевание как тяжелое при профилактическом приеме риамиловира было оценено значительно чаще, а спустя 2 месяца после болезни реабилитационный период был незаконченным. У всех, кто принимал риамиловир для профилактики НКИ, в дальнейшем появлялась клиника мышечных и суставных болей. Использование риамиловира с лечебной целью позволило избежать развития легочной недостаточности, тяжелого течения инфекционного заболевания, восстановить состояние здоровья в полном объеме.

В исследовании не выявлено полезности применения риамиловира для профилактики осложнений COVID-19 при приеме препарата до инфицирования вирусом SARS-CoV-2. Однако применение риамиловира с лечебной целью позволяет избежать тяжелого течения инфекционного заболевания и в 4 раза снизить риск появления болей в мышцах, суставах, позвоночнике после перенесенного COVID-19.

Изменения В-клеточного ответа иммунной системы, описанные у больных COVID-19, являются недостаточно изученными у постковидных пациентов несмотря на то, что В-клетки играют важную роль в формировании постинфекционного иммунитета.

Целью исследования явилось изучение особенностей В-клеточного ответа иммунной системы у постковидных пациентов. С этой целью были исследованы, помимо стандартной иммунограммы, следующие фенотипы: В-клетки общие (CD45⁺, CD3^-, CD19⁺), В клетки памяти общие (CD45⁺, CD3^-, CD19⁺, CD27⁺), В не клетки памяти общие (CD45⁺, CD3^-, CD19⁺, CD5⁺), В1-клетки памяти (CD45⁺, CD3^-, CD19⁺, CD5⁺, CD27⁺), В2-клетки памяти (CD45⁺, CD3^-, CD19⁺, CD5^-, CD27⁺), В1 не клетки памяти (CD45⁺, CD3^-, CD19⁺, CD5⁺, CD27^-), В2 не клетки памяти (CD45⁺, CD3^-, CD19⁺, CD5^-, CD27^-). Проведенное исследование у пациентов с постковидным синдромом с нарушением уровня В1-клеток памяти выявило резкое повышение данных клеток у 15,3% обследованных. Это сопровождалось увеличением общих В-клеток памяти и В1-общих лимфоцитов (преимущественно за счет В1-клеток памяти), повышенным уровнем общих Т-лимфоцитов и общего IgA. В то же время у данной группы пациентов отмечалось резкое снижение плазмоцитов и В2-лимофцитов (как клеток памяти, так и не клеток памяти), натуральных киллеров, Т-регуляторных клеток, Т-клеток ранней активации (CD25⁺) и С3а-фрагмента комплемента. Эти данные говорят о том, что у пациентов формируется особый тип нарушения иммунной системы, а именно дезорганизация переключения В-лимфоцитов с синтеза IgM на IgG и IgA, что приводит к резкому снижению В2-субпопуляций лимфоцитов. Возможно, такое нарушение связано с резким снижением Т-регуляторных лимфоцитов и Т-лимфоцитов, отвечающих за регуляцию формирования дифференцировки В-лимфоцитов с клеток, несущих IgM-рецепторы на клетки, синтезирующие IgG и IgA (Т-лимфоцитов ранней активации, несущих маркер к IL-2). Кроме того, у таких больных также наблюдается снижение параметров гемоглобина и тромбоцитов, что может в свою очередь способствовать у них проявлениям гипоксии и возможному нарушению системы свертывания крови.

Таким образом, данный фенотип нарушения иммунной системы у пациентов является более трудоемким в определении (так как требует нестандартных подходов к оценке иммунного статуса больных с постковидным синдромом нарушений иммунной системы), что, несомненно, усложняет обследование, но в то же время эти пациенты нуждаются в подборе иммунопрепаратов с целью иммунокорреции данного нарушения. Полученные данные расширяют представление о формирование постковидных нарушений иммунной системы и требуют более глубокого изучения причин, приводящих к таким нарушениям.

Настоящая публикация посвящена вопросам экспериментального изучения иммуннотропной активности нового соединения – метабиотика, на основе метаболитов (биологически активных веществ, БАВ), продуцируемых сапрофитным и безопасным стандартизированным штаммом ВКПМ Bacillus subtilis B-9909. Цель исследования – экспериментальная оценка иммунотропного действия метаболитов, продуцируемых пробиотическими микроорганизмами штамма ВКПМ Bacillus subtilis В-9909 на показатели клеточного иммунитета у лабораторных животных при моделировании у них токсического поражения печени. Метаболиты выделяли из культуральной жидкости бактериальной культуры Bacillus subtilis, штамм ВКПМ В-9909, при его глубинном культивировании в среде, состоящей из соляно-кислотного гидролизата соевой муки или панкреатического гидролизата казеина. Культура в это время находилась в конце экспоненциальной фазы роста (16-18 часов культивирования). Исследование показателей клеточного статуса у экспериментальных групп животных при оценке терапевтической эффективности экспериментального образца метабиотика, по отношению к группе лабораторных животных, получавших препарат сравнения урсосан, проводили путем определения таких количественных показателей сыворотки крови, как: количественное определение фагоцитарной активности (ФА) нейтрофилов периферической крови; определение метаболической активности нейтрофилов периферической крови в НСТ-тесте; количественное определение Т- и В-лимфоцитов; количество антителообразующих клеток (АОК). Поражение печени изучали путем моделирования острого токсического гепатита у белых крыс. Экспериментальный токсический гепатит моделировали на лабораторных животных – белых крысах. Внутрижелудочно вводили 40%-ный раствор CCl₄ в вазелиновом масле в течение 2 недель из расчета 0,2 г/кг. Полученные результаты экспериментальных исследований свидетельствуют, что об активации фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в ранние сроки эксперимента, что подтверждается данными, полученными в НСТ-тесте. Одновременно, в ранние сроки эксперимента значительно выросло количественное представление популяций Т- и В-лимфоцитов, а также количество АОК, что говорит об активации всех звеньев клеточного иммунитета, в ответ на токсическое воздействие четыреххлористого углерода. Таким образом, проведенные исследования по изучению клеточного статуса лабораторных животных, получавших метаболиты, продуцируемых пробиотическими микроорганизмами рода Bacillus subtilis В-9909 на лабораторных животных при моделировании у них токсического поражения, дают основания выполнить заключение о наличии у испытуемого образца метабиотика существенного иммуномодулирующего эффекта, в сравнении с урсосаном. Все вышеизложенное позволяет рекомендовать данное соединение, как перспективный лекарственный кандидат нового гепатопротектора с иммунотропным эффектом.

Шоковые состояния различной природы можно рассматривать в качестве клинических эквивалентов системного воспаления (СВ), основными проявлениями которого являются выраженная гиперцитокинемия, другие проявления системной воспалительной реакции (СВР), коагулопатия, полиорганная недостаточность (ПОН), дистресс гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы (ГГНС), системная тканевая альтерация. В совокупности эти феномены связаны прямыми и обратными связями с системными микроциркуляторными расстройствами, определяющими патогенез шоковых состояний. Целью исследования стало выявление особенностей развития фаз СВ при развитии двух вариантов септического шока, а именно при остром (первая неделя процесса) и затяжном/подостром сепсисе (от 2 до 6 недель с начала манифестации), а также геморрагического шока (исследование через 4-12 часа от начала массивной кровопотери). Для верификации фаз СВ использовали ранее предложенную нами шкалу СВ, включающую значение шести уровней СВР (УР-0- 5), а также дополнительные критерии СВ, а именно ПОН (шкала SOFA), а в плазме крови: D-димеры (> 500 нг/ мл), кортизол (> 1380 нмоль/мл), маркеры альтерации – миоглобин (> 800 нг/ мл) и/или тропонин I (> 0,2 нг/мл). Для расчета УР определяли содержание в плазме крови: CRP и 4 цитокинов (IL-6, IL-8, IL-10, TNFα). Наличие СВ устанавливали при значении шкалы СВ ≥ 5 баллов (цифровые значения УР + наличие дополнительных критериев, каждый равен 1 баллу). При верификации фаз учитывали время и тяжесть развития критического состояния, а также значения УР. При этом выделяли 3 основные фазы СВ: развития, цитокинового шторма / флогогенного удара (УР-4-5) и депрессивную фазу (фазу истощения), последняя характеризуется относительно небольшими значениями СВР (УР-2-3). Летальность при шоке на фоне острого сепсиса (n = 13) составила 71,4%, при затяжном сепсисе (n = 17) – 94,1%, при геморрагическом шоке, не купированном в течении 24 часов после массивной кровопотери (n = 13), – 53,8%. Развитие шока при остром сепсисе и геморрагическом шоке (исследование в первые 4-12 часов после начала массивной кровопотери) сопровождается выраженностью критической фазы цитокинового шторма / ФФУ с преобладанием УР-5 в случаях летальных исходов, а при затяжном сепсисе – депрессивной фазы (УР-2-3). Общая летальность (по всем группам) на фазе ФФУ составила 66,7%, на депрессивной фазе – 89,5%, а на фазе развития при геморрагическом шоке – 15,4% (при этом не исключен переход этой фазы в более критические фазы СВ до момента летального исхода).

В основе шоковых состояний как септической, так и асептической природы лежит типовой патологический процесс СВ, который необходимо дифференцировать от признаков СВР, характерных для высокоинтенсивного канонического воспаления. СВ отличается от классического воспаления и характеризуется более высокими значениями цитокинемии (фаза цитокинового шторма) или наличием комплекса дополнительных феноменов СВ при относительно умеренных значениях СВР (депрессивная фаза СВ). При этом депрессивная фаза СВ по своей критичности является более фатальной для исхода заболевания по сравнению с фазой цитокинового шторма с большей выраженностью СВР.

Хронические воспалительные заболевания органов малого таза (ХВЗОМТ) у женщин одна из основных и недостаточно изученных проблем в гинекологии во всем мире с неблагоприятными медицинскими и социально-экономическими последствиями, что обосновывает необходимость дальнейшего изучения иммунопатогенеза и разработки новых подходов к лечению. Цель – разработать новые иммунотерапевтические подходы к коррекции комбинированных нарушений функционирования иммунной системы иммунокомпрометированных женщин с ХВЗОМТ и оценить их клинико-иммунологическую эффективность.

Проведено клинико-анамнестическое и иммунологическое обследование 55 женщин 20-40 лет: 35 женщин – в период обострения вялотекущих или рецидивирующих ХВЗОМТ, резистентных к традиционной терапии, до начала (группа исследования 1 – ГИ-1) и после (группа исследования 2 – ГИ-2) комплексного лечения; 20 здоровых женщин (группа сравнения). Оценены содержания Т- и В-лимфоцитов, естественных киллерных клеток (ЕКК) (CYTOMICS FC500, США), фагоцитарная и микробицидная функции нейтрофильных гранулоцитов (НГ) в ГИ-1 и ГИ-2 до и через 2-3 дня после проведения комплексного лечения с включением иммунотерапии препаратом на основе гексапептида (ГП) в дозе 45 мкг/мл внутримышечно ежедневно в течение 10 дней.

В ГИ-1 до лечения выявлено снижение Т CD3⁺CD19^- и В CD3^-CD19⁺ лимфоцитов на фоне не меняющихся значений общего количества лейкоцитов и лимфоцитов. При явном снижении клеточных механизмов адаптивного иммунитета отмечено увеличение в 2 раза содержания ЕКК CD3^-CD16⁺CD56⁺. Выявлены дефекты функционирования системы НГ дефицит «активно фагоцитирующих» НГ, снижение их переваривающей функции, NADPH-оксидазной активности – отсутствие ответа как на воспаление и на дополнительную индукцию антигеном. После лечения в ГИ-2 наблюдается восстановление содержания Т CD3⁺CD19^- и В CD3^-CD19⁺ лимфоцитов, ЕКК CD3^-CD16⁺CD56⁺, усиление эффекторных функций НГ – процессов захвата и киллинговой способности за счет активации NADPH-оксидаз и нормализации микробицидных резервных возможностей НГ. Положительный клинический эффект: уменьшение клинических проявлений в острый период, отсутствие обострений ХВЗОМТ в катамнезе 6 месяцев в 85,6% случаев. Возникшие обострения ХВЗОМТ связаны медицинскими манипуляциями (5,7%) и вследствие незащищенных половых контактов (5,7%).

Разработанный иммунопатогенетически обоснованный подход к коррекции комбинированных нарушений функционирования иммунной системы иммунокомпрометированных женщин с ХВЗОМТ демонстрирует позитивный клинико-иммунологический эффект.

Особую актуальность в лечении хронического полипозного риносинусита за последнее десятилетие приобретает использование таргетной терапии различными моноклональными антителами. Связано это прежде всего с высокой частотой заболеваемости, полиэтиологичностью и особенностью патогенетических механизмов формирования полипозного процесса, малой эффективностью существующих методов лечения, склонностью к рецидивам и коморбидным состояниям. В статье приводится краткая историческая справка об участии различных предикторов в ремоделировании слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух на этапах формирования полипозного процесса, обосновывающих необходимость использования в лечении моноклональных антител. На основе рассмотрения ведущей роли Th2-воспаления в иммунопатогенезе формирования полипозных вегетаций, теоретически оценено влияние таргетной терапии в лечении хронического полипозного риносинусита, освещены некоторые важные моменты, нуждающиеся в дальнейшей корректировке. Несомненно, ингибирование синтеза «нужных» интерлейкинов приводит к улучшению клинической симптоматики и уменьшению размеров полипозных вегетаций, но в то же время реальные биохимические трансформации слизистой оболочки полости носа мало изучены. Так, попытка ингибирования какого-то цитокина может привести к опосредованной блокировке других провоспалительных цитокинов. В этом контексте необходимо дальнейшее изучение фармакодинамики препаратов таргетной терапии с прописанием четких противопоказаний к их применению.

Целью исследования явилась оптимизация условий для модельного иммуноанализа в формате иммунофильтрации с использованием диагностических реагентов на основе пероксидазы хрена. В качестве положительных сывороток в работе использовали остаточные образцы сыворотки крови пациентов «красной» зоны, с верифицированным диагнозом новой коронавирусной инфекции, в качестве отрицательных образцов были использованы сыворотки крови, полученные до 2019 года. Процедуру иммунофильтрационного анализа осуществляли с применением пула отрицательных и положительных сывороток крови.Были проведены исследования, опитимизирующие процедуру анализа и повышающие значимые характеристики теста. Результаты. Показано, что добавление додецилсульфата натрия до конечной концентрации 50 мкМ в субстратный буфер позволяет достичь более высокого аналитического сигнала и стабильного результата спустя 10 минут после окончания процедуры анализа. Оптимизированы такие условия иммунофильтрационного анализа как разведения диагностического реагента, объем вносимого образца и количество S-белка коронавируса, наносимого на нитроцеллюлозную мембрану. Определено, что с помощью иммунофильтрационного анализа возможно определение антител против S-белка коронавируса в разведении образца сыворотки более чем 1/1000. Результаты иммунофильтрационного анализа воспроизводят результаты ИФА.

Псориаз – хроническое воспалительное заболевание кожи характеризуется повышенной пролиферацией эпидермальных клеток, нарушением кератинизации и воспалительной реакцией в дерме, обусловленной активацией Т-лимфоцитов и синтезом провоспалительных цитокинов. Патофизиология псориаза связана не только с активацией провоспалительных реакций, а также со снижением противовоспалительных функций иммуносупрессорных клеток. Известно, что Treg, Вreg и клетки-супрессоры миелоидного происхождения (MDSCs) не выполняют свои классические гомеостатические функции при псориазе. В последние годы все чаще встречаются случаи развития резистентности к проводимой терапии генно-инженерными биологическими препаратами (ГИБП) в детском возрасте, требующие замены или отмены препарата. Цель исследования состояла в оценке содержания субпопуляций MDSCs и их функциональной активности в периферической крови у детей с псориазом при разной эффективности ГИБП. Обследовано 110 детей с вульгарным псориазом до назначения биологической терапии, на 16-й и 52-й неделях терапии адалимумабом, этанерцептом и устикинумабом, в возрасте от 6 до 18 лет. Группу сравнения – 34 здоровых ребенка, сопоставимых по возрасту. Эффективность терапии оценивали по достижению PASI 75 к году терапии. Методом многоцветной проточной цитометрии проводили оценку содержания MDSCs и их субпопуляций, и активности аргиназы-1. Установлено увеличение содержания MDSCs у детей с псориазом относительно группы сравнения (р = 0,000). Анализ эффективности биологической терапии у детей с псориазом, по индексу PASI, показал достоверное снижение тяжести заболевания в группе пациентов с хорошим эффектом, как на 16 неделе терапии (р = 0,000), так и к году лечения ГИБП (р = 0,017). У детей с псориазом при разной эффективности и длительности биологической терапии выявлена разная динамика содержания MDSCs. В группе пациентов с хорошим эффектом биологической терапии, как до начала лечения, так и к 52-й неделе терапии, выше процент общей популяции MDSCs (р < 0,01). У детей с псориазом выявлено увеличение иммуносупрессивной функций MDSCs по активности аргиназы-1 относительно группы сравнения (Ме 3,2 (3,0-3,4) MFI против Ме 2,7 (2,6-2,9) MFI; р = 0,000). Активность аргиназы-1 у пациентов с псориазом в стадии регресса заболевания (PASI < 10) достоверно увеличена относительно детей в прогрессирующей стадии псориаза (PASI ≥ 10; р = 0,001). Таким образом, содержание MDSCs и их супрессорная активность MDSCs у детей с псориазом информативна в прогнозе эффективности терапии ГИБП. Ускользание эффекта биологической терапии после индукционного курса сопровождается снижением количества MDSCs и их функциональной активности.

Ведущее место в структуре хирургической стоматологической патологии занимают одонтогенные воспалительные заболевания (хронический периодонтит, одонтогенные флегмоны) и травмы, зачастую протекающие с воспалительными осложнениями. Цель работы – провести анализ эффекторных показателей фагоцитов локального очага воспаления (отделяемого гнойной раны, содержимого лунки зуба и смешанной слюны) и оценить влияние топической цитокинотерапии на изучаемые параметры у пациентов с воспалительными стоматологическими заболеваниями – хроническим периодонтитом, одонтогенными флегмонами, осложненным переломом нижней челюсти. В рамках двухэтапного исследования комплексно обследованы 236 человек, разделенные на группы в зависимости от заболевания и метода лечения, в их числе: 74 пациента (К 04.5 – К 04.9), разделенные на группы в соответствии с формой периодонтита (хронический фиброзный, гранулирующий и гранулематозный); 102 пациента с одонтогенными флегмонами (L03.2, К12.2), которым на фоне базовой терапии на втором этапе проводили топическую цитокинотерапию беталейкином (рекомбинантный IL-1β) и ронколейкином (рекомбинантный IL-2); больные с переломом нижней челюсти, осложненным воспалительным процессом (S 02.6, n = 50), которым на втором этапе проводили топическую иммунотерапию беталейкином. Обследование пациентов с воспалительными стоматологическими заболеваниями на первом этапе работы и проведенный анализ эффекторных параметров нейтрофильных гранулоцитов и макрофагов локального воспалительного очага выявил иммунологические предикторы недостаточной эффективности воспалительного ответа, проявляющиеся в абберантной функциональной активности фагоцитов: угнетение всех изучаемых показателей с выраженным снижением функционального резерва клеток у пациентов с одонтогенными флегмонами глубоких клетчаточных пространств; высокую способность к продукции активных форм кислорода со снижением функционального резерва нейтрофилов у больных с осложненными нагноением костной ткани переломами; у пациентов с поражением периапикальной зоны зубов – признаки существенной активности хронического воспаления. Второй этап исследования, связанный с оценкой влияния топической терапией рекомбинантными цитокинами на функциональные показатели фагоцитов и анализом полученных данных, позволил обнаружить различное влияние препаратов на изучаемые параметры и при этом зарегистрировать интегральный эффект иммунотерапии, заключающийся в нормализации измененных показателей. Таким образом, полученные данные могут свидетельствовать, что у пациентов с воспалительными процессами челюстно-лицевой области, которым применялась топическая цитокинотерапия, формировался более высокий эффекторный адаптивный потенциал фагоцитов локального очага.

У пациентов, перенесших COVID-19, отмечают разнообразные проявления постковидного синдрома (ПКС), вызывающие развитие осложнений, сопровождающих течение тяжелых вирусных инфекций с развитием синдрома хронической усталости (СХУ) и выраженных когнитивных расстройств (КР). Изучение молекулярных механизмов нарушений в системе НГ у пациентов с ПКС, связанных с продукцией IFN, рецепторной функцией НГ, в частности субпопуляций, экспрессирующих IFNα/βR, IFNγR(CD119) на мембране НГ, является актуальным и представляет несомненный интерес, для поиска терапевтических стратегий, восстановления и усиления врожденного иммунного ответа после перенесенного COVID-19. Цель – уточнить количественные и фенотипические характеристики субпопуляций CD16⁺IFNα/βR1^-CD119⁺, CD16⁺IFNα/βR1⁺CD119-, CD16⁺IFNα/βR1⁺CD119⁺ нейтрофильных гранулоцитов периферической крови пациентов с постковидным синдромом.

Обследованы 39 пациентов (24-60 лет) с ПКС, через 3 месяца после COVID-19 – группа исследования 1 (ГИ1). Группа сравнения (ГС) сформирована из 30 добровольцев обследованных в доковидный период. Проведена детекция ГВИ (ВПГ1, ВЭБ, ВЧГ6, ЦМВ) в соскобе с миндалин и задней стенки глотки. Для определения выраженности клинических симптомов ПКС использована анкета с оценкой тяжести их проявления в баллах. Исследовано содержание и фенотип НГ субпопуляций CD16⁺IFNα/βR1^-CD119⁺, CD16⁺IFNα/βR1⁺CD119^-, CD16⁺IFNα/βR1⁺CD119⁺ (FC 500, Beckman Coulter, США).

У всех пациентов ГИ1 выявлены клинические проявления СХУ и КР, выраженность которых в баллах составила 16,0 (14,75-20,25). При детекция ГВИ у 37,2% определена моно – ВПГ1 инфекция; у 62,8% микст-ГВИ (ВПГ1, ВЭБ, ВЧГ6), при которых отмечались более выраженные клинические симптомы. Установлено отсутствие субпопуляции CD16⁺IFNα/βR1⁺CD119⁺НГ и трансформация фенотипа субпопуляций CD16⁺IFNα/βR1^-CD119⁺НГ, CD16⁺IFNα/βR1⁺CD119^-НГ. Определено повышение плотности экспрессии CD16, IFNα/βR1, CD119^-рецепторов (р1-3 < 0,05), демонстрирующих готовность к восприятию интерфероновых сигналов и ответа на них.

Снижение инфекционной нагрузки в постковидном периоде и адекватная работа иммунной системы с реализацией механизмов нейроиммуноэндокринной регуляции будут приводить к восстановлению функционирования различных органов, систем и нивелировать проявления ПКС. С этих позиций рекIFNα2b в комбинации с высокоактивными антиоксидантами, может способствовать формированию протективного иммунитета для профилактики ОРВИ, обострения хронических инфекций, реставрации фенотипа субпопуляций НГ с последующим устранением дисбаланса в противоинфекционном иммунитете.

Одной из актуальных проблем при разработке систем лекарственной доставки является иммунологическая безопасность наночастиц, применяемых в качестве основы для создания данных систем. Кукурбит[n]урилы (CB[n]) – молекулярные наноконтейнеры, способные инкапсулировать различные лекарственные препараты и служить основой для систем доставки. Кукурбитурилы являются малотоксичными соединениями, в условиях in vitro проявляют слабые иммуномодулирующие свойства, не обладая при этом иммунотоксичностью.

Целью данного исследования была оценка действия кукурбитурилов в условиях in vivo на количество и субпопуляционный состав лейкоцитов периферической крови.

В работе были использованы мыши линии BALB/c в возрасте 2-4 мес. Для проведения данного исследования кукурбитурилы разводились в фосфатно-солевом буфере и вводились лабораторным животным внутрибрюшинно (трехкратно в течение недели).

При оценке влияния кукурбит[7]урила на показатели крови после трехкратного введения в течение недели внутрибрюшинно лабораторным животным статистически значимых изменений обнаружено не было. Однако при первом введении у лабораторных животных отмечалось небольшое увеличение относительного количества лимфоцитов после первого введения CB[6] и увеличение доли нейтрофилов после первого введения CB[8]. В то же время после второго и третьего введения кукурбитурилов доли лимфоцитов и нейтрофилов находились в пределах нормы и не имели статистически значимых различий по сравнению с контролем. Далее проводилась оценка влияния на субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови лабораторных животных. Было обнаружено, что после введения CB[6] в периферической крови наблюдалось снижение Т-лимфоцитов, и одновременно увеличение доли CD19⁺В-лимфоцитов по сравнению с контролем. CВ[7] и CB[8] не влияли на субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови.

Было обнаружено, что введение CB[n] не влияло на показатели крови лабораторных животных, что может свидетельствовать о безопасности данных соединений в условиях in vivo. При этом CB[6] способен оказывать стимулирующее воздействие на гуморальный иммунитет, повышая относительное количество B-лимфоцитов.

Обследовано 65 мужчин с нестабильной стенокардией и острым инфарктом миокарда (острым коронарным синдромом - ОКС) от 40 до 65 лет, которые ранее болели COVID-19  и 20 лиц с ОКС, не перенесших COVID-19. У всех лиц также была гипертоническая болезнь, и им потребовалось стентирование коронарных артерий в ближайшие 3 суток после поступления в стационар. Из иммунологических    показателей методом   проточной цитометрии на цитофлюориметре «Navios» (BeckmanCoulter, США) по стандартизованной технологии оценки лимфоцитарного звена иммунитета [1] определялись: CD45⁺CD3⁺CD19^- (Т-лимфоциты общие), CD45⁺CD3⁺CD4⁺ (Т-хелперы), CD45⁺ CD3⁺ CD8⁺ (цитотоксические Т-лимфоциты), CD45⁺CD3^-CD19⁺ (В-лимфоциты), CD45⁺CD3⁺CD16⁺CD56⁺ (TNK-клетки), CD45⁺CD3^-CD16⁺CD56⁺ (натуральные киллеры), CD45⁺CD3⁺CD4⁺CD25⁺CD127^- (Т-регуляторные клетки), CD45⁺ CD3⁺CD4⁺CD25⁺ (Т-лимфоциты - ранняя активация), CD45⁺CD3⁺HLA-DR (Т-лимфоциты - поздняя активация). Все пациенты были поделены на группы в зависимости от содержания NK-клеток (натуральных киллеров). Больные, перенесшие COVID-19, имеют 3 фенотипа нарушений (пониженное количество NK-клеток нормальное и повышенное), а не перенесшие - 2 фенотипа (пониженное количество NK- клеток и нормальное). Наиболее тяжелое состояние и степень выраженности иммунных нарушений были выявлены у пациентов, перенесших COVID-19. У лиц с острым коронарным синдромом и COVID-19 преимущественно с нормальным и повышенным уровнем NK-клеток в сопоставлении с пациентами ОКС без COVID-19, наблюдалось более тяжелое течение заболевания – превалировали больные с острым инфарктом миокарда, у них выявлен более высокий уровень смертности, увеличена продолжительность лечения, а также чаще отмечались тромбозы стентов. У лиц с ОКС и COVID-19 с повышенными NK-клетками наблюдалось максимальное снижение Т-клеточного звена иммунитета: Т-лимфоцитов общих, Т-лимфоцитов-хелперов, Т-цитотоксических лимфоцитов, Т-лимфоцитов ранней активации, Т-регуляторных клеток в абсолютных числах по сравнению с другими группами. Наименьший иммунорегуляторный индекс и, при этом, максимальное число Т-NK-лимфоцитов отмечались у лиц, перенесших COVID-19 и имевших пониженные NK-клетки. Минимальное количество Т-NK-лимфоцитов регистрировалось у больных с низкими NK-клетками, не болевших COVID-19. Минимальные Т-лимфоциты (CD45⁺CD3⁺CD4⁺HLA-DR⁺) поздней активации выявлены у лиц, переболевших COVID-19, с повышенными и нормальными NK-клетками. Наименьшее число Т-регуляторных клеток поздней активации отмечалось у пациентов, не болевших COVID-19, но вакцинированных, и имеющих нормальное содержание NK-клеток. Проведенное исследование также позволяет более четко определить группы пациентов с ОКС, нуждающихся в дополнительной иммуннокоррекции.

Миелоидные супрессорные клетки (МСК) - популяция незрелых клеток миелоидного происхождения, проявляющая угнетающие функции, преимущественно, в отношении Т-лимфоцитов. В норме MDSC составляют менее 1% от лейкоцитов периферической крови. Количество этих клеток возрастает при здоровой беременности, однако, показана решающая роль MDSC в поддержании роста опухолей и при аутоиммунных патологиях.

Поскольку MDSC в настоящее время относят к важным регуляторам иммунитета, поиск способов манипулирования их функциями актуален для разработки лечения злокачественных и аутоиммунных заболеваний, а также патологий беременности и посттрансплантационных осложнений.  Иммуносупрессивные механизмы этих клеток опосредованы экспрессией ими поверхностных молекул CD73, ADAM17, PD-L1, ферментов аргиназы 1 (Arg1), индуцибельной синтазы оксида азота (iNOS) и индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), активных форм кислорода, а также продукцией противовоспалительных цитокинов IL-10 и TGF-β1.    

Трофобластический β1-гликопротеин (ТБГ) – гликопротеин беременности, обладающий иммуномодулирующими эффектами в отношении клеток естественного (дендритные клетки и макрофаги) и адаптивного (Т-клетки) иммунитета. В то же время, влияние ТБГ на MDSC ранее не было изучено. Так как данный гликопротеин обладает перспективами фармакологического применения, необходимо исследовать не только нативный вариант ТБГ, но и его рекомбинантную форму. 

Поскольку основной функцией MDSC является иммуносупрессия, целью нашей работы стала оценка одного из её механизмов, а именно   внутриклеточной экспрессии ферментов деградации аминокислот, Arg1 и IDO, под влиянием нативного и рекомбинантного ТБГ in vitro.

Дифференцировку MDSC производили из CD11b⁺ клеток, выделенных из периферической крови здоровых добровольцев. Клетки культивировали 7 дней с поэтапным добавлением GM-CSF, IL-1β и LPS.  Hативный (н) (1,10 и 100 мкг/мл) и рекомбинантный (р) (1 и 10 мкг/мл) ТБГ вносили в культуры за три дня до окончания инкубации. Методом проточной цитометрии определяли процент MDSC (Lin^-HLA-DR^-CD11b⁺CD33⁺), внутриклеточно экспрессирующих Arg1 и IDO.

Обнаружено, что нТБГ и рТБГ во всех исследованных концентрациях не изменяли количество MDSC, экспрессирующих Arg1. Однако оба вида белка в концентрации 10 мкг/мл вызывали статистически значимое увеличение процента клеток, экспрессирующих IDO.

Ранее нами было обнаружено, что нТБГ и рТБГ влияют на дифференцировку MDSC, увеличивая процент этих клеток, относящихся к моноцитарной субпопуляции. Однако сейчас можно сказать, что, помимо этого, ТБГ усиливает супрессивную функцию исследуемых клеток.

Полученные данные являются новыми, и открывают перспективы таргетного воздействия на миелоидные супрессорные клетки с целью совершенствования клеточных технологий в науке и медицине.

В настоящее время многие исследования направлены на изучение механизмов развития основных возраст-зависимых патологий, к которым относится, в том числе, артериальная гипертензия (АГ). Нами не было найдено источников, отражающих наличие связи между уровнем матриксной металлопротеиназы 7-го типа (ММР-7), тканевого ингибитора матриксных металлопротеиназ типа (ТIMP-1) и антропометрическими данными, что важно учитывать при диагностике возраст-ассоциированных, социально-зависимых заболеваний и метаболических нарушений. В статье представлены данные состоянии системы протеолиза и антропометрические данные 45 практически здоровых женщин и 45 женщин с артериальной гипертензией в возрасте от 59 до 74 лет. Уровни MMP-7 и TIMP-1 в сыворотке крови исследовали методом сендвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа. Объем талии и шеи измеряли трижды сантиметровой лентой с точностью до 1 см. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью аналитического программного обеспечения IBM SPSS Statistics, V. 22.0. Результаты исследования отражают корреляционные связи между уровнем MMP-7 и TIMP-1, а также объемом талии (ОТ) и шеи (ОШ). В группе практически здоровых женщин зафиксирован низкий уровень MMP-7 и TIMP-1 в сравнении со второй исследуемой группой (p < 0,01). Антропометрические данные не отличались выраженным разнообразием: объем талии в группе здоровых женщин был меньше (p < 0,05), а значения объема шеи достоверно в группах не различались. При оценке связи в группе практически здоровых женщин нами зафиксирована прямая высокая корреляция значительной силы между ОТ и ОШ (r = 0,754, p < 0,0001), в то время как в группе женщин с АГ эта связь была слабее (r = 0,5782, p < 0,0001). Кроме того, в обеих исследуемых группах была обнаружена идентичная направленность корреляции между уровнем MMP-7 и TIMP-1: в группе здоровых женщин эта связь была средней силы (r = 0,657, p < 0,0001), тогда как в группе женщин с АГ – сильная (r = 0,720, p < 0,0001). Полученные данные свидетельствуют о наличии метаболических нарушений в группе женщин с артериальной гипертензией и признаках нарушения системы протеолитических ферментов.