Том 28, № 3 (2025)

Традиционное изучение литературы, использование стандартных методов анализа данных в иммунологии занимает значительное время, не всегда позволяя справиться с масштабом и сложностью проблемы. Искусственный интеллект может помочь в решении этого вопроса, автоматизируя процессы поиска и экспертизы актуальных сведений, позволяя ученым извлекать важные факты из больших объемов информации. Целью исследования стало определение потенциала искусственного интеллекта в иммунологических исследованиях с акцентом на автоматизацию сбора литературных данных и анализ цифровых сведений. Теоретическая часть работы основана на изучении материалов баз PubMed, Scopus, Google Scholar, ResearchGate за 2000-2025 годы, тип – оригинальная статья или обзор литературы. Основа стратегии поиска – использование ключевых слов, процесс отбора публикаций заключался в скрининге заголовков, аннотаций и полных текстов исследований. Практическая часть работы выполнена как сравнительный анализ результатов, ранее изученных данных, с выводами, полученными при использовании технологий искусственного интеллекта, на примерах моделей GPT v.4.0. Установлено, что технологи искусственного интеллекта могут быть полезны в работе над созданием обзора литературы по иммунологии, включая формирование резюме, синтез графиков и схем, визуализирующих новые сигнальные пути, взаимосвязи между клетками, факторы развития заболеваний. Помимо работы с текстами, искусственный интеллект может быть применен для статистической обработки и анализа цифровых данных, например, выявления закономерностей, решения вопросов прогнозирования, построения моделей, рассмотрения других более сложных задач. При сравнении ранее изученных данных с результатами использования GPT v.4.0 установлено, что у разных чат-ботов могут встречаться следующие недостатки: зависимость ответа от стиля формулирования запроса, синтез информации в очень обобщенном виде, создание небольших объемов текста (до 1000 слов), риск плагиата, сложности с синтезом рисунков, схем, таблиц, представление исчерпывающей информации преимущественно на английском языке, самостоятельное синтезирование несуществующих ссылок на литературные источники. Выводы: 1. Искусственный интеллект может преобразовать иммунологические исследования, позволяя проводить более эффективный обзор литературы и более глубокий анализ данных, однако на начальных этапах требуется экспертный надзор. 2. По мере развития технологий искусственного интеллекта они станут неотъемлемой частью инструментария иммунолога.

Мелатонин (N-ацетил-5-метокситриптамин) – основной гормон эпифиза, однако его синтез также происходит в различных экстрапинеальных тканях, включая головной мозг, сетчатку, ретинальный пигментный эпителий, желудочно-кишечный тракт, костный мозг, тимус, лимфоциты и кожу. Мелатонин представляет собой амфифильное производное индола, сочетающее гидрофильные (метильная и амидная группы) и гидрофобные (индольное ядро) молекулярные домены. Благодаря уникальной структуре, обеспечивающей высокую биодоступность, а также присутствию гормона и ферментных механизмов для его синтеза в различных органах и тканях, мелатонин участвует в регуляции многочисленных физиологических процессов, что подчеркивает его значительную роль в поддержании системного гомеостаза. Плейотропные эффекты мелатонина обусловлены комбинацией его прямых молекулярных взаимодействий и опосредованных регуляторных механизмов. С одной стороны, мелатонин проявляет свойства мощного эндогенного антиоксиданта, способного напрямую нейтрализовать реактивные формы кислорода и азота. С другой стороны, его физиологические эффекты реализуются через связывание со специфическими белковыми мишенями, а также через вторичные механизмы, включая активацию антиоксидантной защиты, метаболическую и эпигенетическую модуляцию. Однако особый интерес вызывает взаимодействие гормона с многочисленными вне- и внутриклеточными молекулярными мишенями, аффинность связывания с которыми варьируется в широком диапазоне концентраций. Исследования последних десятилетий идентифицировали около двух десятков различных белковых мишеней мелатонина, охватывающих широкий спектр функциональных категорий – от наиболее охарактеризованных рецепторов (мембранных и ядерных) до неканонических мишеней: ферментов (хинонредуктаза-2, металлопротеиназа-9, фосфопротеинфосфатаза-2А, пепсин), ионных каналов, транспортных и структурных белков (транспортер глюкозы Glut1, олигопептидные транспортеры PEPT1 и PEPT2, сывороточный альбумин, тубулин), белков-акцепторов кальция (кальмодулин, протеинкиназа C, кальретикулин). Поиск мишеней мелатонина продолжается, в частности, предполагают, что гормон, помимо опосредованного влияния, способен напрямую модулировать активность мембранного белка резистентности P-гликопротеина и NAD+-зависимых деацетилаз – сиртуинов SIRT1 и SIRT3. Изучение мишеней мелатонина важно для анализа его фармакодинамических эффектов, а поиск новых открывает перспективы для понимания внециркадных функций гормона, таких как нейропротекция, антиканцерогенез и модуляция метаболизма.

Макрофаги имеют огромное значение в работе иммунной системы, будучи важными участниками врожденного иммунитета. Они способны как напрямую бороться с патогенами, так и опосредованно, регулируя работу окружающих клеток через биологически активные вещества. В ответ на различные стимулы макрофаги из базального состояния могут переходить в про- или противовоспалительное, поляризуясь в М1- или М2-фенотип. М1-макрофаги обладают провоспалительным фенотипом, где макрофаги активируются под воздействием липополисахарида клеточной стенки грамотрицательных бактерий или некоторых провоспалительных цитокинов. М2-макрофаги приобретают противовоспалительный фенотип при активации некоторых рецепторов иммунного ответа (Fcγ и TLR), цитокинами IL-4, IL-13, IL-10 и при других стимулах. Также макрофаги способны ослаблять свой иммунный ответ в зависимости от длительности и/или кратности воспалительного сигнала и формировать к нему толерантность. Особое значение имеет толерантность к бактериальному липополисахариду, в ходе которого макрофаги приобретают рефрактерность к повторной стимуляции по сравнению с первичной, продуцируя меньше цитокинов и хемокинов. В нашем исследовании мы оценили роль цитокинов и хемокинов CCL2, CXCL1, CXCL9, CXCL12, IL-1b, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-22, TNFα на иммунный ответ макрофагов на липополисахарид и формирование толерантности. Первичные моноциты были получены из венозной крови здоровых доноров. Для стимуляции моноцитов и дифференцированных из них макрофагов использовался липополисахарид E. coli. Нами было показано, что предварительная обработка первичных макрофагов человека рекомбинатными цитокинами IL-4 и TNFα усиливает воспалительный ответ при повторной стимуляции липополисахаридом, то есть ослабляет развитие толерантности. Данный эффект выражался в усилении выработки цитокинов – TNFα, IL-6, IL-10 и хемокина IL-8 для рекомбинатного IL-4 и TNFα для рекомбинантного TNFα. При этом рекомбинантный IL-4 оказался также способен усиливать воспалительный сигнал макрофагов при однократной стимуляции липополисахаридом, увеличивая секрецию TNFα и IL-8. Таким образом, мы показали, что некоторые цитокины могут влиять на толерантность макрофагов к липополисахариду. В этом явлении может быть задействован переход макрофагов из одной поляризации в другую или в промежуточную форму. Модулирование фенотипа и иммунного ответа макрофагов открывает путь к созданию новых терапевтических подходов к воспалительным заболеваниям, в патогенезе которых развитие толерантности к липополисахариду играет немалую роль – таким как сепсис и атеросклероз.

Целью исследования являлось изучение иммунотропных эффектов фармацевтической композиции на основе метаболитов пробиотического штамма и растительных компонентов различного происхождения на моноциты человека in vitro. Авторами предложен экзометаболит Saccharomyces boulardii (S. boulardii) как основа всех предлагаемых составов для регенерации эпителиоцитов человека. В состав смесей входили экстракт зверобоя и масло кориандра. Эффективность полученных фармацевтических средств оценивали на моноцитах взрослого человека. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли методом градиентного центрифугирования. Моноциты высевали в 24-луночные планшеты, сокультивировали с исследуемыми композициями (опыт) и без добавления композиций (контроль). Для идентификации поверхностных маркеров линии моноцитов/макрофагов использовались моноклональные антитела. Фенотипический анализ моноцитов проводили с помощью проточного цитофлуориметра CytoFLEX. Характеристика фенотипа M2 проводилась с использованием антител CD204, CD163 и CD206, тогда как фенотип M1 исследовался с использованием антител CD80 и CD86. Экспериментально доказано, что сокультивирование с экстрактом зверобоя индуцировало культивируемые моноциты к приобретению фенотипа M1, при этом наблюдалось достоверное повышение экспрессии всех поверхностных маркеров для TLR4 CD80 и CD86. Экспрессию маркеров фенотипа М2 по сравнению с нестимулированными клетками, экстракт кориандра напротив, достоверно подавлял. Процентное соотношение моноцитов M2-фенотипа CD204+, CD206+, CD163+ было увеличено после совместного культивирования как с маслом, так и после сокультивирования с метаболитами S. boulardii для всех исследуемых маркеров. Воздействие масла кориандра, так и смеси №1 значительно снизило экспрессию генов всех маркеров M1: TLR4, CD80, CD86. Понижающий эффект экспрессии маркеров M1 сохранялся после добавления метаболитов S. boulardii только для TLR4 и CD 86 по сравнению с контролем. Субпопуляция моноцитов фенотипа TLR4+, CD204+, CD206+, CD163+, коэкспрессирующие маркеры поляризации M1 и M2 выявлены при сокультивировании со смесями как 2, так и 3. Процент гибридных TLR4+М2-моноцитов был значительно выше в смеси 2 по сравнению со смесью 3 (p < 0,001 и p < 0,05 соответственно). Таким образом, различные исследуемые смеси вызывают поляризацию моноцитов в М1/M2 в зависимости от состава композиции, что позволит рекомендовать к использованию в косметологии и, возможно, лечебной практике в зависимости от этиологии заболевания.

Исследование старения кроветворной системы у неантропоидных приматов, таких как макака яванская, предоставляет уникальную возможность для понимания эволюционно-консервативных механизмов старения человека и изучения возрастной динамики основных клеточных и биохимических показателей крови. Эти данные могут быть полезны для оценки результатов доклинических исследований на животных различных возрастных групп. Старение иммунной системы сопровождается нарушением функции отдельных клеток и изменением представленности популяций в циркулирующей крови. Несмотря на схожесть количественных показателей, возрастная динамика клеток крови у человека и макаки яванской имеет различия. Целью данного исследования было провести сравнительный анализ возрастных изменений клеточного состава крови и биохимических показателей крови у доноров и макак яванских. В исследования были включены группы животных в возрасте 4-9 лет, а также уникальная группа старых особей в возрасте 18-27 лет. Дополнительно были исследованы образцы крови, полученные от доноров-добровольцев различных возрастных групп (20- 30, 31-56 и 57-85 лет). Были проанализированы абсолютные показатели содержания клеток крови у доноров и макак, был проведен биохимический анализ крови у макак разных возрастных групп и проведен сравнительный анализ старения крови человека и макак. В данном исследовании у макак было зафиксировано снижение количества тромбоцитов с возрастом, что указывает на снижение продукции мегакариоцитов и их предшественников в костном мозге. Старение яванских макак также сопровождалось достоверным повышением уровня триглицеридов и глобулинов в крови, а также тенденцией к снижению уровня альбумина, что привело к уменьшению соотношения общего альбумина к глобулинам. Этот показатель у человека связан с общим состоянием здоровья, и его снижение наблюдается с возрастом. У самцов и самок также наблюдается тенденция к повышению уровня глюкозы, билирубина, холестерина и воспалительных ферментов с возрастом. Уровень креатинина был значительно выше у самцов независимо от возраста и превышал уровень этого показателя у самок.

Способность уропатогенных Escherichia coli (UPEC) образовывать биопленки является одним из факторов, обусловливающих рецидивы при инфекциях мочевыводящих путей. Миелопероксидаза (МПО) и катепcин G фагоцитов образуют противомикробную защиту при воспалении. Не исключено существование перекрестных взаимодействий между бактериями UPEC, внеклеточным матриксом биопленок и эффекторными клетками иммунной системы. Цель исследования – оценить секрецию МПО и катепсина G нейтрофилами и мононуклеарами периферической крови человека при взаимодействии с клетками биопленок и их супернатантами референтного и клинического UPEC. В работе использовали нейтрофилы и мононуклеарные клетки периферической крови здоровых мужчин (n = 6), выделенных на двойном градиенте фиколл-урографина (1,077 г/мл и 1,112 г/мл). Референтный штамм E. coli DL82 (fimH, papC, papGII, sfa, hlyA, usp, fyuA, iucD,iroCD, iroN) и клинический изолят E. coli R44 (fimH) (10⁶ кл/мл) выращивали в 96-луночных полистироловых планшетах на среде LB в течение 24 ч. Супернатант биопленок стерилизовали фильтрацией (0,22 мкм). Клетки бактерий освобождали из биопленок ультразвуком. Нейтрофилы культивировали с бактериями биопленок или их супернатантами в течение 1 ч, затем откручивали при 400 g, супернатант отбирали и замораживали при -20 °С. Активность МПО и катепсина G оценивали с использованием О-фенилендиамин дигидрохлорида и N-бензоил-L-тирозин этилового эфира, соответственно, по оптической плотности в супернатантах нейтрофилов и мононуклеарных клеток. Статистическая обработка проведена с использованием программы Excel. Показано, что секреция МПО нейтрофилами увеличивалась при взаимодействии с супернатантами биопленок E. coli DL82 в отличие от супернатантов E. coli R44. Клетки биопленок E. coli DL82 и E. coli R44 не влияли на секрецию МПО. Секреция МПО мононуклеарными клетками периферической крови человека оставалась на уровне контроля при действии клеток и супернатантов UPEC. Контакт нейтрофилов с бактериями и супернатантами штамма E. coli R44 приводил к уменьшению концентрации катепсина G в среде по сравнению с контролем. Экзометаболиты бактериальных биопленок UPEC, по-видимому, оказывают более значительное влияние на секреторную активность нейтрофилов, чем сами бактерии.

Мононуклеарные клетки периферической крови являются ценным биологическим материалом для большинства иммунологических исследований. Криоконсервация мононуклеарных клеток периферической крови обеспечивает доступ к большим объемам биоматериала в любой момент времени. Исходя из того, что криоконсервация может влиять на различные параметры клеток, рядом авторов было предложено введение этапа прекультивирования размороженных клеток для восстановления их функций. Цель исследования – оценка влияния прекультивирования клеток, подвергавшихся длительной криоконсервации, на пролиферативную активность Т-лимфоцитов. В работе была использована венозная кровь, полученная от 18 относительно здоровых добровольцев, подписавших информированное согласие. Мононуклеарные лейкоциты выделяли путем центрифугирования в градиенте плотности диаколла общепринятым методом. Полученные клетки подвергали контролируемому замораживанию до -80 °С в течение суток, затем переносили в жидкий азот. Длительность хранения образцов составила 40±1,4 мес. После размораживания клетки делили на две части, одну из которых сразу окрашивали 5(6)-карбоксифлуоресцеин диацетат-N-сукцинимидиловым эфиром (CFSE), стимулировали фитогемагглютином и культивировали в полной питательной среде, содержащей интерлейкин-2, в течение 7 суток. Вторую часть клеток прекультивировали в полной питательной среде (18 часов), затем обрабатывали, как указано выше. Оценку пролиферации Т-лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии. Установлено, что этап прекультивирования не влияет на относительное количество пролиферирующих Т-лимфоцитов. Вместе с тем в пробах с прекультивированными клетками было снижено число дочерних генераций, формируемых как CD4⁺, так и CD8⁺Т-лимфоцитами. Кроме того, выявлено значительное увеличение доли умирающих элементов среди вступивших в деление CD4⁺Т-клеток. При этом в пуле CD8⁺Т-лимфоцитов данного последствия этапа прекультивирования не было отмечено. Таким образом, прекультивирование клеток существенно увеличивает процент Т-лимфоцитов, гибнущих в процессе деления. Данный феномен был обнаружен только среди CD4⁺Т-клеток, что, по-видимому, отражает их большую чувствительность к гибели in vitro по сравнению с CD8⁺Т-лимфоцитами.

Синдром Шегрена (СШ) – системное аутоиммунное заболевание, характеризующееся иммуноопосредованным повреждением слюнных и слезных желез. В 5-35% (по разным данным) случаев синдром Шегрена сопровождается периферической CD3 Т-лимфоцитопенией, которая коррелирует с высокой активностью болезни и смертностью. Механизмы развития лимфоцитопении при СШ не известны. Важным инструментом в понимании механизмов развития болезней служат экспериментальные модели. Существующие модели синдрома Шегрена воспроизводят типичные для первичного СШ человека повреждения слюнных желез, включая воспаление слюнных желез и секреторную дисфункцию, но не лимфоцитопению. В настоящем исследовании синдром Шегрена вызывали у крыс Wistar иммунизацией фракцией белков с молекулярной массой 10-35 кДа, выделенной из гомогената слюнных желез мыши методом эксклюзионной хроматографии на сорбенте SepFast SEC 3-70. Крысы получили 3 внутрикожные инъекции антигена – первые две в составе ПАФ, третью – в составе НАФ, с интервалом в 1 неделю. Количество CD3, CD3CD4, CD3CD8-лимфоцитов определяли до иммунизации, спустя 5 и 9 недель после иммунизации методом проточной цитофлуориметрии. Гистологический анализ поднижнечелюстных слюнных желез провели через 12 недель после первой иммунизации. Часть парафиновых срезов слюнных желез окрашивали гематоксилином и эозином, другую – антителами к CD3 крысы для детекции лимфоцитарной инфильтрации. У 33% крыс выявлено повреждение эпителия зернистых протоков и обнаружены множественные очаги гиперплазии протокового эпителия. Лимфоцитарной инфильтрации на срезах слюнных желез, полученных спустя 12 недель после инициирующей СШ иммунизации, не выявлено, что свидетельствует о транзиторном характере вызванной аутоиммунной реакции против антигенов слюнных желез. У 50% крыс, иммунизированных белками слюнных желез мыши, выявлена хроническая CD4 и CD8 Т-лимфоцитопения. Таким образом, нами получена экспериментальная модель аутоиммунного заболевания подобного синдрому Шегрена, которая помимо повреждения слюнных желез воспроизводит хроническую CD4- и CD8-лимфоцитопению. Представленная модель синдрома Шегрена адекватна заболеванию человека, пригодна для изучения его патогенеза и может быть использована для выяснения механизма развития лимфоцитопении при синдроме Шегрена.

Поиск подходов для решения проблем острого и хронического отторжения трансплантата, преодоления тканевой несовместимости, является одним из важных вопросов клинической трансплантологии и регенеративной медицины. Индукция толерантности к естественным и искусственным трансплантационным антигенам является желаемой целью уже не одно столетие. Недавно было показано, что антилимфоцитарные антитела к активированным лимфоцитам, названные регуляторным ревматоидным фактором (регРФ), участвуют в контроле аутореактивных лимфоцитов в норме, поддерживая естественную толерантность. Было отмечено, что относительно быстрый подъем уровня регРФ в крови (3-5-й день) после иммунизации наблюдается при аутотрансплантации. Также его раннее повышение ассоциировано с нечувствительностью животных к экспериментально вызываемым аутоиммунным заболеваниям. Целью нашего исследования было выяснить, возможно ли индуцировать продукцию регРФ у крыс введением аутологичных лимфоцитов, активированных in vitro гетерологичным антигеном (лимфоциты мыши). Для этого одну группу крыс иммунизировали внутривенно смешанной культурой аутологичных и гетерологичных (мышиных) лимфоцитов (СКЛ), после 5 дней совместной инкубации. Другую группу иммунизировали только лимфоцитами мыши. РегРФ в крови определяли на 3-й, 5-й, 7-й, 14-й, 21-й, 28-й и 35-й дни после иммунизации. Предполагали, что внутривенное введение крысам активированных в СКЛ аутологичных лимфоцитов крыс и лимфоцитов мышей вызовет ранний ответ регРФ на аутологичные лимфоциты и более поздний на гетерологичные лимфоциты мыши. По средним данным титр регРФ в ответ на иммунизацию крыс мышиными лимфоцитами практически не изменялся, однако только на 7-й день отмечается значительное увеличение стандартного отклонения, что указывает на ярко выраженный индивидуальный характер реакции крыс на введение гетерологичных мышиных лимфоцитов. Иммунизация животных СКЛ вызвала двухфазный подъем регРФ в крови, на 5-й и 21-й дни. Повышение регРФ на 5-й день после иммунизации СКЛ свидетельствует о реакции на активированные гетерологичным антигеном аутологичные лимфоциты. Полученные результаты открывают перспективу для дальнейших исследований, направленных на разработку методов индукции приобретенной толерантности.

Сахарный диабет 2-го типа является хроническим заболеванием с множеством тяжелых осложнений. Число больных диабетом 2-го типа велико и продолжает нарастать по всему миру, что делает разработку новых средств лечения и профилактики данного заболевания крайне актуальной. Оксидативный стресс, вызванный гипергликемией, является одним из основных факторов поражения и дисфункции органов при сахарном диабете 2-го типа. Учитывая тесную вовлеченность иммунной системы в патогенез диабета и его осложнений, представляет интерес возможность влияния на активность системы антиоксидантной защиты в органах иммунопоэза, в частности в селезенке. Печень, интегрирующая все виды обмена веществ, наравне с органами иммунной системы как вносит вклад в патогенез диабета 2-го типа, так и является его мишенью. Красный клевер (Trifolium pratense) представляет интерес как дешевый и доступный источник антиоксидантов. Целью работы была оценка действия перорального введения водных экстрактов изофлавонов цветков красного клевера (Trifolium pratense) на состояние антиоксидантной системы защиты в крови, селезенке и печени крыс с экспериментальным диабетом. В течение месяца трижды в неделю половозрелым самцам крыс со стрептозотоцин-никотинамидной моделью сахарного диабета 2-го типа перорально вводили водные экстракты изофлавонов цветков красного клевера (Trifolium pratense), полученные методами «зеленых технологий» с использованием глубоких природных эвтектических растворителей, в дозах 300 мг/кг и 600 мг/кг. В крови было определено содержание глюкозы, относительное содержание гликированного гемоглобина, количество лейкоцитов разных фракций. Биохимически была определена активность ферментов системы антиоксидантной защиты каталазы и супероксиддисмутазы, содержание продукта перекисного окисления липидов малонового диальдегида и эндогенного антиоксиданта восстановленного глутатиона в крови и тканях селезенки и печени. Введение экстрактов изофлавонов цветков красного клевера (Trifolium pratense) снижало гипергликемию и восстанавливало количество моноцитов и гранулоцитов в крови, сниженное у крыс с диабетом; нормализовало активность каталазы в печени и активность супероксиддисмутазы в селезенке, уровень малонового диальдегида в селезенке и печени и содержание восстановленного глутатиона в селезенке, измененные у крыс с диабетом, до показателей здорового контроля, вне зависимости от дозы. Экстракты изофлавонов цветков красного клевера (Trifolium pratense) ослабляют гипергликемию и снижают окислительный стресс в органах крыс с экспериментальным СД2. Экстракты изофлавонов обладают иммунофармакологическим действием, проявляющемся в воздействии на показатели системы перекисного окисления липидов-антиоксидантной защиты в селезенке.

Одним из аспектов ограничения токсичности метотрексата (МТХ) является использование средств растительного происхождения, для которых характерны такие свойства, как доступность, безопасность и высокая биологическая активность в сочетании с очень низкой токсичностью. Среди лекарственных растений, содержащих большой комплекс биологически активных веществ полифенольной природы и обладающих антиоксидантными, противовоспалительными, иммунокорригирующими и другими свойствами, следует выделить клевер луговой и цикорий обыкновенный. Фитоэкстракты, полученные из данных растений, могут быть использованы для защиты в отношении иммунодепрессивного влияния МТХ и усиления его противовоспалительных свойств без индукции токсичности МТХ. В то же время необходимо отметить, что сведения о механизмах противовоспалительной активности индивидуальных фитоэкстрактов носят разнонаправленный характер. Цель работы – оценка влияния фитоэкстрактов клевера и цикория на секрецию провоспалительных цитокинов TNFα, IL-6 и IL-17 мононуклеарными клетками периферической крови человека при МТХ-индуцированной иммуносупрессии. Сухие экстракты из травы клевера и травы цикория были получены методом перколяции с этиловым спиртом. Продукцию цитокинов TNFα, IL-6 и IL-17 в супернатантах нестимулированных и стимулированных конканавалином A (Кон А) культур мононуклеарных клеток периферической крови человека оценивали с использованием метода иммуноферментного анализа. Оценка иммунорегуляторной активности сухих экстрактов из травы клевера и цикория, а также их сочетаний с МТХ на модели мононуклеаров периферической крови человека показала, что фитоэкстракты подавляли продукцию провоспалительных цитокинов в системе in vitro как спонтанную (TNFα, IL-6), так и индуцированную (TNFα, IL-6 и IL-17). Следует отметить, что выраженность ингибирующего эффекта фитоэкстрактов не уступала, а в отношении отдельных цитокинов (TNFα и IL-17) превосходила фитопрепарат «Иммунал». Установлено ингибирующее влияние фитоэкстрактов клевера и цикория, а также их сочетаний с МТХ на продукцию провоспалительных цитокинов мононуклеарными лейкоцитами периферической крови человека – TNFα, IL-6, IL-17. Показано потенцирующее влияние фитоэкстрактов на усиление ингибирующего эффекта цитостатика МТХ в отношении продукции лимфоцитами IL-6 и появление противоспалительного влияния в отношении TNFα и IL-17. Наиболее выраженным иммунорегуляторным и потенцирующим эффектом в отношении противовоспалительного воздействия МТХ обладал фитоэкстракт цикория, при этом оба экстракта превосходили влияние препарата сравнения «Иммунал».

Тучные клетки являются важным компонентом иммунного микроокружения органов мужской репродуктивной системы и участвуют в их регуляции в норме и при патологии. Моделирование дисрегуляции в виде активации или ингибирования тучных клеток и исследование влияния данного нарушения на сперматогенез может помочь в установлении точных механизмов регуляции данного процесса. Одним из активаторов тучных клеток является препарат Ципрофлоксацин, который зарекомендовал себя в исследованиях тучных клеток сердца, однако ранее не использовался в работах по изучению сперматогенеза. Цель данного исследования – оценить влияния разных схем приема препарата Ципрофлоксацин на тучные клетки репродуктивных органов самцов крыс и выбрать оптимальную дозу и продолжительность приема для создания модели, которая позволит исследовать участие тучных клеток в регуляции сперматогенеза. Эксперимент проведен на самцах линии Wistar. Использовали разные концентрации ципрофлоксацина (200 и 400 мг/кг) и сроки его приема. На гистологических препаратах оценивали морфофункциональные параметры тучных клеток семенников и придатков семенников. Препарат Ципрофлоксацин модулирует активность тучных клеток в зависимости от времени, дозы и ткани. После приема препарата в дозе 200 мг/кг 7 суток увеличивается количество, синтетическая активность тучных клеток и процент клеток со зрелыми гранулами как в семенниках, так и в придатках наряду с неизменной дегрануляцией, что указывают на прохождение «подготовительной» фазы, заключающейся в миграции тучных клеток в репродуктивные органы и накоплении ими секрета. После следует начало активной дегрануляции, которая сопровождается возвращением количества тучных клеток к показателю интактной группы, сохранением повышенной синтетической активности и преобладанием в семенниках клеток со зрелыми гранулами. Более высокая доза ципрофлоксацина (400 мг/кг) ускоряет активацию тучных клеток, что приводит к более ранней дегрануляции. Количество и функциональные параметры тучных клеток под действием препарата изменяются аналогично в обоих исследуемых органах, однако наблюдаемые морфометрические изменения и показатели созревания гранул демонстрируют тканеспецифические адаптивные реакции. Проведенное исследование дает основание рекомендовать дозу 400 мг/кг в течение 7 дней для активации тучных клеток в репродуктивных органах самцов крыс и изучения сперматогенеза. Дозу 200 мг/кг следует использовать с целью предварительной стимуляции миграции тучных клеток, повышения их синтетической активности и созревания перед применением другого активатора – индуктора дегрануляции. Данная доза также будет предпочтительной для более длительных экспериментов, чтобы свести к минимуму потенциальные побочные эффекты, связанные с более высокой дозировкой.

Протеинфосфатаза PPM1D (Protein phosphatase, Mg²⁺/Mn²⁺ dependent, 1D) является одним из ключевых регуляторов реакции на стресс, вызванной повреждением ДНК, клеточного цикла и апоптоза. Сверхэкспрессию PPM1D обнаруживают в большом количестве типов как солидных (рак легких, рак молочной железы и т.д.), так и гематологических (острый миелоидный лейкоз) злокачественных новообразований, что делает PPM1D важным прогностическим маркером при онкологиях. Особое внимание стоит уделить сверхэкспрессии PPM1D в колоректальном раке (КРР), являющемся третьим по распространенности среди всех онкологических заболеваний, потому что данный показатель коррелирует с увеличением размера опухоли, метастазированием, неблагоприятным прогнозом выживаемости и развитием лекарственной устойчивости. При этом лекарственная резистентность может быть связана с тем, что PPM1D напрямую дефосфорилирует р53 и другие компоненты сигнального пути ATM-p53, а также выступает в роли негативного регулятора NF-κB. Вероятно, что сверхэкспрессия PPM1D в опухолевых клетках КРР может приводить к снижению синтеза важных провоспалительных цитокинов и развитию иммуносупрессивного окружения опухоли, что может значительно ухудшать исход терапии. На данный момент роль PPM1D в регуляции воспалительного ответа в КРР остается недостаточно изученной. Целью данного исследования является сравнение эффекта химического ингибирования PPM1D путем использования его селективного ингибитора GSK2830371 и генетического нокаута PPM1D на линии КРР человека HT-29 в условиях индукции сигнального пути NF-κB при обработке TNF. В данной работе была использована клеточная линия КРР человека HT-29, а также ранее полученные линии HT-29 с нокаутом и с повышенной экспрессией гена PPM1D. Клетки культивировали в стандартных условиях. Для проведения экспериментов использовали TNF в концентрации 20 нг/мл и GSK2830371 в концентрации 10 мкМ. Инкубирование клеток с GSK2830371 производили в течение суток и с TNF в течение 12 часов. Измерение продукции цитокинов оценивали при помощи мультиплексной технологии xMAP INTELLIFLEX, а измерение экспрессии генов оценивали методом ПЦР в реальном времени. При мультиплексной оценке уровня секреции цитокинов было обнаружено, что ни инкубация клеток с GSK2830371, ни нокаут PPM1D не приводят к изменениям в цитокиновом профиле без стимуляции по сравнению с интактной клеточной линией. В случае стимуляции пути NF-κB с помощью TNF и ингибировании PPM1D также не выявлено значительного увеличения продукции провоспалительных цитокинов и факторов роста. А при оценке клеточной линии HT-29 со сверхэкспрессией PPM1D при помощи ПЦР в реальном времени наблюдалось статистически значимое увеличение уровня экспрессии TNF, IL-8 и IL-1b в ответ на обработку TNF по сравнению с линией дикого типа, что не согласуется с данными о негативной регуляции пути NF-κB фосфатазой PPM1D. В результате работы показано, что нокаут гена PPM1D существенно не влиял на уровень цитокинов (IL-8, GM-CSF и др.), находящихся под контролем транскрипционного фактора NF-κB в случае индукции TNF, в сравнении с использованием селективного ингибитора GSK2830371. При этом повышенная экспрессия PPM1D приводила к увеличению экспрессии генов провоспалительных цитокинов, таких как IL-8, TNF, IL-1b, при индукции пути NF-κB с помощью TNF.

Катионные амфипатические пептиды системы врожденного иммунитета, способные селективно связываться и повреждать мембраны опухолевых клеток, рассматриваются как перспективные кандидаты для расширения арсенала химиопрепаратов в борьбе с устойчивыми к терапии опухолями. Целью работы являлась оценка противоопухолевой активности новых синтетических гибридных пептидов CaBuCr и CaLTX in vivo, для чего использовали модель асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ) мышей. Пептиды представляют собой химерные последовательности на основе N-концевого фрагмента (1-8) цекропина А и регуляризованной пролин- и триптофан-богатой последовательности кателицидина 4 азиатского буйвола buCATHL4D (в случае CaBuCr), либо сходной с синтетическим пептидом LTX-315 последовательности с чередованием 2 лизина – 2 триптофана (в случае CaLTX). Ранее данные пептиды продемонстрировали высокую активность в отношении 6 линий опухолевых клеток и низкую гемолитичность в отношении эритроцитов человека in vitro. Развитие асцитной опухоли у мышей-самцов F1 CBA × С57BL/6 инициировали интраперитонеальной инъекцией 1 млн клеток АКЭ. Животные получали 10-дневный курс ежедневных инъекций пептидов в дозе 1,3 мг/кг. Анализировали кривые выживаемости, а также, по результатам эвтаназии 3 животных из каждой группы на 11-е сутки, объем асцита, число и концентрацию клеток АКЭ и количество лейкоцитов в крови. Группой сравнения выступали животные, получавшие инъекции физраствора. Оба пептида снижали общее количество клеток в асците более чем на 40% и существенно повышали концентрацию лейкоцитов в крови. Эффект CaBuCr на сроки жизни животных с опухолью оказался более выражен, среднее время жизни повышалось на 24% относительно контрольной группы, тогда как для CaLTX прирост составил всего 13%. Сравнение с ранее исследовавшимся в модели АКЭ цитолитическим пептидом протегрином 1 позволяет предположить вклад не только прямых цитотоксических, но и иммуномодулирующих эффектов в наблюдаемую картину действия рассматриваемых пептидов.

Мы изучаем реакции адаптации внутренних органов лабораторных грызунов на поступление с питьевой водой кремния в течение многих лет. Тучные клетки (ТК) лимфоидных органов являются одним из объектов нашего интереса. Они содержат нейромедиаторные биогенные амины и гепарин, который можно непосредственно найти в них с помощью авидина. Выявлена реакция авидин-позитивных ТК селезенки лабораторных мышей на поступление кремния с питьевой водой в концентрации 20 мг/л в течение трех месяцев. В эксперименте использовали белых лабораторных нелинейных мышей-самцов. Контрольная группа животных получала ad libitum питьевую бутилированную воду с концентрацией кремния 10 мг/л, опытная – ту же воду, в которую был добавлен метасиликат натрия девятиводный, так, чтобы общая концентрация кремния составила 20 мг/л. Массовую концентрацию кремния в воде определяли с помощью спектрометра эмиссионного с индуктивно связанной плазмой 5110 ICP-OES. Через три месяца животные были выведены из эксперимента, селезенку извлекали, фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине и заливали в парафин. Депарафинированные срезы окрашивали авидином, меченным флуоресцентной меткой зеленого цвета (Avidin, Alexa Fluor^® 488 conjugate, Invitrogen, Германия). Препараты изучали при помощи люминесцентного микроскопа с длиной волны возбуждающего света 495 нм. В красной пульпе селезенки мышей, получавших с питьевой водой кремний, наблюдалось увеличение количества авидин-позитивных ТК. Медиана площади ТК селезенки мышей опытной группы имела тенденцию к уменьшению за счет возрастания доли клеток малого размера. У мышей, получавших с питьевой водой кремний, ТК большого размера имели более высокие показатели люминесценции, то есть в них находится больше гепарина, чем в ТК селезенки мышей контрольной группы. Поступление с питьевой водой кремния в концентрации 20 мг/л в течение трех месяцев приводит к перераспределению популяции ТК в красной пульпе селезенки мышей по размеру, к увеличению интенсивности флуоресценции авидин-позитивных ТК большого размера, что свидетельствует об увеличении в них количества гепарина.

Одним из широко распространенных факторов малой токсичности на организм животных и человека является активное и пассивное табакокурение. В ранее опубликованных работах авторами исследован ряд морфологических и иммунологических параметров у пассивно куривших крыс. Настоящая работа продолжает исследование в данном направлении и посвящена анализу влияния синтетического пептида – препарата КК1, являющимся структурным аналогом первичной последовательности АКТГ (15-18) (Acetyl-(D-Lys)-Lys-Arg-Arg-amide), обладающего антиоксидантным и стресс-протекторным эффектом на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов и интенсивность свободно-радикального окисления в печени и сыворотке крови. Определение иммунологических и биохимических показателей проведено у 60 крысят от куривших и некуривших крыс Wistar. Беременные крысы подвергались воздействию табачного дыма (по 8 часов в день, с 1-го по 20-й день гестации). Контрольные группы получали физраствор, опытные – препарат KK1 (в дозе 40 мкг/кг, интраназально, пятикратно через день в течение 10 дней). У потомства на 21-й день жизни определяли фагоцитарные показатели, уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), активность печеночных ферментов (аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ)), маркеры окислительного стресса (малоновый диальдегид (МДА), диеновые конъюгаты (ДК)) и антиоксидантные ферменты (супероксиддисмутаза (СОД), каталаза). Показано, что пренатальное воздействие табачного дыма у крысят: снижало фагоцитарный показатель, но повышало метаболическую активность нейтрофилов, увеличивало активность АСТ в сыворотке крови, активировало свободнорадикальное окисление (повышение МДА, ДК) с одновременным угнетением естественных механизмов антирадикальной защиты (снижение СОД и каталазы). Использование препарата КК1 способствовало: нормализации фагоцитарных показателей, снижению активности АСТ и восстановлению антиоксидантной защиты. Выявленные изменения указывают в пользу антиоксидантных свойств препарата КК1 при пассивном курении крыс, что является одним из важных аспектов иммунопротекторного действия исследуемого вещества. Механизм действия препарата КК1 может быть связан с влиянием на текучесть синаптических мембран, модуляцией рецепторных функций, процессами фосфорилирования белков и избыточного синтеза цитокинов. Положительный эффект по снижению продуктов свободно радикального окисления липидов и повышению активности каталазы подтверждает литературные данные об антиоксидантном и стресспротекторном действии препарата КК1. Препарат КК1 проявляет антиоксидантный и иммунопротекторный эффект, нормализуя негативные последствия пренатального воздействия табачного дыма у потомства крыс, что позволяет рекомендовать его использование при исследовании влияния факторов малой токсичности на организм экспериментальных животных.

В развитии нейровоспаления ведущую роль играют клетки микроглии. Активация микроглии приводит к формированию реактивных фенотипов, которые могут как способствовать развитию нейровоспаления, так и обеспечивать его разрешение. При активации микроглии происходит метаболическое репрограммирование или изменение активности путей метаболизма и содержания метаболитов, поддерживающих тот или иной фенотип. Возможность фенотипического переключения за счет метаболомного репрограммирования может иметь несомненный терапевтический потенциал, однако в настоящее время имеются ограниченные данные об изменении состава метаболитов и активности метаболических путей в клетках микроглии под действием нейровоспалительных факторов. В этой связи целью данной работы явилось проведение нетаргетного метаболомного исследования для оценки изменений профилей метаболитов в клетках линии микроглии SIM-A9 подвергнутых гипоксии, а также при активации TLR4. Профилирование метаболитов в экстрактах клеток, подвергнутых действию гипоксии или липополисахарида проводили с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии высокого разрешения, с последующим биоинформатическим анализом данных. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что гипоксическое воздействие, а также стимуляция TLR4 приводят к заметным перестройкам метаболизма клеток микроглии. При этом характер данных перестроек зависит от типа стрессорного воздействия и его длительности. Изменение активности путей метаболизма глутатиона и аргинина может служить маркером поляризации клеток микроглии после гипоксического воздействия. Активация TLR4 под действием липополисахарида приводит к модулированию путей, ассоциированных с энергетическим обменом, а также изменению путей метаболизма ароматических аминокислот. Можно заключить, что использованный в данной работе подход позволит в дальнейшем исследовать динамику метаболических изменений под действием провоспалительных факторов различной природы и детализировать их роль в метаболическом репрограммирования клеток микроглии на различных этапах развития нейровоспаления.

Резюме

Цель. Изучение иммуногенных свойств конъюгатов белка А с рецептор-связывающего домена (RBD) спайкового белка SARS-CoV-2 (вариант B.1.617.2, Delta) и их способности индуцировать специфический гуморальный иммунный ответ при интраназальном введении.

Материалы и методы. Конъюгаты рекомбинантного RBD (SARS-CoV-2, вариант Delta) с белком А Staphylococcus aureus получали с использованием EDC или Sulfo-SMCC (1:1 моль) с последующей очисткой гель-фильтрацией. Иммунизацию проводили на 80 мышах Balb/c (6 недель), разделенных на группы по 10 особей. Животным опытных групп двукратно с интервалом 14 дней вводили интраназально 20 мкл конъюгата (50 мкг RBD), контрольным группам - RBD внутримышечно или физраствор. Кровь забирали на 10-й день после бустинга. Титр специфических IgG определяли ИФА с использованием RBD в качестве антигена. Статистическую значимость оценивали с помощью U-критерия Манна-Уитни (GraphPad Prism 8.0, p<0.05).

Результаты. Интраназальное введение конъюгатов RBD с белком А (Con-S и Con-E) индуцировало высокие титры специфических IgG (до 10⁵), сопоставимые с внутримышечным введением RBD. Оба конъюгата показали статистически значимое усиление иммунного ответа по сравнению с интраназальным введением свободного RBD (p≤0.05). При этом наблюдалась гетерогенность ответа среди животных: часть мышей демонстрировала слабый иммунный ответ, что может быть связано с особенностями интраназального введения. 

Выводы. Конъюгаты RBD с белком А Staphylococcus aureus при интраназальном введении вызывают выраженный IgG-ответ, сравнимый с внутримышечной иммунизацией, демонстрируя адъювантные свойства белка А. Оба метода конъюгирования (Sulfo-SMCC и EDC) одинаково эффективны. Несмотря на вариабельность ответа, связанную с особенностями мукозального введения, результаты подтверждают перспективность использования белка А в разработке интраназальных вакцин против SARS-CoV-2.

Исследования последних лет показали, что у здоровых людей при физиологической норме могут циркулировать дважды позитивные (DP) Т-клетки в небольшом количестве. Эти Т-лимфоциты происходят от циркулирующих CD4⁺ и CD8⁺Т-лимфоцитов, но отличаются коэкспрессией CD4 и CD8 на своей поверхности. По выраженности экспрессии CD4 и CD8, DP Т-лимфоциты можно подразделить на две субпопуляции: CD4^brightCD8^dim и CD4^dimCD8^bright. Фенотипические и функциональные особенности этих субпопуляций в настоящее время до конца не изучены. Цель исследования – выявить фенотипические характеристики CD4^brightCD8^dim и CD4^dimCD8^brightТ-лимфоцитов периферической крови условно здоровых доноров в зависимости от экспрессии маркеров созревания. Фенотипирование проводилось при помощи проточной цитометрии с использованием антител против поверхностных антигенов человека: CD57 (конъюгирован с FITC), CD62L (конъюгирован с ECD), CD28 (конъюгирован с PerCP/Cy5.5), CD27 (конъюгирован с Pe/Cy7), CD4 (конъюгирован с APC), CD8 (конъюгирован с APC-AF700), CD3 (конъюгирован с APC-AF750), CD45RA (конъюгирован с Pacific Blue) и CD45 (конъюгирован с Krome Orange). Сравнение производилось при помощи непараметрического U-критерия Манна–Уитни. Результаты приводились в виде медианы и интерквартильного размаха – Me (Q_0,25-Q_0,75). Общий пул DP Т-клеток составляет в рамках общей популяции CD3⁺Т-лимфоцитов 0,73% (0,42-1,61) при общей концентрации 11 кл/1μL (6-20). Процентное содержание CD4^brightCD8^dim и CD4^dimCD8^brightT-клеток находилось в пределах 0,25% (0,18-0,44) и 0,29% (0,20-0,98) при концентрациях 4 кл/1μL (2-7) и 5 кл/1μL (2-12) соответственно. В Т-лимфоцитах с фенотипом CD4^brightCD8^dim преобладали клетки эффекторной памяти (CD45RA^-CD62L^-) и эффекторные клетки памяти, повторно экспрессирующие CD45RA (CD45RA⁺CD62L^-), тогда как в CD4^dimCD8^brightT-клетках преобладал фенотип центральной памяти (CD45RA^-CD62L⁺). Кроме того, в популяциях CD4^brightCD8^dim и CD4^dimCD8^brightT-клеток был отмечен пониженный уровень «наивного» фенотипа (CD45RA⁺CD62L⁺). Также было выявлено повышение экспрессии CD57 на поверхности CD4^brightCD8^dim Т-лимфоцитов с одновременным снижением CD27 и CD28 по сравнению с CD4⁺Т-клетками. В свою очередь, CD4^dimCD8^brightT-клетки увеличивают экспрессию CD28 и уменьшают экспрессию CD57 на своей поверхности по сравнению с CD8⁺Т-клетками. DP Т-лимфоциты обладают более зрелым фенотипом и зачастую представляют собой клетки памяти.

Известно, что во время беременности происходит перестройка иммунной системы матери, связанная с формированием специфической иммунной толерантности, направленной на сохранение плода от неблагоприятных иммунных реакций матери и в то же время на защиту матери и плода от патогенов. Супрессия адаптивного иммунного ответа матери компенсируется повышением роли естественного иммунитета, основными эффекторами которого являются нейтрофилы и моноциты/макрофаги. Апоптоз играет важную роль в период беременности, поскольку активированные клетки могут быть опасны для развивающегося плода. Гормоны беременности играют основную роль в этой перестройке. Гипоталамический гормон кисспептин-54 продуцируется синцитиотрофобластом плаценты и может оказывать эффекты на лейкоциты беременной женщины, поскольку они экспрессируют специфический мембранный рецептор кисспептина. Цель работы – оценка влияния кисспептина-54 в концентрациях, характерных для физиологической беременности, на фагоцитарную активность моноцитов и нейтрофилов, а также апоптоз мононуклеарных клеток периферической крови (МПК) женщин. Объект исследования: МПК, сепарированные моноциты и нейтрофилы, полученные от 10 здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста. Фагоцитарную активность оценивали по степени гашения биолюминесценции люминесцентного генно-инженерного штамма E. coli K12 TG1 lux⁺. Апоптоз лимфоцитов оценивали в суспензии МПК путем окрашивания аннексином-V и йодистым пропидием. Определяли количество клеток на ранней и поздней стадиях апоптоза в гейте лимфоцитов. Направленность эффектов кисспептина-54 на фагоцитоз зависит от типа клеток. Гормон угнетает фагоцитоз нейтрофилов, чей повышенный фагоцитарный потенциал может иметь фатальные последствия для развития плода. Прямо противоположный эффект кисспептин-54 оказывает на фагоцитоз моноцитов, которые являются основными эффекторно-регуляторными клетками маточно-плацентарного компартмента, выполняющие фетотрофические функции. Кисспептин-54 увеличивает количество клеток, находящихся в ранней и поздней стадиях апоптоза. Снижение фагоцитарной активности нейтрофилов связано с гормон-обусловленным апоптозом нейтрофилов, поскольку нейтрофилы терминально дифференцированные клетки, запрограммированные на апоптоз. По видимому, кисспептин-54 является фактором, который индуцирует апоптоз нейтрофилов в период беременности, что определяет снижение их фагоцитарной функции и предупреждает чрезмерную активацию, способную причинить вред матери и плоду. Таким образом, кисспептин-54 разнонаправлено регулирует функциональную активность моноцитов и нейтрофилов, обеспечивая баланс между защитой организма матери от инфекций и благоприятным развитием полуаллогенного плода.

Недоношенность одна из актуальнейших проблем во всем мире. Ежегодно около 10% всех детей рождаются раньше срока. Успехи и неудачи в течение неонатального периода у этой категории определяют основные показатели неонатальной и младенческой смертности и инвалидизации. Для выхаживания недоношенных детей требуется высокотехнологичная и высокозатратная по стоимости медицинская помощь. Несмотря на технологический прогресс, увеличивающийся с каждым годом объем теоретической базы знаний, изменяющий терапевтические подходы, растущий профессионализм клиницистов, не дают желаемого результата и у сверхнедоношенных детей итог выхаживания оставляют желать лучшего. Ключевым моментом в переходе от внутриутробного к внеутробному существованию является начало внешнего дыхания. Дыхание является одной из основных витальных функций нашего организма, и основные усилия по стабилизации недоношенного ребенка при рождении направлены именно на ее протекцию. Поэтому среди патологических состояний у недоношенных детей особое место занимают респираторные расстройства, включающие целый ряд заболеваний, нарушающих нормальное течение неонатального периода и характеризующихся негативными последствиями, определяющими качество жизни недоношенного ребенка и его семьи в последующем. При преждевременном родоразрешении на организм ребенка воздействуют различные пренатальные факторы, способствующие возникновению морфофункциональной незрелости и нарушению адаптационных механизмов. В результате такие новорожденные нуждаются в значительно большем объеме высокотехнологичной медицинской помощи для успешной адаптации к внеутробной жизни. Несмотря на все достигнутые успехи в протекции дыхательной функции у новорожденных путей, проведение респираторной поддержки может запускать патологические каскады, замыкающие «патологический круг», приводящий к хронизации заболевания. Основные механизмы повреждения реализуются через иммунологически опосредованные и воспалительные реакции. Патологические процессы, лежащие в их основе, запускаются еще во внутриутробном периоде вследствие дисбаланса между про- и противовоспалительными механизмами, что приводит к нарушению созревания легочной ткани. После рождения иммунная система недоношенного ребенка имеет свои особенности, сформированные антенатально. Ее состояние, условно обозначаемое как «иммунодефицит незрелости», требует дальнейшего изучения для более глубокого понимания его механизмов.

Последние десятилетия характеризуются ростом ожирения среди детей и подростков, которое является основным фактором риска хронических заболеваний, включая сердечно-сосудистые, сахарный диабет, а также эндокринопатии, приводящие к нарушению менструального цикла и бесплодию в репродуктивном периоде. В условиях избытка питательных веществ макрофаги жировой ткани поляризуются в M1-фенотип и секретируют множество провоспалительных цитокинов и хемокинов, формирующих воспалительную реакцию за счет хемотаксиса иммунокомпетентных клеток, оказывающих воздействие на обмен веществ, приводя к снижению продукции противовоспалительных цитокинов, нарушению адипогенеза. Доказана тесная связь между ожирением и активацией факторов иммунной системы, как основной причины энергетического дисбаланса, однако их роль в генезе олигоменореи недостаточно изучена. Цель работы – анализ цитокинового статуса у девочек-подростков с ожирением и олигоменореей. В исследовании приняли участие 30 девочек-подростков с ожирением и олигоменореей (I группа). С целью сравнительной оценки было обследовано 23 пациентки с олигоменореей без признаков метаболического синдрома (II группа). В группу контроля вошли 20 практически здоровых пациенток. Уровень оментина в сыворотке крови определялся методом ИФА с использованием диагностических наборов BioVendor (Чешская Республика), уровень IL-6, MCP-1, IFNγ – BenderMedSystems (Австрия). Математическая обработка результатов исследования проводилась с использованием программы Statistica 10.0. Критерий Манна–Уитни использовался для определения различий между группами. Статистически значимыми были приняты значения p < 0,05. При ожирении происходит усиление экспрессии провоспалительных цитокинов и хемокинов, которые могут стимулировать сигнальные каскады, нарушающие процессы метаболизма жировой ткани. IL-6, MCP-1, IFNγ действуют как модуляторы, которые способствуют воспалению, что имеет решающее значение для возникновения резистентности к инсулину. Дискоординация процессов иммунорегуляции содействует прогрессированию воспалительного процесса и подтверждает роль иммунных факторов в генезе овариальной дисфункции у девочек-подростков. Лучшение понимания основных иммунопатологических процессов, сопровождающих ожирение у девочек-подростков, может оказаться полезным для прогнозирования олигоменореи и разработки потенциальных подходов к лечению.

Для пациентов с гипер-IgE-cиндромом характерны эозинофилия, низкие уровни маркеров воспаления, тяжелые деструктивные пневмонии, хронический кандидоз слизистых, тяжелый атопический дерматит, поражения скелета: остеопения и патологические переломы, сколиоз, поздняя смена молочных зубов. В основе патогенеза данного синдрома лежат дефекты трансдукции сигнала с цитокиновых рецепторов, которые могут быть вызваны мутациями в гене STAT3 (аутосомно-доминатная форма), ZNF341, DOCK8, PGM3 и CARD11 (аутосомно-рецессивная форма) и в генах, кодирующих субъединицы цитокиновых рецепторов (IL6ST и др.). Цель исследования заключалась в анализе субпопуляций лимфоцитов у пациентов с разными формами гипер-IgE-синдрома. В исследование были включены 9 пациентов с диагнозом «гипер-IgE-синдром». Субпопуляции лимфоцитов оценивали методом проточной цитометрии, IgE общий – иммунотурбидиметрии, секвенирование ДНК – NGS. У пациентов были обнаружены мутации в разных экзонах гена STAT3 и в гене IL6ST. Не было обнаружено статистически значимых различий между субпопуляциями СD3 Т-лимфоцитов: СD4 Т-хелперами наивными и памяти, CD8 Т-цитотоксическими наивными и памяти, ранними тимическими эмигрантами, Т-регуляторными клетками, Т-хелперами 1-го и 2-го типа по сравнению с контрольной группой (p > 0,05). Однако субпопуляция T-хелперов 17 была значительно снижена, как по относительному (p < 0,001), так и по абсолютному количеству (p = 0,003) только у пациентов с мутациями в гене STAT3. У пациентов с гипер-IgE-синдромом было снижено как относительное (р < 0,001), так и абсолютное количество непереключенных (р = 0,001) и переключенных В-клеток памяти (p = 0,007). Также наблюдалось снижение относительного количества плазмабластов (p = 0,022) и активированных В-лимфоцитов (р = 0,001). Количество Т-хелперов 17 отличалось у пациентов с разными формами гипер-IgE-синдрома. Снижение В-клеток памяти было характерно для всех типов мутаций. Используемый нами метод оценки T-хелперов 17 показал свою диагностическую эффективность. Наблюдались отличия в клинической картине и тяжести течения заболевания в зависимости от домена белка STAT3, в котором произошла мутация. Однако для того, чтобы сделать окончательные выводы по данному предположению, необходимы дальнейшие исследования с большим количеством пациентов.

Интерлейкины играют ключевую роль в формировании различных эндотипов бронхиальной астмы, что определяет особенности клинического течения заболевания и эффективность терапии. Конденсат выдыхаемого воздуха (КВВ) представляет собой перспективный неинвазивный материал для оценки локального воспаления дыхательных путей при бронхиальной астме, однако данные о возможности определения цитокинов в КВВ у детей ограничены. Цель исследования – установить возможность детекции и диагностическую значимость IL-4, IL-5, IL-13 и IL-17А в КВВ у детей с бронхиальной астмой с использованием высокочувствительного мультиплексного анализа. Обследовано 169 детей в возрасте 6-17 лет (104 с бронхиальной астмой и 65 здоровых). КВВ собирали с помощью RTube (Respiratory Research, США), проводили концентрирование образцов и определяли уровни интерлейкинов методом мультиплексного анализа на платформе MAGPIX (Luminex, США). Анализ концентраций интерлейкинов в КВВ показал, что у детей с БА наблюдаются статистически значимые изменения по сравнению с контрольной группой. У детей с астмой выявлено значимое повышение частоты детекции IL-13 (53,9% против 30,8%, p = 0,003) и IL-17А (57,7% против 27,7%, p = 0,001) по сравнению с контролем. Частота выявления этих цитокинов прогрессивно увеличивалась с нарастанием тяжести заболевания, достигая для IL-13 72,7% и для IL-17А 63,6% при тяжелой астме. Полученные результаты демонстрируют возможность детекции ключевых цитокинов в КВВ у детей с БА использованием высокочувствительного мультиплексного анализа после предварительного концентрирования образцов. Определение IL-13 и IL-17А в КВВ может рассматриваться как потенциальный неинвазивный биомаркер тяжести бронхиальной астмы у детей. Для внедрения метода в клиническую практику необходимы дальнейшие исследования с большим количеством пациентов и стандартизация процедуры концентрирования образцов. Полученные данные демонстрируют перспективность использования КВВ для неинвазивной оценки локального воспаления дыхательных путей у детей с БА.

Разработка новых методов лечения острого панкреатита (ОП) должна осуществляться с учетом воздействий на ключевые процессы иммунопатогенеза заболевания. Моноциты являются клетками, через которые при ОП реализуются механизмы врожденного иммунитета (прежде всего, провоспалительные) и индукция реакций адаптивного иммунитета (как провоспалительные, так и противовоспалительные). Цитофлавин начинает применяться при лечении ОП, доказано его имунокоррегирующее действие, но отсутствуют данные о его влиянии на функциональную активность моноцитов. Целью исследования явилось изучение особенностей влияния цитофлавина при комплексном лечении ОП на экспрессию CD184 и CD195 на различных субпопуляциях моноцитов. Обследовано 35 больных (средний возраст 48,7±5,8 года) средней и тяжелой степени тяжести ОП по шкале первичной экспресс-оценки. Все больные с помощью простой рандомизации были разделены на две группы: получившие комплексную терапию без цитофлавина (18 пациентов) и с цитофлавином (17 пациентов). Забор крови у больных ОП осуществлялся дважды: до начала терапии и через 14 суток лечения. В качестве контроля обследовано 32 здоровых людей аналогичного возраста. Субпопуляционный состав моноцитов, в том числе экспрессирующих CD184 (CXCR4) и CD195 (CCR5), исследовали методом проточной цитометрии с использованием прямой иммунофлуоресценции цельной периферической крови. До начала лечения у больных ОП обнаружено увеличение количества CD14+CD16+ моноцитов, уровень которых нормализуется после лечения с цитофлавином. У больных ОП до начала лечения повышается количество CD14++CD16-CD184+ и CD14+CD16+CD184+ моноцитов, а также уровень экспрессии рецептора на данных субпопуляциях. Содержание моноцитов с данными фенотипами не меняется после стандартного лечения, но значительно возрастает при лечении с цитофлавином (при снижении уровня экспрессии). У больных ОП до начала лечения увеличивается содержание всех субпопуляций моноцитов, экспрессирующих CD195. Только после лечения с цитофлавином уровень CD195+ «классических» и «переходных» моноцитов снижается, тогда как уровень экспрессии CD195 возрастает на мембранах «переходных» и «неклассических» моноцитов. Таким образом, воспалительная реакция у больных ОП до начала лечения характеризуется наличием компенсаторных процессов за счет повышения содержания моноцитов с противовоспалительной функцией. В острый период заболевания (до начала лечения) большее количество моноцитов экспрессирует CXCR4 и CCR5. Общепринятая терапия не приводит к изменению субпопуляционного состава моноцитов и количества клеток с экспрессией CXCR4 и CCR5. После комплексного лечения с цитофлавином субпопуляционный состав моноцитов нормализуется, а также наблюдается перераспределение мигрирующих моноцитов: снижается содержание провоспалительных клеток и повышается уровень клеток с противовоспалительной и антигенпрезентирующей активностью.

Врожденный иммунитет играет критическую роль в раннем распознавании и реагировании на патогены, его изучение при абдоминальном сепсисе (АС) имеет значение для патогенеза, ранней диагностики, прогноза, терапевтической стратегии. Цель – исследовать показатели врожденного иммунитета в динамике АС с различным исходом. Исследование проведено на 64 больных с АС в возрасте 32-82 лет, которых разделили на группы: группа 1 (n = 46) с благоприятным исходом и группа 2 (n = 18) с летальным исходом. Исследования проводили на 1-е, 3-и и 7-е сутки. Общее количество лейкоцитов исследовали на гематологическом анализаторе Sysmex XT-1800i/XT-2000i (Япония), функциональную активность нейтрофилов – по активности и интенсивности фагоцитоза, кислородзависимому метаболизму. Для статистического исследования использовали программу Statistica 10.0 for Windows. Установлено, что у пациентов с АС в динамике 1-7-х суток наблюдения независимо от исхода в крови увеличивается количество метамиелоцитов, палочкоядерных, сегментоядерных нейтрофилов; при неблагоприятном исходе АС нейтрофильный лейкоцитоз более выражен, увеличивается количество моноцитов и эозинофилов. У пациентов с АС независимо от исхода увеличивается поглотительная способность нейтрофилов крови, кислород-зависимый метаболизм в спонтанном режиме, угнетается кислород-зависимый метаболизм в индуцированном режиме; при неблагоприятном исходе АС наблюдается эскалация роста поглотительной способности нейтрофилов крови на 1-7-е сутки наблюдения, на фоне угнетения кислород-зависимого метаболизма нейтрофилов в спонтанном и индуцированном режимах преимущественно на 3-и и 7-е сутки наблюдения.

Серораспространенность SARS-CoV-2 является важным индикатором распространения коронавирусной инфекции, особенно среди групп населения с различным уровнем мобильности. Международные поездки могут способствовать переносу вируса и влиять на уровень коллективного иммунитета, однако степень этого влияния остается изученной недостаточно. В рамках данного исследования, проводившегося в Челябинске с 27.10.2020 по 30.01.2023, был выполнен анализ 660 проб на антитела IgM и 843 проб на антитела IgG с целью оценки серопозитивности жителей города в зависимости от наличия недавнего опыта международных поездок. Антитела к коронавирусной инфекции определялись методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием оборудования Multiskan FC и реагентов АО «Вектор-Бест», а анкетирование участников исследования помогло установить факт поездок и страны посещения. Результаты исследования показали тенденцию к более высокой серопозитивности IgG среди лиц, совершивших международные поездки (p = 0,07), хотя статистическая значимость не была достигнута. Общий уровень серопозитивности был выше для IgG (67,38%) по сравнению с IgM (32,73%), что может указывать на перенесенную инфекцию или вакцинацию в прошлом в выборке. Наибольшая серопозитивность IgG наблюдалась среди вернувшихся из Турции, Казахстана и Египта. Статистически значимых различий в серораспространенности между мужчинами и женщинами не обнаружено. Полученные результаты указывают на тенденцию к более высокой серопозитивности среди путешественников, что может свидетельствовать о повышенном риске инфицирования во время поездок. Однако отсутствие статистической значимости требует дальнейших исследований на более крупных выборках, а также с учетом вакцинационного статуса, динамики сероконверсии, временного профиля заболевания и повторных тестирований. Несмотря на указанные ограничения, данные исследования могут быть использованы для совершенствования мер эпидемиологического контроля и планирования мероприятий по профилактике COVID-19 и других респираторных инфекциях, в том числе и в условиях международного туризма.

Пандемия новой коронавирусной инфекции COVID-19, вызванная вирусом SARS-CoV-2, привела к далеко идущим последствиям. Вызываемые им изменения в макроорганизме могут сохраняться более 6-12 месяцев после окончания острой фазы заболевания, формируя постковидные нарушения иммунной системы. Пациенты, перенесшие острый COVID-19 как в легкой, так и в тяжелой форме, страдают от различных проявлений постковидного синдрома. Однако выраженность этих проявлений весьма вариабельна. Целью настоящего исследования стала оценка влияния степени поражения легких в остром периоде COVID-19 на выраженность клинических проявлений постковидного синдрома на примере иммуноопосредованных симптомокомплексов: аутоиммунного, пролиферативного и аллергопатологии. Обследован 131 пациент, перенесший инфекцию SARS-CoV-2. Для исследования использованы анамнестические данные из амбулаторных карт пациентов. С помощью метода ИФА-диагностики определялись IgA, IgM, IgG, специфичные к SARS-CoV-2, фрагменты комплемента C1q, C3a, C5a. В ходе исследований выявлена связь между тяжестью постковидного синдрома и тяжестью острого течения COVID-19. Вирус SARS-CoV-2 способен активировать комплемент, и активация эта сохраняется длительно (более полугода), что объясняет наличие клинических проявлений постковидного синдрома у лиц, перенесших легкую острую форму COVID-19 без поражения легких по данным компьютерной томографии и не имеющих выявленных нами ранее фенотипов поражения иммунной системы (врожденного звена – снижение экспрессии CD46 на Т-лимфоцитах и снижение экспрессии CD46 на NK-клетках, и приобретенного – снижение уровня Т-цитотоксических лимфоцитов и нарушение уровня В-клеток CD45⁺CD3^-CD19⁺CD5⁺CD27⁺). Полученные данные свидетельствуют о том, что обследование пациентов, имеющих постковидный синдром, должно проводиться не только путем оценки их клинических характеристик, но и путем изучения состояния иммунной системы таких пациентов с целью постановки правильного диагноза и назначения этиологической и патогенетической терапии, в том числе иммунотерапии. Аутоиммунные, пролиферативные и аллергические заболевания напрямую связаны с нарушениями иммунной системы. Обобщая результаты данного исследования, можно сделать следующие выводы: 1. Тяжесть аутоиммунных нарушений в постковидный период напрямую не связана с тяжестью заболевания, а в большей степени связана с базисной кортикостероидной терапией (ГКС) как для лечения аутоиммунных процессов, так и для лечения COVID-19. Если ГКС не используются при аутоиммунном тиреоидите, то их применение в остром периоде инфекции впоследствии снижало количество рецидивов. Тогда как при ревматоидном артрите ситуация обратная: применение ГКС в остром периоде инфекции у пациентов, уже находящихся на базисной кортикостероидной терапии, впоследствии приводит к увеличению количества рецидивов у пациентов, перенесших ковидный. 2. У пациентов, перенесших COVID, выявлена тенденция к увеличению наиболее клинически тяжелой аллергопатологии: во-первых, во всех группах (52%) в постковидный период участились обострения таких патологий, как отек Квинке, крапивница, анафилаксия, васкулит, альвеолит, бронхиолит. Все это свидетельствует о том, что на ухудшение состояния этих пациентов в постковидный период повлияла перенесенная инфекция, вызванная вирусом SARS-CoV-2. Аллергические поражения кожи оказались на втором месте по частоте обострений – около 28%. 3. Отмечается тенденция к увеличению частоты обострений пролиферативных заболеваний у пациентов с более тяжелыми формами острой инфекции COVID-19. Также следует отметить, что процент таких пациентов достаточно высок – от 31,6% до 48%. 4. Вирус SARS-CoV-2 может влиять на активацию системы комплемента, что объясняет наличие клинических проявлений постковидного синдрома у лиц, перенесших острую форму COVID-19 в легкой форме без поражения легких по данным компьютерной томографии и не имеющих выявленных нами ранее фенотипов поражения иммунной системы. Полученные данные свидетельствуют о том, что обследование постковидных больных должно проводиться не только путем оценки их клинических характеристик, но и путем исследования состояния иммунной системы таких пациентов с целью постановки правильного диагноза и назначения этиологической и патогенетической терапии, в том числе иммунотерапии.

Профилактика заболеваний, вызванных вирусом ветряной оспы (ВВО), с помощью вакцинации стоит в приоритете программы Всемирной организации здравоохранения по искоренению социально значимых и демографически важных инфекций, интегрируясь в программу развития Здравоохранения Российской Федерации, одним из направлений которой является включение вакцинации против ветряной оспы в Национальный календарь профилактических прививок. Математическая модель на основе эпидемиологических данных прогнозирует, что охват вакцинацией должен составлять не менее 60%, чтобы обеспечить существенное снижение заболеваемости ветряной оспой, а также при сохранении адекватного уровня охвата, вероятно, снизится заболеваемость и опоясывающим герпесом в долгосрочной перспективе. Успешное применение живых вакцин для профилактики заболеваний, связанных с ВВО, расширяет количество зарегистрированных вакцин и стран, включивших вакцинацию в национальные программы иммунизации. Разработка отечественной вакцины является необходимым условием в рамках реализации программы импортозамещения. НИИВС им. Мечникова были выделены и охарактеризованы дикие штаммы ВВО, которые могут быть использованы для создания вакцин. Стандартными методами изучения эффективности живых вакцин против вируса ветряной оспы являются определения параметров адаптивного иммунитета по таким показателям, как общий уровень антител к ветряной оспе (GMI), средние геометрические титры антител (GMT) в определенных временных промежутках, средний геометрический кратный прирост (GMFI) антител к ВВО в тот же период времени, уровень серопозитивности (определяется как процент субъектов, у которых титр антител ≥ 1:8). Однако оценка по параметрам влияния на врожденный иммунитет не изучается рутинно, только в рамках научных исследований. Для оценки врожденного иммунного ответа, как один из вариантов исследования эффективности вакцинации, можно использовать экспрессию генов Toll-подобных рецепторов (TLR) в ответ на введение вакцин. Гены TLR кодируют рецепторы, распознающие структурные компоненты РНК- и ДНК-содержащих вирусов, в том числе вируса ветряной оспы. Уровни экспрессии TLR2, TLR4, TLR9, в свою очередь, являются маркерами активности врожденного иммунитета, которые крайне важны в ответ на введение вакцин. В ходе данной научной работы штаммы вируса ветряной оспы, полученные в лаборатории НИИВС Мечникова, были оценены на способность индуцировать врожденный иммунный ответ по маркерам TLR2, TLR4 и TLR9. Полученные результаты позволили выделить оптимальный экспериментальный образец для дальнейшего изучения в направлении получения эффективной вакцины против инфекций, вызываемых вирусом ветряной оспы.

Вакцинация против вируса эпидемического паротита значительно снизила, но не устранила заболеваемость этой инфекцией. Периодически происходят подъемы заболеваемости даже среди населения с высоким уровнем охвата прививками. Иммунитет к вирусу эпидемического паротита чаще оценивают по уровню специфических антител в сыворотке крови, однако известно, что для противовирусной защиты важнее Т-клеточный иммунитет. Цель работы – сопоставить два метода оценки клеточного иммунитета к антигенами вируса эпидемического паротита у интактных и переболевших этой инфекцией взрослых. Обследованы 20 взрослых, перенесших эпидемический паротит (группа 1) и 17 человек, не болевших и не прививавшихся от этой инфекции (группа 2). Антитела к вирусу эпидемического паротита определяли методом ИФА. Клеточный иммунитет оценивали методом ELISpot и по проценту CD8^hiCD107a⁺ лимфоцитов после распознавания антигенов вируса паротита. Ни у оного обследованного группы 2 не было обнаружено ни IgG-антител, ни клеточного иммунитета методом ELISpot или по проценту CD8^hiCD107a⁺. В группе 1 у 2 из 20 человек не обнаружили IgG-антител к вирусу эпидемического паротита, а 18 человек имели такие антитела разного уровня. Методом ELISpot у 10 человек обнаружен высокий уровень клеточного иммунитета к вирусу паротита (9,44±1,27) и еще у 10 человек выявлен низкий уровень (3,44±0,54). По экспрессии CD107a на CD8^hiлимфоцитах не выявлен клеточный иммунитет к вирусу паротита у 4 человек из 20, но обнаружены антитела к этому вирусу, еще у 4 человек обнаружен низкий уровень (2,35 (1,9-2,86) %), а у 12 человек – высокий уровень клеточного иммунитета к вирусу паротита (7,72-14,24) %). Рассчитан уровень cut-off = 3,76%, разделяющий со 100% чувствительностью и специфичностью высокий и низкий уровень клеточного иммунитета на антигены вируса паротита. Сравнение метода ELISpot и определения экспрессии молекул CD107a на CD8^hi показало отрицательную корреляцию r = -0,81, что связано, во-первых, с разными популяциями, участвующими в реакциях клеточного иммунитета, выявляемыми этими двумя методами, а во-вторых, в ELISpot оцениваются продуценты IFNγ, а по экспрессии CD107a – клетки, ответившие на распознавание антигена цитотоксической атакой. Оба метода пригодны для исследования клеточного иммунитета на антигены вирусов паротита.

Рассеянный склероз (РС) – это хроническое прогрессирующее нейродегенеративное аутоиммунное заболевание нервной системы, которое характеризуется появлением в головном и спинном мозге диссеминированных очагов демиелинизации, в составе которых обнаруживаются различные популяции иммунных клеток, включая CD8⁺Т-лимфоциты. В настоящее время общий пул CD8⁺Т-клеток принято разделять на три ключевых подтипа – Tc1, Tc2 и Tc17, которые принимают участие в реализации воспалительных реакций по трем ключевым типам и различаются по своим функциональным, а также фенотипическим характеристикам. Баланс между цитолитическими Tc1, с одной стороны, и «цитокин-продуцирующими» Tc2 и Tc17, с другой, играет важную роль в развитии различных патологических состояний, включая аутоиммунные заболевания. Целью исследования был анализа субпопуляционного состав CD8⁺Т-клеток периферической крови у 25 пациентов с рецидивирующе-ремиттирующим течением РС и 24 условно здоровых добровольцев, соответствующих по полу и возрасту группе РС. Для выявления основных субпопуляций CD8⁺Т-клеток применяли проточную цитометрию, при помощи которой определяли относительное и абсолютное содержание Tc1 (CCR6^-CXCR3⁺), Tc2 (CCR6^-CXCR3^-), Tc17 (CCR6⁺CXCR3^-) и Tc17.1 (CCR6⁺CXCR3⁺) клеток, а также их распределение в рамках «наивных» клеток (CD45RA⁺CD62L⁺), клеток центральной (СМ) и эффекторной (ЕМ) памяти (с фенотипами CD45RA^-CD62L⁺ и CD45RA^-CD62L^- соответственно), а также эффекторных клеток популяции TEMRA (CD45RA⁺CD62L^-). Было показано, что при РС в периферической крови достоверно снижалось относительно содержание Тс1-клеток, а относительное и абсолютное содержание Тс17 и Тс17.1 достоверно возрастало относительно значений контрольной группы. Более того, при анализе уровня Тс17-клеток нами было отмечено достоверное увеличение их процентного содержания в рамках всех исследованных стадий созревания CD8⁺Т-лимфоцитов, циркулировавших в периферической крови пациентов с РС. Причем различия с группой контроля особенно ярко проявлялись в случае популяций CD8⁺Т-лимфоцитов, способных мигрировать в воспаленные ткани – ЕМ и TEMRA (11,66% (4,75-14,69) против 2,45% (1,48-3,89) и 4,91% (3,68-8,63) против 0,41% (0,11-1,30) соответственно, при р < 0,001 для обеих популяций клеток). Полученные нами результаты указывают на важную роль Тс17-клеток в патогенезе РС, что может в дальнейшем применяться для разработки новых способов диагностики и терапии данного заболевания.

Резюме

Сложные механизмы функционирования тимуса воздействуют на структурный матрикс, способствуя постепенному накоплению генетических мутаций, изменению экспрессии генов и преждевременному иммуностарению. Исследование ранних тимических мигрантов (RTE) необходимо для выявления возможных диагностических биомаркеров и потенциальных контрольных точек аутоиммунных заболеваний. Объектом исследования являлись образцы периферической крови пациентов с ревматоидным артритом (РА), псориатическим артритом (ПсА), псориазом (ПС) и сопоставимых по возрасту условно здоровых доноров. Цель исследования: оценить соотношение недавно мигрировавших из тимуса клеток и наивных Т-регуляторных клеток на периферии в норме и при аутоиммунной патологии. Методом проточной цитофлуориметрии в периферической крови определяли относительное количество недавних тимических мигрантов CD4+CD45RA+CD31+ (RTE) и среди них число Foxp3+ Т-регуляторных клеток (Treg). Кроме того, по внутриклеточному содержанию Ki-67 выявляли число пролиферирующих клеток в исследуемых субпопуляциях. Анализ показал, что число RTE снижено в группе пациентов с РА и пациентов с ПсА относительно группы доноров (17,3 %, 18,6 % vs 23,6 %) и достоверно не изменяется у пациентов с псориазом. При этом по числу пролиферирующих клеток достоверных отличий между группами не было зафиксировано. Также не было выявлено отличий при анализе числа Treg среди CD4+CD45RA+CD31+ лимфоцитов между донорами и пациентами с аутоиммунными заболеваниями. Уровень пролиферации Т-регуляторных клеток у пациентов с псориатической патологией был сопоставим с донорскими значениями, а при РА наблюдалась тенденция к увеличению числа пролиферирующих Foxp3+ клеток относительно доноров. Также у пациентов с РА число пролиферирующих наивных Foxp3+ Treg было достоверно выше числа пролиферирующих RTE (15,8% vs 3,1%, p<0,05, соответственно). Снижение относительного количества недавних мигрантов из тимуса при аутоиммунных заболеваниях может быть связано с активацией Т-лимфоцитов и увеличением доли центральных Т-клеток памяти, что было подтверждено ранее. Число Тreg среди RTE и уровень их пролиферации у пациентов с псориатической патологией, сопоставимых с донорскими значениями, свидетельствует об отсутствии нарушений в генерации Т-регуляторных клеток в тимусе. Неоднозначные результаты, полученные у пациентов с РА, имеющие возможные перспективы в диагностике и терапии, нуждаются в дополнительном подтверждении на большей выборке пациентов.

Роль микробиоты легких при туберкулезе привлекает все больше внимания, особенно в контексте взаимодействия с иммунной системой и поддержания системного хронического воспаления. Микроорганизмы, входящие в состав локальной микробной среды туберкулезных очагов, могут не только формировать специфические иммунные сигналы, но и участвовать в иммунопатогенезе инфекции за счет перекрестных взаимодействий с иммунной системой хозяина. В рамках ранее проведенного масштабного микробиологического скрининга факультативно-анаэробной микробиоты туберкулезных очагов нами были выделены два бактериальных штамма – Corynebacterium kefirresidentii и Staphylococcus epidermidis, обнаруженные в казеозном содержимом туберкулем. С учетом их микробиологических и биохимических характеристик, а также выявленной устойчивости к ряду противотуберкулезных препаратов, эти микроорганизмы рассматриваются как элементы патобиоты, способные участвовать в поддержании локального воспалительного процесса при туберкулезе. Клеточные лизаты данных микроорганизмов применялись в качестве источников потенциальных антигенов для оценки иммунного ответа. В настоящем исследовании был разработан и апробирован лабораторный подход для сравнительной оценки гуморального иммунного ответа к компонентам неспецифической микробиоты туберкулезного очага. Анализ проводился методом полуколичественного иммуноферментного анализа с использованием образцов сыворотки крови пациентов с ТБ легких (n = 90) и здоровых доноров (n = 90). Серопревалентность и уровень специфических IgG к C. kefirresidentii оказались достоверно выше у пациентов с туберкулезом по сравнению с контрольной группой (p < 0,05), что может свидетельствовать о вовлеченности данного микроорганизма в иммунопатогенез заболевания. Напротив, для S. epidermidis статистически значимых различий между группами не выявлено, что, вероятно, связано с его широкой популяционной распространенностью как кожного комменсала. При этом значение иммунного ответа к S. epidermidis в контексте туберкулеза ранее практически не рассматривалось, хотя существуют данные о роли отдельных штаммов данного вида в патогенезе распространенных дерматологических заболеваний. Обнаруженная положительная корреляция между уровнями антител к обоим микроорганизмам, характерная только для пациентов с туберкулезом (p = 0,001), может свидетельствовать о патологическом характере иммунного взаимодействия при туберкулезе легких. Полученные результаты подчеркивают значимость изучения гуморального ответа к микробиотным компонентам в контексте туберкулеза и расширяют представления об иммунных механизмах, сопровождающих инфекционный процесс.

Развитие посттравматического стрессового расстройства у комбатантов реализуется посредством формирования системных дезадаптивных аллостатических реакций и сопровождается нарушениями соматического и психического уровня, в виде возвратных переживаний перенесенных психотравмирующих событий, необъяснимой тревоги, гнева, вины, когнитивных расстройств, психосоматических астено-вегетативных проявлений. Цель исследования – изучение нейромедиаторного обмена и провоспалительных цитокинов при посттравматическом стрессовом расстройстве у ветеранов современных войн. Обследовано 45 ветеранов специальной военной операции на территории Украины с наличием подтвержденного диагноза ПТСР. Группу сравнения составили 25 ветеранов II Чеченской военной кампании. Контрольную –20 здоровых военнослужащих, не принимавших участия в боевых действиях. Уровни компонентов нейромедиаторного обмена в крови определяли при помощи тест-систем фирмы Cloud-Clone Corp. (Китай). Кинуренин (нг/мл) тест – системой Immunodiagnostic AG (Германия). Концентрацию IL-1β (пг/мл) иммуноанализаторе Luminex Magpix 100 (США). Сравнение данных проводили с помощью программы SPSS. При ПТСР у ветеранов СВО значимо снижалась концентрация серотонина, триптофана и кинуренина, на фоне повышения транспортера серотонина и IL-1β. В группе ветеранов второй Чеченской кампании отмечено снижение серотонина и повышение транспортера серотонина в сравнении с референсной группой на фоне клинических проявлений дезадаптации в виде астено-вегетативных и соматоформных расстройств. Дефицит серотонина является ключевым фактором развития тревоги, депрессии, аффективных расстройств у комбатантов при ПТСР. Концентрация серотонина при стресс-индуцированной патологии снижается за счет дефицита триптофана и инактивации транспортером в синаптической щели. Активация метавоспалительных реакций на территории ЦНС приводит к снижению уровня кинуренина, усилению нейротоксических реакций, за счет факторов, вызывающих апоптоз астроглии, нейронов и окислительный клеточный стресс. Формирование стресс-индуцированной патологии у ветеранов современных войн сопровождается изменением содержания продуктов нейромедиаторного обмена, изменяющихся в условиях провоспалительного профиля крови.

Данные эксперимента свидетельствуют о роли Wnt/β-catenin сигналинга при прогрессировании рака яичников и устойчивости к химиотерапии. Построение прогностической модели риска исхода рака яичников на основании совокупности количественных показателей в сыворотке крови компонентов Wnt-сигналинга позволит дифференцировать стадии распространенного рака яичников и оценить риск метастазирования. Целью исследования была оценка прогностической значимости циркулирующих молекул Wnt-сигналинга – β-catenin и WISP1, IL-8 при распространенном раке яичников. В плазме крови 30 первичных пациенток с распространенным раком яичников III-IV стадии по FIGO методом ИФА оценивали уровень IL-8, β-catenin и WISP1 (пг/мл). Все обследованные были разделены на группы: I – платинорезистентная; II – платиночувствительная. В качестве контроля использовали плазму крови соматически здоровых женщин. Статистическая обработка проводилась с использованием Statistica 13. Анализ времени без прогрессирования пациентов проводился методом регрессии Кокса и Каплана–Мейера. Для выделения категорий на основе значений, используемых в прогнозировании, определяли точку разделения (cut-point) (Jamovi 2.4.14). Установлено значимое, по сравнению с контролем, повышение уровня β-catenin на III и IV стадиях заболевания. При этом не установлено значимых различий между изученными показателями в зависимости от чувствительности к стандартной химиотерапии. Мультивариантная модель Кокса показала возможность оценки риска развития IV стадии рака яичников по уровню β-catenin в плазме крови (р = 0,033). При этом риск развития IV стадии рака яичников возрастает при одновременно повышенных уровнях β-catenin (более 28,1 пг/мл) и WISP1 (более 445 пг/мл) в плазме крови (R² = 0,451, χ² = 28,4, р = 0,001). Установлено резкое увеличение уровня сывороточного IL-8 на IV стадии (cut-point = 87,3 пг/мл, р = 0,001), и медиана времени без прогрессирования составляет 9,8 месяца [95% ДИ 8,1-14]. При повышении циркулирующего IL-8 на 1 пг/мл отношение рисков увеличивается в 1,02 раза (р < 0,001). Таким образом, установленные уровни циркулирующих в крови IL-8, β-catenin могут быть рассмотрены как прогностические факторы при оценке прогрессирования рака яичников. При этом для дифференциальной диагностики III и IV стадий рака яичников статистическую значимость совместно демонстрировали β-catenin и WISP-1 плазмы крови.

Сердечно-сосудистые заболевания продолжают оставаться одной из основных глобальных проблем мировой системы здравоохранения, с сохраняющимся стабильно высоким уровнем распространенности и смертности. В патогенезе и прогрессировании кардиоваскулярных заболеваний решающую роль играют сложные межклеточные коммуникации, поддерживающиеся циркулирующими экзосомами, признанными важными участниками иммунопатогенеза атеросклероза и ишемической болезни сердца. Учитывая, что тетраспанины (CD63 и CD81) получили широкое признание в качестве экзосомальных маркеров, целью нашего исследования стало определение и оценка динамики сывороточной продукции экзосомальных тетраспанинов CD63 и CD81 в 1-е и 7-е сутки течения острого инфаркта миокарда. В проводимое исследование вошли 40 пациентов с острым инфарктом миокарда (ОИМ) в возрасте 54,29±5,45 года и 10 условно здоровых субъектов, сопоставимых по возрасту и полу. При ОИМ выявлено два типа динамики тетраспаниновой продукции при остром ишемическом процессе в миокарде. 1-й тип, характеризующийся исходно низкими значениями тетраспанина CD63 по сравнению со здоровыми лицами и сопровождающийся увеличением выработки/высвобождения экзосомального CD63 на 7-е сутки; 2-й тип – с более высокими значениями CD63, превышающими показатели здоровых лиц в 1-е сутки патологического процесса со снижением их концентрации к 7-м суткам ОИМ. Проведенный нами корреляционный анализ тетраспанина CD63 позволил установить связи с возрастом, уровнем холестерина, ЛПНП, триглицеридов, а также с числом тромбоцитов и лейкоцитов. Уровень CD81 у пациентов с ОИМ сыворотке крови был достоверно ниже, чем у здоровых лиц. Установлены особенности динамики продукции, позволившие нам классифицировать пациентов по типам: 1-й тип – с возрастанием концентрации экзосомального CD81 в сыворотке и последующим достижением целевого уровня тетраспанина, характерного для здоровых лиц; 2-й тип – со снижением концентрации по сравнению с исходным уровнем, что сочеталось с более высокой частотой неблагоприятных сердечно-сосудистых событий. Проведенный корреляционный анализ сывороточного CD81 позволил установить корреляционные связи с уровнем лейкоцитов и скоростью оседания эритроцитов, и степенью ожирения. Экзосомальный профиль циркулирующих тетраспанинов CD63 и CD81 у лиц с ОИМ отличается по своим количественным характеристикам от здоровых субъектов, а также характеризуется различными типами динамики тетраспаниновой продукции в течение первой недели госпитального периода инфаркта миокарда.

Целью работы было определение различий в клинической картине и иммунологическом статусе у больных с острым коронарным синдромом и постковидным синдромом (ПКС) с учетом уровня TREС в периферической крови. Обследовано 32 пациента в возрасте от 40 до 65 лет с ОКС и перенесенным ранее COVID-19 от 6 до 18 месяцев. Всем пациентам выполнялась коронароангиография и проводилось стентирование коронарных артерий. Для определения уровней TREC в периферической крови использовали набор реагентов TREC/KREC-AMP PS (ФБУН НИИ Пастера, Санкт-Петербург). Для определения изучаемых субпопуляций лимфоцитов периферической крови использовали реактивы компании Beckman Coulter (США) – TetraChrome. Анализ образцов исследовали на проточном цитофлуориметре Navios™ (Beckman Coulter, США). Из числа пациентов с ОКС и ПКС содержание TREC определено 32 больным, из них с нестабильной стенокардией было 28 лиц, а с острым инфарктом миокарда без подъема сегмента ST – 3. Пациентов разделили на группы в зависимости от содержания TREС: с пониженным уровнем TREС (1-я группа) и нормальным (2-я группа). Что касается KREC, то следует отметить, что только у одного больного из исследуемых был снижен показатель, у остальных в пределах нормы, поэтому в нашей работе у лиц с ОКС и ПКС мы не нашли влияние KREC на их клинические и иммунологические особенности. лиц со сниженными TREC регистрировалось меньшее относительное и абсолютное число Т-хелперов (р < 0,01), был ниже иммунорегуляторный индекс (р < 0,01). В то же время отмечалось в этой группе пациентов увеличение относительного (р < 0,01) и абсолютного числа Т-цитотоксических клеток (р < 0,05), а также процентного содержания Т-NK-лимфоцитов (р < 0,05). Также у больных 1-й группы имелась тенденция к повышению NK-лимфоцитов и снижению В-лимфоцитов (CD3^-CD19⁺). У пациентов с ОКС и ПКС со сниженными TREС наблюдалась более тяжелая клиническая картина, но учитывая, что выборка пока не очень значительная, планируется дальнейшее исследование таких больных и при большем наборе пациентов возможно добавятся достоверности тех изменений к которым выявлена пока тенденция. Выявление нарушений при помощи предложенных скрининговых методов требует формирования подходов для иммунокоррекции таких нарушений, которые в настоящее время в кардиологии только обсуждаются.

Реакция отторжения трансплантата, особенно у пациентов из группы «высокого риска», представляет собой сложный иммунологический процесс, который остается актуальной проблемой в офтальмологии. Роговица, несмотря на свою иммунологическую привилегированность, при определенных условиях (васкуляризация, воспаление) теряет защитные барьеры, что приводит к развитию иммунного ответа против трансплантата. Ключевыми механизмами отторжения являются активация T-лимфоцитов (CD4⁺ и CD8⁺), а также нарушение баланса между эффекторными и регуляторными иммунными клетками. Современные методы иммунологического мониторинга, включая анализ популяций T-клеток, позволяют своевременно выявлять признаки отторжения и корректировать терапию для улучшения долгосрочных результатов трансплантации. Цель исследования – проведение сравнительного цитометрического анализа популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов крови у пациентов после сквозной кератопластики. В исследовании участвовало 46 пациентов, перенесших сквозную кератопластику, которые были разделены на две подгруппы: с отторжением трансплантата (n = 25) и с успешным приживлением (n = 21), а также контрольная группа из 21 здорового добровольца. Иммунологический анализ включал забор венозной крови и количественное определение субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитометрии с использованием цитофлюориметра Navios (Beckman Coulter, США) и маркеров CD45⁺ и CD46⁺. Исследовались ключевые популяции лимфоцитов, включая T-хелперы, цитотоксические T-лимфоциты, NK-клетки, B-лимфоциты и активированные T-клетки, для выявления различий в иммунном статусе пациентов. Сравнительный цитометрический анализ популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у пациентов «высокого риска» с наличием реакции отторжения трансплантата показал ряд значимых изменений в виде увеличения общего количества T-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-цитотоксических, Т-лимфоцитов с маркерами ранней и поздней активации, что свидетельствует о ключевой роли T-клеточного иммунитета в механизмах развития поздних клеточных реакций отторжения. Полученные данные демонстрируют вовлеченность системных клеточных механизмов в реализацию реакции отторжения нативного аллотрансплантата роговицы и диктуют необходимость более детального изучения T-клеточного ответа иммунной системы. Цитометрическая оценка субпопуляций иммуноцитов дает возможность выявления ранних признаков иммунной активации, связанной с отторжением и открывает новые возможности для разработки персонализированных и эффективных стратегий лечения, направленных на улучшение исходов трансплантации.

Воспалительные заболевания челюстно-лицевой зоны и слизистой оболочки полости рта составляют большую часть комплекса симптомов, встречающихся у пациентов с иммунодефицитами. Цель исследования – оценить частоту встречаемости воспалительных заболеваний стоматологического профиля у пациентов с врожденными ошибками иммунитета. Исследуемая группа пациентов Свердловской областной клинической больницы № 1 и Областной детской клинической больницы (г. Екатеринбург) включала 64 человека с различными диагнозами первичных иммунодефицитов: комбинированные иммунодефициты, антительные дефекты, аутовоспалительные нарушения, дефекты фагоцитов, дефекты иммунной дисрегуляции, дефекты комплемента, не верифицированный диагноз с признаками иммунодефицитов. У всех пациентов проводился осмотр челюстно-лицевой области и слизистой оболочки полости рта. Выяснили, что лимфаденит челюстно-лицевой области, рецидивирующие стоматиты, язвы и хейлит характерны для всех исследуемых групп пациентов, кроме группы с дефектами комплимента. Наряду с этим, диагноз «кандидоз» выявлен в двух классификационных группах: у «комбинированных иммунодефицитов» (4,2% из подгруппы), «дефектов фагоцитов» (50% из подгруппы). Такая же частота встречаемости верхнечелюстного синусита: у пациентов с «антительными дефектами» (46% случаев из подгруппы), «аутовоспалительными нарушениями» (13% случаев из подгруппы) и абсцессов, флегмон челюстно-лицевой области: «аутовоспалительные нарушения» (13% случаев из подгруппы), «дефекты фагоцитов» (10% случаев из подгруппы). Самый высокий процент воспалительных стоматологических заболеваний у таких, как хейлит (36% из всей исследуемой группы), стоматит (33% из всей исследуемой группы) и лимфаденит ЧЛО (31% из всей исследуемой группы). У пациентов с «аутовоспалительными нарушениями» и «дефектами фагоцитов» был диагностирован максимальный «набор» исследуемых воспалительных заболеваний. При этом самое большое количество людей из этих групп (60% и 70% соответственно) имели рецидивирующие стоматиты и язвы. У единственного пациента с диагнозом «дефекты комплимента» стоматологические воспалительные заболевания не обнаружены. В ходе исследования установлены наиболее распространенные стоматологические проявления у пациентов с врожденными дефектами иммунитета, а именно лимфаденит челюстно-лицевой области, хейлит, стоматиты и язвы. Полученные данные могут служить основой для разработки диагностических критериев, направленных на раннее выявление иммунодефицитных состояний в стоматологической практике, что оптимизирует клиническую маршрутизацию пациентов.

Адекватная адаптация и функционирование в определенной среде обусловлены интеграцией нервной, эндокринной и иммунной систем. Выявление тех изменений в иммунной системе, которые формируются в условиях нарушения психоэмоционального состояния и могут быть использованы в качестве предикторов развития иммунопатологии, представляет особый интерес. Наибольший прикладной выход эти исследования могут найти в условиях наблюдения за когортой молодых практически здоровых взрослых в процессе их профессионального становления. Цель работы – продемонстрировать особенности адаптационных ресурсов иммунной системы военных студентов-медиков в динамике образовательного процесса. Обследованы студенты военного учебного центра (ВУЦ) первого (18 человек), третьего (31) и шестого (34) курсов, соответствующие I группе здоровья. Психологическое тестирование осуществляли с помощью методики Ч.Д. Спилбергера, адаптированной на русский язык Ю.Л. Ханиным, позволяющей дифференцировано измерять степень выраженности ситуативной и личностной тревожности как показателя устойчивости к стрессовым факторам. Для выявления особенностей социально-психологической адаптации к академической среде использовали опросник К. Роджерса и Р. Даймонда, рассчитывая интегральный показатель адаптации (СПА). Оценку иммунного статуса осуществляли с использованием стандартных методологических подходов системно-функциональной характеристики факторов врожденного и адаптивного иммунного ответа, содержание гормонов в сыворотке крови (тестостерон, кортизол, ТТГ, общий Т3, свободный Т4) оценивали методом ИФА. Интегральный коэффициент СПА продемонстрировал постепенное улучшение приспосабливаемости к академической среде: полная адаптация вывялена лишь у 40% первокурсников; у 80% третьекурсников, у 100% – на шестом курсе. Сравнение параметров иммунного статуса с референс-интервалами практически здоровых показало соответствие у всех обследованных студентов по большинству критериев. Исключение составляют данные первокурсников, где выявлено снижение числа цитолитически активных форм натуральных киллеров: % Gr⁺CD16⁺ (min-max) = 1-10; в контроле 3-15, а также уменьшение доли моноцитов, экспрессирующих на своей поверхности TLR4: CD14⁺CD284⁺ (min-max) = 5-22%, в контроле 10-25%), были отмечены статистически значимые отличия между наблюдаемыми группами в виде преобладания уровня тестостерона и трийодтиронина у студентов первого курса, тогда как показатели кортизола, тироксина и тиреотропного гормона находились на общем уровне у студентов разных курсов. Период психологической адаптации к учебному процессу в медицинском вузе менее успешен для первокурсников ВУЦ в сравнении с другими периодами наблюдения. Именно в этой группе снижены показатели иммунной системы, ответственные за процессы первичного иммунного реагирования, что формирует возможные предпосылки развития клинических проявлений иммунной дисфункции.